沈杰，章毅英，解春紅，龔方戚

(浙江大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院，浙江 杭州 310051)

川崎病患兒血漿吲哚胺2，3雙加氧酶含量的研究〔1〕

沈杰，章毅英，解春紅，龔方戚

(浙江大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院，浙江 杭州 310051)

目的：探究川崎病(KD)患兒血漿吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)含量變化與其發(fā)病的相關性。方法：選取2015年1月—2015年3月心血管內科住院的KD患兒20 例作為觀察組，另選擇20 例健康體檢兒童作為對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)分別檢測觀察組急性期及恢復期血漿IDO含量以及對照組血漿IDO含量，并進行比較。結果：觀察組KD患兒急性期IDO含量明顯增高，與對照組及恢復期IDO含量比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。觀察組恢復期IDO含量與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各組內男女不同性別之間血漿IDO含量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論：血漿IDO在川崎病患兒急性期含量增高，可能參與了KD患兒急性期免疫性炎癥反應。IDO的表達水平與性別無關。

川崎病；吲哚胺2，3雙加氧酶；酶聯(lián)免疫吸附試驗

川崎病(KD)，又稱黏膜皮膚淋巴結綜合征(MCLS)，其病因及發(fā)病機制迄今尚未完全闡明。大量臨床及流行病學資料提示KD可能是一種或多種廣泛分布的感染原在某些遺傳易感的個體中引起異常的急性自身免疫性血管炎綜合征，但導致免疫異常的調控因素仍不清楚[1]。吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)參與色氨酸(Trp)沿犬尿氨酸途徑的分解代謝，是這條代謝途徑中的限速酶。有研究發(fā)現(xiàn)，IDO參與多種疾病的免疫調節(jié)，如抗病毒免疫、自身免疫性疾病、腫瘤的免疫逃避以及移植免疫等[2]。本研究通過檢測KD患兒急性期及恢復期血漿IDO的含量與正常對照組比較，探討其臨床意義，為探索IDO是否參與KD的免疫性發(fā)病提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2015年3月心血管內科住院KD患兒20 例作為觀察組，其中男女各10 例，年齡7個月～5 歲。入選患者均符合美國心臟病協(xié)會定義的KD的診斷標準[3]。急性期定義為發(fā)病10 d內?；謴推诙x為急性期癥狀已消失、C反應蛋白(CRP)及血沉已降至正常范圍。選取同一時期來我院體檢的健康兒童20 例作為對照組，其中男女各10 例，年齡6個月～5 歲。兩組病例一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有入選者對本研究均知情同意。

1.2 檢測方法

空腹采靜脈血3 mL，以EDTA抗凝，混合10～20 min后，2 000～3 000 r/min離心20 min，收集上清，-20 ℃凍存?zhèn)溆?。參照人IDO酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒操作步驟進行操作，在450 nm波長測量吸光度(OD值)。以標準物制作標準曲線，樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結 果

2.1 觀察組KD患兒急性期IDO含量與其恢復期及對照組的比較

觀察組KD患兒急性期血漿IDO含量為(776.73±298.32) pg/mL，恢復期血漿IDO含量為(254.39±72.36) pg/mL，對照組兒童血漿IDO含量為(232.09±113.17) pg/mL，結果提示KD患兒急性期血漿IDO含量明顯增高，與對照組及恢復期比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。KD患兒恢復期IDO含量與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2 不同性別之間的血漿IDO含量比較

急性期男患兒IDO含量為(809.31±346.28) pg/mL，急性期女患兒IDO含量(744.15±256.15) pg/mL；恢復期男患兒IDO含量(269.05±88.77) pg/mL，恢復期女患兒IDO含量為(239.74±51.92) pg/mL；對照組男孩IDO含量為(235.88±110.62) pg/mL，對照組女孩IDO含量為(228.30±121.52) pg/mL，經統(tǒng)計分析各組內男女不同性別之間IDO含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

KD是一種病因不明的急性全身性自身免疫性血管炎，好發(fā)于5 歲以下嬰幼兒，亞裔發(fā)病率最高，病變主要累及中小動脈，尤其是冠狀動脈，可形成冠狀動脈擴張或冠狀動脈瘤，是成年后缺血性心臟病的危險因素之一。目前該病已取代風濕熱，成為發(fā)達國家或地區(qū)小兒后天性心臟病的首要原因。雖然該病自1967年首次報道以來各國已開展40多年的研究，但其病因及發(fā)病機制仍不十分清楚。近幾年的臨床和實驗研究一致認為KD是由一種或多種廣泛分布的外源性抗原觸發(fā)在某些遺傳易感的個體中引起異常的免疫反應，從而導致KD一系列特征性的臨床表現(xiàn)；免疫系統(tǒng)的異?；罨懊庖邠p傷性血管炎是KD的基本病理特征。在KD急性期，各種免疫細胞包括T細胞、B細胞及單核/巨噬細胞等被激活，促發(fā)眾多炎癥因子基因的表達，T細胞介導的異常免疫應答及細胞因子的級聯(lián)放大效應導致血管內皮功能障礙是KD血管炎性損傷的基礎。研究表明，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6、內皮素、P選擇素等的顯著升高在KD進展中發(fā)揮重要作用。臨床上KD急性期經大劑量靜脈用免疫球蛋白(IVIG)和口服阿司匹林治療，KD患兒中仍有5%并發(fā)冠狀動脈擴張或冠狀動脈瘤[1，4]。因此，探索與KD發(fā)病相關的免疫性血管炎癥反應機制將有助于尋找新的治療對策，改進治療方案，提高治愈率，減少并發(fā)癥，改善預后。

