崔施展，賈東升，謝曉亮，溫春秀，李榮喬，劉靈娣

（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

棗仁顆粒鎮(zhèn)靜催眠作用及機(jī)制研究

崔施展，賈東升，謝曉亮*，溫春秀，李榮喬，劉靈娣

（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

研究棗仁顆粒的鎮(zhèn)靜催眠作用及其作用機(jī)制。連續(xù)7 d不同劑量的棗仁顆粒灌胃（10、20、40mg/kg，以地西泮作為陽性對(duì)照，生理鹽水作為空白對(duì)照，比較各組間小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠只數(shù)，閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間，并比較小鼠腦組織中γ-氨基丁酸（GABA）含量。結(jié)果表明，中高劑量的棗仁顆粒均可顯著減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，縮短活動(dòng)時(shí)間（P＜0.05），中高劑量棗仁顆?？娠@著提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠只數(shù)（P＜0.05），低中高劑量的棗仁顆粒均可縮短閾上劑量小鼠的睡眠潛伏期，延長睡眠時(shí)間（P＜0.05），小鼠腦組織中GABA含量升高。棗仁顆粒具有良好的鎮(zhèn)靜催眠作用，其作用機(jī)制可能為通過調(diào)節(jié)GABA含量發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用。

棗仁顆粒；鎮(zhèn)靜；催眠

當(dāng)今社會(huì)，隨著工作生活壓力的增大，不良作息及生活習(xí)慣的養(yǎng)成，失眠或睡眠質(zhì)量低下的發(fā)生率呈逐年上升趨勢(shì)，失眠人群數(shù)量的逐年增加，給患者的生活及工作帶來諸多不利的影響，引起工作及生活質(zhì)量嚴(yán)重下降[1]。目前臨床治療失眠多采用以地西泮為代表的苯二氮類藥物，此類藥物極易造成患者的依賴性和成癮性，研究發(fā)現(xiàn)，純植物提取物在改善睡眠方面有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，具有安全可靠，無毒副作用，無成癮性等特點(diǎn)，近年來逐漸受到人們的關(guān)注[2]。酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯苓、黨參均具有良好的鎮(zhèn)靜催眠作用[3-6]，在我國有著悠久的使用歷史，相關(guān)報(bào)道較多，但對(duì)4種藥材進(jìn)行復(fù)方配伍后功效如何未見報(bào)道，本研究以“健脾益氣”立法，選用上述4種藥材，制備棗仁顆粒，通過對(duì)小鼠自主活動(dòng)、協(xié)同戊巴比妥鈉催眠作用及腦組織中γ-氨基丁酸（GABA）含量變化情況，驗(yàn)證其鎮(zhèn)靜催眠功效，以地西泮作為陽性對(duì)照，研究可能存在的作用機(jī)制，為研制具有改善睡眠，提高睡眠質(zhì)量的保健類食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICP小鼠：雄性，體重20 g～25 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（京）2015-0017。

1.1.2 藥品與試劑

酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯苓、黨參：購自安國中藥材市場，經(jīng)謝曉亮研究員鑒定為正品；戊巴比妥鈉：美國Sigma；地西泮：華中藥業(yè)股份有限公司；生理鹽水：石家莊制藥集團(tuán)有限公司；水為高純水。

1.1.3 儀器與設(shè)備

GBL-5型提取濃縮組、GLP-5型高速離心噴霧干燥機(jī)：無錫市旺盛機(jī)械廠；LGC100垂直送料干法制粒機(jī)：北京國藥龍立科技有限公司；YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀：成都太盟科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 棗仁顆粒的制備

按照配方比例稱取酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯苓、黨參，共煎回流提取2次，對(duì)提取液濃縮、過濾后加入適量麥芽糊精噴霧干燥，得噴霧干燥粉，取噴霧干燥粉適量，采用干法制粒即得棗仁顆粒。

