盛春鴿 王延鋒 史 磊 潘春磊 王金賀 劉姿彤 張 鵬 于海洋 董雪梅

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環(huán)境因素對平菇褐斑病致病性的影響

盛春鴿 王延鋒*史 磊 潘春磊 王金賀 劉姿彤 張 鵬 于海洋 董雪梅

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江牡丹江 157041）

以平菇菌株韓CB100為試驗(yàn)材料，接種托拉斯假單胞桿菌后，將子實(shí)體置于不同溫度、不同濕度、不同CO2濃度的環(huán)境中培養(yǎng)，觀察記錄發(fā)病情況并計(jì)算病情指數(shù)，研究不同環(huán)境條件對褐斑病致病情況的影響。結(jié)果表明：不同溫度條件下病情指數(shù)存在顯著性差異，18 ℃、20 ℃條件下，子實(shí)體發(fā)病較重，23 ℃時(shí)發(fā)病較輕；70%～80%和90%～100%兩個(gè)不同濕度條件的褐斑病發(fā)病率差異不顯著；CO2含量0.6‰～0.9‰時(shí)較0.3‰～0.6‰時(shí)褐斑病發(fā)生嚴(yán)重，兩者差異顯著。

環(huán)境因素；托拉斯假單胞桿菌；平菇；發(fā)生程度

平菇營養(yǎng)豐富且容易栽培，深受菇農(nóng)和廣大消費(fèi)者青睞，是目前我國栽培量最大的食用菌之一。平菇黃褐斑病俗稱黃斑病或黃菇病，是平菇生產(chǎn)中普遍發(fā)生的一種細(xì)菌性病害，其致病菌為托拉斯假單胞桿菌[1,2]。染病后的平菇出現(xiàn)不規(guī)則的褐色斑點(diǎn)或褐色凹陷斑點(diǎn)，影響產(chǎn)品外觀，嚴(yán)重時(shí)有苦味，喪失食用價(jià)值。褐斑病一旦發(fā)生就很難控制[3]，會(huì)迅速蔓延至整個(gè)菇棚，嚴(yán)重影響菇農(nóng)的經(jīng)濟(jì)效益。

近年來，褐斑病在平菇大棚內(nèi)發(fā)生頻繁，危害程度日益嚴(yán)重，菇場中一旦發(fā)生褐斑病，很難徹底防治，且逐年加重[4]。本研究考察環(huán)境的溫度、濕度和CO2濃度對褐斑病發(fā)病的影響，為更好地防控褐斑病發(fā)生提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株

平菇菌株：韓CB100，引自韓國忠清北道農(nóng)業(yè)技術(shù)院，現(xiàn)保藏于黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院。致病菌株：托拉斯假單胞桿菌，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)邊銀丙教授提供。

1.2 供試培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，去離子水定容至1 000 mL，121 ℃滅菌30 min，冷卻后用于培養(yǎng)托拉斯假單胞菌。栽培種培養(yǎng)料：木屑78%，麩皮10%，稻糠10%，石膏1%，石灰1%。

1.3 病原菌菌懸液的制備和接種

將托拉斯假單胞桿菌劃線接種于LB培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后，刮取純培養(yǎng)物溶于無菌水制備懸浮液，將菌懸液稀釋到OD450＝0.7。病原菌的菌懸液要現(xiàn)配現(xiàn)用，待正常培養(yǎng)條件下的平菇子實(shí)體生長至半徑1～2 cm時(shí)，取制備好的菌懸液50 μL均勻涂抹于子實(shí)體表面，然后置預(yù)設(shè)環(huán)境中生長，24 h后記錄發(fā)病情況。每個(gè)處理15次重復(fù)。

1.4 溫濕度因素設(shè)定

將接種病原菌后的菌袋置于設(shè)定的環(huán)境中培養(yǎng)，溫度因素設(shè)18 ℃、20 ℃、23 ℃、27 ℃4個(gè)水平，大氣相對濕度因素設(shè)70%～80%，90%～100%兩個(gè)水平，將經(jīng)接種病原菌的菌袋置于兩個(gè)因子正交后形成的8種環(huán)境中培養(yǎng)，24 h后觀察記錄子實(shí)體的病變情況。