IDO是細胞內一種含亞鐵血紅素的酶，廣泛分布于人和其他哺乳類動物除肝臟以外的組織中，在小腸、肺、腎、腦、胎盤等多種組織中表達，而且特異性地表達在單核巨噬細胞或樹突狀細胞上。在這些細胞上IDO能夠被脂多糖(LPS)、細胞因子(如IFN-α、IFN-γ及TNF-α等)誘導表達。IDO是肝臟以外催化色氨酸分子中的吲哚環(huán)氧化裂解，從而沿色氨酸-犬尿氨酸分解代謝的最主要的限速酶，人體內約95%的色氨酸是通過此途徑代謝的。IDO通過降解色氨酸，使局部組織中的色氨酸耗竭，色氨酸的代謝產物犬尿氨酸的濃度增加，從而抑制T淋巴細胞的增殖[5-8]。多項研究證實，在炎性反應相關疾病中，IDO的活化可導致血清色氨酸水平降低和犬尿氨酸的水平升高[2，9]。自身免疫性疾病是指機體對自身抗原發(fā)生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病。目前，有關學者認為自身免疫性疾病的發(fā)生與自身免疫的失耐受相關，即機體產生針對自身抗原的抗體并使自身反應性淋巴細胞的異常活化而致發(fā)病。IDO作為免疫平衡的一個重要調節(jié)器，通過自身免疫反應，能誘導外周免疫耐受和調控自體免疫反應。IDO誘導的免疫耐受和在自身免疫性疾病中的作用越來越受到重視。最近研究表明，IDO介導的色氨酸代謝異常存在于多種自身免疫性疾病中，如免疫性血小板減少癥、類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Graves病等[5，10]。 KD為自身免疫性疾病，急性期存在炎癥反應及免疫激活。我們推測隨著KD急性期細胞因子的釋放，可能會激活異常的IDO表達增加，色氨酸犬尿氨酸代謝途徑被上調，繼而引起一系列代謝產物的改變，在KD自身免疫性血管炎性反應中起一定的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)KD患兒急性期血漿IDO含量明顯增高，與恢復期及對照組相比差異有統(tǒng)計學意義，說明KD患兒急性期可能存在IDO的異常表達，從而參與異常的免疫性炎癥反應。觀察組及對照組中不同性別之間IDO含量比較差異無統(tǒng)計學意義，說明IDO表達水平與性別差異可能無關。因本研究樣本數(shù)量有限，尚有待今后擴大樣本量，并進一步檢測IDO的生物活性及分子表達水平，以便更確切地闡明IDO活性及表達與KD急性期發(fā)病的相關性，為今后探索通過調控IDO的活性及表達來防治KD的新途徑提供研究基礎。

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Serum indoleamine 2，3 dioxygenase in children with Kawasaki disease

SHEN Jie，ZHANG Yiying，JIE Chunhong，GONG Fangqi

(The Children′s Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310051，China)

Objective：To detect the level of IDO in patients with Kawasaki disease and analyze correlation between IDO and Kawasaki disease.Methods：Selected 20 cases of KD hospitalized in January 2015 to March 2015 and 20 cases of healthy volunteers.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was adopted to detect the serum levels of IDO.The detection results of all those cases were compared and analyzed.Results：The serum IDO level of the acute phase KD group was significantly higher than that of both the normal control group and the recovery phase KD group(P<0.01).There is no significant difference of IDO level between the recovery phase KD group and the normal control group(P>0.05).There is also no significant gender difference of IDO level among all those groups(P>0.05).Conclusion：The serum IDO level increased in the acute phase KD patients.It might was involved in the acute immune reaction of KD.The IDO level might was not affected by gender.

kawasaki disease；indoleamine 2，3 dioxygenase；enzyme linked immunosorbent assay

1671-8631(2017)04-0253-03

〔1〕本課題為浙江省中醫(yī)藥普通項目研究資助項目(項目編號：2009CB048)；浙江省教育廳科研項目(項目編號：Y201017610)

R730.5

A

2016-10-14

(本文編輯：王作利 )

沈杰(1973— )，女，浙江省杭州市人，博士學位，主治醫(yī)師。研究方向：小兒心血管疾病。