1.2.2 棗仁顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響

取健康小鼠60只，隨機(jī)分為5組，空白組及陽性對(duì)照組給予生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組給予10、20、40mg/kg棗仁顆粒溶液，連續(xù)灌胃7 d，在末次灌胃前4 h，禁食禁水，在末次灌胃后陽性對(duì)照組給予4mg/kg地西泮，30min后置于自主活動(dòng)測(cè)試儀中，適應(yīng)5min后，記錄小鼠在10min內(nèi)的自主活動(dòng)次數(shù)及活動(dòng)時(shí)間，自主活動(dòng)次數(shù)抑制率/%=（空白組活動(dòng)次數(shù)-實(shí)驗(yàn)組活動(dòng)次數(shù)）/空白組活動(dòng)次數(shù)×100，自主活動(dòng)時(shí)間抑制率/%=（空白組活動(dòng)時(shí)間-實(shí)驗(yàn)組活動(dòng)時(shí)間）/空白組活動(dòng)時(shí)間×100。

1.2.3 對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡只數(shù)影響

按照“1.2.2”項(xiàng)下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉30mg/kg，以100%小鼠不入睡為最大劑量，在15min內(nèi)小鼠翻正反射消失達(dá)1min為入睡標(biāo)準(zhǔn)，記錄各組小鼠入睡只數(shù)。

1.2.4 對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡潛伏期及睡眠時(shí)間的影響

按照“1.2.2”項(xiàng)下方法，在末次灌胃30min后，腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉40mg/kg，以100%小鼠入睡為最小劑量，在15min內(nèi)小鼠翻正反射消失達(dá)1min為入睡標(biāo)準(zhǔn)，記錄各組小鼠入睡潛伏期及睡眠時(shí)間。

1.2.5 GABA含量變化情況

按照“1.2.2”項(xiàng)下方式，在末次灌胃30min后，將小鼠處死，迅速取出下丘腦，置于存有冰凍生理鹽水勻漿儀中，5 000 r/min離心10min，取上清，按照試劑盒說明書，于450 nm處，測(cè)定GABA含量。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理選用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著，P＞0.05表示組間無顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 棗仁顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中高劑量棗仁顆?？擅黠@減少小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，縮短小鼠自主活動(dòng)時(shí)間，空白組小鼠活動(dòng)次數(shù)為161次、陽性對(duì)照組為71次、棗仁顆粒分別為98、86、54次，空白組小鼠活動(dòng)時(shí)間為583 s、陽性對(duì)照組為425 s、棗仁顆粒分別為494、328、274 s，中高劑量組與空白組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆粒具有抑制小鼠自主活動(dòng)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 棗仁顆粒對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（x±s，n=12）Table1 Zizyphi spinosae semen granule on the autonomic activity of mice（x±s，n=12）

2.2 閾下劑量小鼠睡眠只數(shù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中高劑量棗仁顆?？擅黠@增加閾下劑量小鼠的睡眠只數(shù)，空白組無睡眠小鼠、地西泮組為7只、棗仁顆粒分別為5、7、8只，與空白組比較中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆粒具有增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡只數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 小鼠睡眠只數(shù)及入睡率（x±s，n=12）Table2 The number of sleep and sleep rate（x±s，n=12）

2.3 閾上劑量小鼠睡眠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中高劑量棗仁顆?？擅黠@縮短小鼠睡眠潛伏期，延長小鼠睡眠只數(shù)，睡眠潛伏期：空白組為（5.2±1.3）min、地西泮組為（3.8±0.8）min、棗仁顆粒分別為（3.7±1.4）、（3.1±0.7）、（2.4±1.1）min，與空白組比較中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05），睡眠時(shí)間：空白組為（32.8± 8.4）min、地西泮組為（42.7±11.7）min、棗仁顆粒分別為（41.3±12.8）、（49.2±10.2）、（51.7±11.6）min，與空白組比較高劑量組差異顯著（P＜0.05）、與陽性對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05），表明棗仁顆?？梢钥s短閾上劑量小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間（x±s，n=12）Table3 The latency of sleep and the sleep time of mice（x±s，n=12）

2.4 GABA含量變化情況

GABA含量變化情況見表4。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中高劑量棗仁顆?？擅黠@縮短小鼠睡眠潛伏期，延長小鼠睡眠只數(shù)，睡眠潛伏期：空白組為12.4 ng/mL、地西泮組為21.4 ng/mL、棗仁顆粒分別為19.8、28.6、34.7 ng/mL，與空白組比較低中高劑量組比較差異顯著（P＜0.05）、與陽性對(duì)照組比較，中高劑量存在顯著差異（P＜0.05）。