1.5 CO2含量設(shè)定

在正常培養(yǎng)條件下子實(shí)體半徑達(dá)1～2 cm時(shí)，取制備好的菌懸液50 μL均勻涂抹于子實(shí)體表面，然后隨機(jī)分為兩組，分別置于0.3‰～0.6‰和0.6‰～0.9‰CO2濃度下，環(huán)境溫濕度相同，溫度22±1 ℃，濕度80%～90%，培養(yǎng)24 h后觀察發(fā)病情況。

1.6 發(fā)病情況觀察和病情指數(shù)統(tǒng)計(jì)

在預(yù)設(shè)環(huán)境中培養(yǎng)24 h后，觀察褐斑病發(fā)生情況，依據(jù)子實(shí)體病變程度將病情賦值0～6，0代表無任何病變。用病情指數(shù)（Disease index）來表征病變程度：病情指數(shù)＝?(各病級(jí)的子實(shí)體個(gè)數(shù)×病級(jí)值)/(調(diào)查總個(gè)數(shù)×最高級(jí)值)×100，根據(jù)此公式計(jì)算病情指數(shù)，病情指數(shù)越大代表病情越嚴(yán)重。

1.7 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2010對病變程度和病情指數(shù)進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)，然后用DPS7.05對計(jì)算結(jié)果作進(jìn)一步分析。溫濕度對病情指數(shù)的影響采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)中二因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，CO2濃度對病情指數(shù)的影響采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)中單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)值未經(jīng)轉(zhuǎn)換，方差分析均采用LSD法。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度和濕度對發(fā)病的影響

將接種病原菌的子實(shí)體放在預(yù)設(shè)環(huán)境中培養(yǎng)，根據(jù)發(fā)病情況及病斑指數(shù)計(jì)算出病情指數(shù)（表1），并對病情指數(shù)進(jìn)行雙因素隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)方差分析（表2）。結(jié)果表明，溫度因素對病情指數(shù)的影響較大，其中18 ℃、20 ℃時(shí)發(fā)病較嚴(yán)重，23 ℃時(shí)發(fā)病較輕，與其他各組差異顯著。濕度因素對褐斑病發(fā)病影響不大，不同濕度下的數(shù)值雖略有差異但不明顯。而溫度和濕度的交互作用則對病情指數(shù)也有顯著的影響，其中溫度23 ℃，濕度70%～80%時(shí)發(fā)病較輕，溫度18 ℃，濕度90%～100%時(shí)發(fā)病較重。

2.2 CO2濃度對發(fā)病的影響

試驗(yàn)結(jié)果及多重比較結(jié)果表明，CO2濃度對病情指數(shù)影響顯著，病情指數(shù)平均值在CO20.6‰～ 0.9‰濃度下為23.88±6.26（標(biāo)準(zhǔn)差），0.3‰～0.6‰濃度下為18.82±5.95。隨著CO2濃度的增加病情指數(shù)增大，且兩個(gè)梯度下的病情指數(shù)達(dá)顯著性差異水平。

表1 供試菌株在不同溫濕度下的病情指數(shù)

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

表2 不同溫濕度下的病情指數(shù)多重比較

注：同列小寫字母不同表示5%水平差異顯著，大寫字母不同表示1%水平差異極顯著。

3 結(jié)論與討論

平菇褐斑病發(fā)病具有不確定性，在生產(chǎn)實(shí)踐中，栽培場所的環(huán)境因素（光、溫、水、氣、菇蚊、菇蠅等）、開口方式、噴水方式和平菇品種等對發(fā)病都有一定的影響，但是各環(huán)境因子的影響程度沒有一致的說法。在生產(chǎn)上，一般認(rèn)為高溫環(huán)境容易導(dǎo)致平菇褐斑病發(fā)生，也有報(bào)道說在春秋季節(jié)平菇褐斑病更容易爆發(fā)[1]。

本研究從實(shí)際情況出發(fā)，以韓國引進(jìn)的平菇菌株韓CB100為試驗(yàn)材料，探究各環(huán)境因子對假單胞托拉斯致病力的影響。結(jié)果表明，褐斑病的發(fā)生與溫度有密切的關(guān)系，在18～20 ℃時(shí)容易發(fā)病，23 ℃時(shí)發(fā)病較輕，25～27 ℃時(shí)發(fā)病率有所上升；而濕度對褐斑病的發(fā)生影響不大。

