蔣德生張曉麗祝濤王能昆李劍

(1云南瑞寶生物科技股份有限公司，云南 昆明 651701)

(2云南希陶綠色藥業(yè)股份有限公司，云南 昆明 651701)

注射用三七提取物的純化方法優(yōu)選

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(1云南瑞寶生物科技股份有限公司，云南 昆明 651701)

(2云南希陶綠色藥業(yè)股份有限公司，云南 昆明 651701)

本實驗的主要目的是為了對三七提取物的純化方法進行優(yōu)選，從而提高三七提取物的純度。其中需要采用明膠沉淀法、澄清劑法、石硫醇法、堿性醇沉法和大孔吸附樹脂法五種方法對于三七提取物進行處理，同時根據(jù)三七總皂苷的轉移率、質量分數(shù)、雜質的清除效果和復溶性的相關數(shù)據(jù)作為實驗指標進行優(yōu)化設計。經(jīng)過多次實驗發(fā)現(xiàn)五種試驗方法各有利弊，應該在實驗過程中揚長避短。

三七；注射用三七提取物；純化；堿性醇沉法；大孔吸附樹脂法

實驗小組人員通過對于純化實驗的實驗條件和實驗結果進行比對發(fā)現(xiàn)，五種純化方法在單獨使用時不能實現(xiàn)最佳的實驗效果。同時參考國內外的先進實驗進行比對后，采用堿性醇沉法和大孔吸附樹脂法相結合的方式以提純三七提取物。實驗結果表明三七總皂苷的轉移率、質量分數(shù)、雜質的清除效果和復溶性都出現(xiàn)一定程度的增長，雜質的清除效果較之前的實驗數(shù)據(jù)比較好復溶性較好。因此本文采用五種實驗方法分別對于三七提取物進行純化實驗，記錄相關數(shù)據(jù)并進行對比分析。

1 實驗準備

1.1 實驗說明

隨著社會的發(fā)展及人們生活水平的提高，越來越多的患者受心腦血管疾病的折磨，對三七、其主要有效成分PNS及其制劑的需求日益劇增。其相關研究也越來越深入、透徹。與西醫(yī)的藥劑制作過程不同，中醫(yī)在藥劑的制作過程中格外重視中藥提取物的純化過程，如使用明膠沉淀法、澄清劑法、石硫醇法、堿性醇沉法和大孔吸附樹脂法五種方法來進行三七提取物的純化。同時，在進行實際的實驗過程中發(fā)現(xiàn)這五種提純方法各有利弊，在實際的應用中，應該根據(jù)實際情況、藥材用量等來確定采用合適的純化方法進行提取實驗。與此同時做好記錄工作，通過對比不同實驗方法從而選擇最有效、實驗效果最佳的純化方法及流程，從而提高三七提取物的質量以及達到國家相關的質量要求標準。

1.2 實驗儀器和試劑

實驗儀器：紫外可見分光光度計；旋轉式蒸發(fā)儀，用于藥劑的蒸發(fā)、提純過程；循環(huán)水式多用真空泵；PH值或酸度計；ZT?Cl+1天然澄清劑；HPD300型大孔吸附樹脂。

實驗藥劑：五加科植物三七的干燥根莖；人參皂普Re對照品；α-萘酚；香草醛；冰醋酸；無水乙醇。

實驗過程：首先，取適量三七藥材加入13倍量30%的無水乙醇在70℃條件下進行加熱回流，持續(xù)加熱40分鐘，以上步驟重復兩次。同時將三七溶解液進行過濾處理后，取適量的三七提取液，加入0.2mL5%香草醛冰醋酸溶液、0.8mL高氯酸溶液并將試管密封緊塞后搖勻，在60℃水浴條件下進行恒溫加熱15min后立即取出冷卻。在向溶解液內加入5mL冰醋酸搖勻,記錄吸光、分光度值。經(jīng)過數(shù)據(jù)對比后發(fā)現(xiàn)純化后的總皂苷質量是純化前的1.33倍，并且這兩者之比相當于三七總皂苷的轉移率；并且純化后的三七總皂苷固體物的總量為純凈度。根據(jù)相關理論說明將純化后干燥冷卻的固體物1mg加水10mL振搖溶解，同時加入檢驗鞣質、蛋白質和樹脂在震蕩后置燈檢箱下觀察是否澄清。