3 討論

棗仁顆粒由酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯苓、黨參4種中藥配伍組成，藥材經(jīng)提取、濃縮、干燥、制粒而成，其中酸棗仁入心、肝經(jīng)可養(yǎng)心陰益肝血而寧心安神；遠(yuǎn)志入心、腎經(jīng)可開心氣，通腎氣，交通心腎，安神定志；茯苓入心、脾經(jīng)，為健脾寧心之上品；黨參可補(bǔ)氣益脾，以運(yùn)藥力，上述藥材合用符合“健脾益氣而寧心”的中醫(yī)養(yǎng)生理論。

表4 組間下丘腦GABA含量比較（x±s，n=12）Table4 Comparison of GABA content in hypothalamus between groups（x±s，n=12）

研究結(jié)果顯示，棗仁顆?？擅黠@抑制小鼠自主活動(dòng)，具有較好的鎮(zhèn)靜作用；棗仁顆粒可增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠只數(shù)，縮短閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠潛伏期并延長睡眠時(shí)間，鎮(zhèn)靜催眠作用于棗仁顆粒劑量具有正相關(guān)性，中高劑量棗仁顆粒功效與陽性對(duì)照地西泮無明顯差異，表明棗仁顆粒具有良好的鎮(zhèn)靜催眠作用。

GABA為一類抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可通過與GABA受體（GABAA）結(jié)合調(diào)節(jié)神經(jīng)元活性，降低神經(jīng)細(xì)胞興奮，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用[7]。GABA為腹外側(cè)視前區(qū)（vLPO）神經(jīng)元細(xì)胞受到特異性刺激后分泌的，本研究發(fā)現(xiàn)棗仁顆粒可提高小鼠腦組織中GABA含量，可能是棗仁顆粒可刺激vLPO神經(jīng)元細(xì)胞增加GABA的分泌[8-9]，同時(shí)酸棗仁皂苷A可特異性的調(diào)控GABAA的α1、α5mRNA的表達(dá)，增加GABAA含量[10]，使GABA與GABAA結(jié)合增加，進(jìn)而起到安神作用。棗仁顆粒的鎮(zhèn)靜催眠作用可能是通過調(diào)節(jié)體內(nèi)的GABA含量及GABAA表達(dá)活性來完成的。

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Sedative and Hypnotic Effect of Zizyphi spinosae semen Granule and Its Mechanism

CUI Shi-zhan，JIA Dong-sheng，XIE Xiao-liang*，WEN Chun-xiu，LI Rong-qiao，LIU Ling-di
（Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Medicinal Plant Research Center，Shijiazhuang050051，Hebei，China）

To study the sedative and hypnotic effects of Zizyphi spinosae semen Granule and the potential mechanism.Administrated with Zizyphi spinosae semen Granule（10、20、40mg/kg）for7 consecutive days，diazepam as a positive control，saline as control，The number of spontaneous activities in mice，the number of sleep deprivation in pentobarbital sodium mice，the sleep latency and the sleep time in pentobarbital sodium mice were compared，and the content of γ-amino butyric acid（GABA）in brain tissue of mice was compared. The results showed that Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly reduce the number of independent activity in mice，shortening the activity time（P＜0.05），Zizyphi spinosae semen particle moderate and high doses could significantly raise the subthreshold dose of pentobarbital sodium in mice sleeping only a few（P＜0.05），low，moderate and high doses of Zizyphi spinosae semen particle could shorten sleep latency threshold dosages in mice，prolonged sleep time（P＜0.05），GABA in the brain tissue of mice was significantly increase.Zizyphi spinosae semen particle have a good sedative and hypnotic effects，the mechanism of action may be to play a sedative and hypnotic effect by adjusting the content of GABA.

Zizyphi spinosae semen granule；sedation；hypnosis

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.03.038

2016-03-09

河北省農(nóng)林科學(xué)院青年基金項(xiàng)目（A2015050101）；河北太行山區(qū)特色功能保健食品的開發(fā)研究（11231005D）

崔施展（1989—），男（漢），本科，主要從事中藥功能食品研究。

*通信作者：謝曉亮（1962—），男，研究員，博士，主要從事中藥資源、中藥加工研究。