這一結(jié)果與生產(chǎn)上認(rèn)定的高溫高濕容易爆發(fā)褐斑病并不吻合，而與劉川等[5]的研究結(jié)果較一致。筆者分析認(rèn)為，托拉斯假單胞桿菌的最適生長溫度為28 ℃[6]，在栽培場所的環(huán)境溫度為18～20 ℃時(shí)，雖細(xì)菌菌株的活性不強(qiáng)，但同樣溫度下，平菇的生理代謝水平也較緩慢，易受致病菌的侵染；溫度達(dá)到23 ℃左右時(shí)，平菇代謝旺盛，對抗細(xì)菌的能力增強(qiáng)而不易被侵染；溫度較高，達(dá)到27 ℃時(shí)，熱脅迫狀態(tài)下的平菇抗擊病菌的能力又會(huì)減弱。CO2濃度影響褐斑病發(fā)生的原因在于高濃度的CO2會(huì)抑制平菇的呼吸作用而使代謝受阻，進(jìn)而影響抗病能力。因此，栽培場所通風(fēng)不良，CO2濃度越高，發(fā)病越嚴(yán)重。

雖然本研究結(jié)果顯示空氣濕度對褐斑病的發(fā)病影響不大，但不表示噴水方式對發(fā)病程度無影響。在菇棚日常管理中，水源一定要清潔，且不可直接噴到子實(shí)體上，噴水要做到細(xì)致、均勻，尤其是在已發(fā)病的菇棚中，飛濺的水滴會(huì)將發(fā)病子實(shí)體上帶有的大量致病菌，傳播到正常子實(shí)體上[7]。

此外，平菇褐斑病的發(fā)生除了與環(huán)境條件密切相關(guān)外，還與平菇菌株自身特性有關(guān)。只有充分掌握菌株的生物學(xué)特性，配合適當(dāng)?shù)墓芸卮胧?，使其在最適宜的環(huán)境中生長，才能最大程度地減少病害的發(fā)生，達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益最大化。

[1] 張瑞穎, 胡丹丹, 左雪梅, 等. 平菇和雙孢蘑菇細(xì)菌性褐斑病研究進(jìn)展[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào), 2007, 34(5): 549-554.

[2] Tolaas AG. A bacterial disease of cultivated mushroom[J]. Phytopathology, 1915, 5: 51-54.

[3] 葉彩云. 蘑菇病蟲害防控[M]. 北京: 中國林業(yè)出版社. 2015.

[4] 張瑞穎, 左雪梅, 姜瑞波. 平菇褐斑病病原菌的分離與鑒定[J]. 中國食用菌, 2007, 26(5): 58-60.

[5] 劉川. 平菇褐斑病發(fā)生的環(huán)境因素分析和抗性材料篩選[D]. 湖北: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

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[7] 徐巖巖. 托拉斯假單胞桿菌侵染平菇傳播途徑及其弱毒菌株誘導(dǎo)抗病機(jī)理研究[D]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2013.

Effect of environment factors on brown blotch disease of

Sheng Chunge Wang Yanfeng* Shi Lei Pan Chunlei Wang Jinhe Liu Zitong Zhang Peng Yu Haiyang Dong Xuemei

(Mudanjiang branch of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Mudanjiang Heilongjiang 157041, China)

was inoculated on the test fruit-bodies of oyster mushroom strain Korea CB100 in different environment, disease index was calculated through the recorded of disease incidence. The effect of fruiting temperature, relative humidity, carbon dioxide concentration on the incidence of brown blotch disease affecting were determined. The results show that significant differences in resistance to brown blotch disease were recorded at the different temperature. The highest disease index values were recorded when the fruiting temperature was set at 18 ℃, 20 ℃ compared with 23 ℃ and 27 ℃. But no significant differences in the index values were observed when the relative humidity was maintained between either 70%～80% or 90%～100%. The highest disease index values was recorded when the carbon dioxide concentration was set at 0.6‰～0.9‰ compared with 0.3‰～0.6‰.

environmental factors; oyster mushroom;strain

S646

B

2095-0934（2017）01-055-03

黑龍江省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目“平菇褐斑病的致病因素分析及菌株抗病性評(píng)價(jià)”（編號(hào)：2014QN008）、寒地食用菌星創(chuàng)天地（ZY16B08）、國家級(jí)星火計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2015GA670002）

盛春鴿，碩士，研究實(shí)習(xí)員，研究方向：食用菌遺傳育種。E-mail：shengchunge@163.com

王延鋒，博士，研究員，研究方向：食用菌遺傳育種、栽培技術(shù)及菌渣綜合利用研究。E-mail：mdjnks@126.com