2 實驗方法

2.1 明膠沉淀法

明膠沉淀法主要是利用明膠可以包裹大顆粒物質進行沉淀的特性進行三七提取液的純化實驗，因此分別取藥量為1.0、2.0、3.0g∕mL三七提取液，用鹽酸調整pH值之后加入5%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀為止。冷藏12小時之后過濾并加入95%無水乙醇，調醇體積分數(shù)至75%,再次冷藏12小時，過濾、定容后檢查各項指標后發(fā)現(xiàn)，隨著藥材中三七的質量分數(shù)逐漸上升，三七總皂苷的轉移率明顯降低，然而三七總皂苷的質量分數(shù)在逐漸上升。

2.2 ZTC1+1天然澄清劑法

與上述實驗方法相似，取含藥物含量為0.10、0.15、0.20g∕mL三七提取液，按照提取液質量濃度不同分別分為A、B兩組。A組分的量為1×三七濃縮液體積×1%；B組分的量為2×三七濃縮液體積×1%，兩組均加入1%澄清劑，冷卻后進行過濾、定容以及檢查。通過比較相關數(shù)據(jù)可知，生藥藥材質量濃度為0.20g∕mL時，三七提取物的轉移率最高，此時的鞣質蛋白質檢查均呈陰性，因此在考慮提取液的質量濃度條件的情況下，選定藥材提取液中的含藥量、質量濃度等。

2.3 石硫醇法

同上，取含三七提取液的質量濃度為0.1、0.2、0.3、0.4g∕mL溶液,并加入25%石灰乳調從而使其pH值調整為11.5左右,攪勻,靜至2小時，再用20%硫酸回調pH值至6.0，經(jīng)過攪拌、過濾、冷卻加入95%乙醇調整提取物的質量分數(shù)為75%，后經(jīng)過冷藏12小時。再經(jīng)過過濾、定容等步驟，得出相關實驗數(shù)據(jù)。由此可知，為提高三七總皂苷的轉移率、質量分數(shù)的問題時，應該講溶液提取濃度控制在0.3～0.4g∕mL之間，同時考慮到濃縮的問題，由于在質量濃度為0.4g∕mL時比0.3g∕mL更費時費力，因此應該采用質量濃度為0.3g∕mL的三七提取液。

2.4 實驗分析

不同的實驗提純方法各有其優(yōu)弊端，如明膠沉淀法可以有效的去除三七提取液中的大分子雜質，然而利用明膠進行沉淀也向溶液中引入了明膠這種不可自然降解的物質，從某種程度上來說，它也相當于引入另一種雜質，而且明膠中含有蛋白質成分導致溶液檢驗時呈陽性。除此之外，一旦藥材提取液的質量濃度過高，就會使得溶液內的有效物質進行聚集而被明膠當成分子物質進行包裹，導致許多有效成分藏在明膠和蹂質沉淀物中，從而導致提純后的三七提取物的質量分數(shù)下降，使得其損失率上升。與此同時，利用明膠進行試驗后的提純溶液不能滿足相關的質量要求，其質量分數(shù)也無法滿足重要注射劑中的技術要求。

3 結語

在進行三七提取物的純化實驗過程中，不僅需要考慮提取物的最終轉化率、質量分數(shù)等問題，還要考慮溶液的復溶率以及溶液進行注射方面的要求。

[1]胡稀,謝珍珍,梁潔.壯藥姜葉三七醇提取物抗炎作用的研究[J].大眾科技,2017(1).