劉剛 劉育辰* 魏寒梅 于福來(lái) 龐玉新 李霞 賈金燕

（1貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴陽(yáng)550002；2國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心，貴陽(yáng)550025；3貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng)550025；4中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，儋州571737；5海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，儋州571737；6貴州宏宇藥業(yè)有限公司，貴陽(yáng)550018）

苗藥艾納香糖類成分的含量測(cè)定※

劉剛1，2，3劉育辰1，2，3*魏寒梅1于福來(lái)4，5龐玉新4，5李霞6賈金燕6

（1貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴陽(yáng)550002；2國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心，貴陽(yáng)550025；3貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng)550025；4中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，儋州571737；5海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，儋州571737；6貴州宏宇藥業(yè)有限公司，貴陽(yáng)550018）

目的考察不同產(chǎn)地艾納香中糖類成分的含量。方法采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行艾納香糖類成分的含量測(cè)定。結(jié)果不同產(chǎn)地艾納香所得的總糖、還原糖和多糖的含量差別不大，2號(hào)和6號(hào)產(chǎn)地的含糖量相對(duì)較高。結(jié)論貴州紅水河所栽培的艾納香含糖量相對(duì)較高，其他產(chǎn)地的沒(méi)有明顯區(qū)別。采用上述分析方法簡(jiǎn)便快速可靠，為建立艾納香的多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供了科學(xué)參考。

艾納香；總糖；還原糖；多糖；中藥化學(xué)

艾納香為菊科植物艾納香Blumea balsamifera DC的新鮮或干燥地上部分[1]，苗藥名檔窩凱Diangd vob bvid植物，藥用為枝葉、嫩枝根，別名：大風(fēng)艾、客家人叫法（大毛風(fēng)）艾納香冰片艾、家風(fēng)艾、大毛藥、大艾等，是貴州省羅甸縣的道地藥材[1-2]，是多種苗藥制劑的主要原料，如金喉健噴霧劑等。目前艾納香的化學(xué)成分研究主要集中于揮發(fā)油類、黃酮類、酚酸類、生物堿類化學(xué)成分的研究[3-6]，但是未見(jiàn)對(duì)其糖類成分分析的報(bào)道，本研究建立了艾納香糖類物質(zhì)含量測(cè)定方法，旨在為艾納香的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考指標(biāo)，為建立艾納香多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 艾納香采自貴州、海南和廣西三省區(qū)，經(jīng)中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所于福來(lái)博士鑒定為艾納香（Blumea balsamifera DC），樣品編號(hào)及產(chǎn)地見(jiàn)表1。

表1 樣品編號(hào)及產(chǎn)地

1.1.2 試劑與試藥乙醇（AR）重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司；酚酞（成都科龍化工試劑廠）；氫氧化鈉（AR）重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司；濃硫酸（AR）國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；濃鹽酸（AR）重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司化學(xué)試劑廠；酒石酸鉀鈉（四水）（AR），成都市科龍化工試劑廠；3，5-二硝基水楊酸（CP）國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蒽酮（AR）廣東光華化學(xué)廠有限責(zé)任公司；無(wú)水葡萄糖對(duì)照品，貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司。

1.1.3 儀器HH-W600數(shù)顯三用恒溫水箱（江蘇金壇市億通電子有限公司）；科導(dǎo)SK1200H臺(tái)式超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；101-1AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；100 g多功能粉碎機(jī)（上海兆電科技有限公司）；GBC Cintra20紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(澳大利亞照生公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 艾納香總糖及還原糖含量測(cè)定

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備精密稱取干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品50 mg于50 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容至刻度，混勻，配制成1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取7支試管(編號(hào)為0～6)，按表2加試劑至各管，混合均勻，在沸水浴中加熱5 min，取出后立即在冷水中冷卻，再向各管加入蒸餾水至10 ml，混勻，先使用空白對(duì)照除去溶劑的影響，然后再測(cè)定葡萄糖溶液的最大吸收波長(zhǎng)。于分光光度計(jì)483 nm處測(cè)定光密度，并以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y=6.0918X-0.0114（r=0.9994），說(shuō)明葡萄糖在0.0206~0.1237 mg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)表2。

表2 總糖和還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線試液的制備（ml）

2.1.2 總糖測(cè)定液的制備精密稱取樣品500 mg，放入錐形瓶中，加蒸餾水30 ml、6 mol/l HCl 20 ml，于沸水浴中加熱水解40 min。取1滴水解液于白瓷板上，以碘-碘化鉀試劑檢查，水解液不呈藍(lán)色為水解完全，冷卻后加1滴酚酞指示劑以6 mol/l NaOH中和并濾至100 ml容量瓶中，殘?jiān)哉麴s水沖洗，然后定容至刻度，混勻，備用。

2.1.3 還原糖測(cè)定液的制備精密稱取樣品500 mg于50 mL錐形瓶中，加少量水調(diào)成糊狀，再加20 ml水，置80℃水浴中加熱40 min，然后過(guò)濾于100 ml容量瓶中，以蒸餾水沖洗殘?jiān)?，定容至刻度，混勻，備用?/p>

2.1.4 方法學(xué)考察

2.1.4.1 精密度試驗(yàn)精確吸取葡萄糖對(duì)照品溶液1 ml，依法顯色定容后測(cè)定，測(cè)定吸光度值，RSD為1.07%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.1.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一樣品6份，每份0.500 g，依法顯色定容后測(cè)定，測(cè)得樣品中總糖的平均含量為35.85%，RSD=2.92%；還原糖的平均含量為6.67%，RSD=2.92%，表明重復(fù)性良好。

2.1.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)精確稱取樣品分別按2.1.2和2.1.3制備供試品溶液，依法顯色后放置0，10，20，30，40，50，60 min測(cè)定吸光度，總糖吸光度的RSD為2.1%，還原糖吸光度的RSD為1.25%結(jié)果表明供試品溶液顯色后60 min內(nèi)基本穩(wěn)定，說(shuō)明樣品在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.4.4 加樣回收率試驗(yàn)精密稱定已知含量的艾納香粉末6份，每份0.25 g，置圓底燒瓶中，加入葡萄糖對(duì)照品溶液適量。按2.1.2和2.1.3項(xiàng)制備供試品溶液，在483 nm最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，總糖平均加樣回收率為98.78%，RSD為2.07%；還原糖平均加樣回收率為99.14%，RSD為2.56%，具體見(jiàn)表3和表4，結(jié)果表明該方法可行。

表3 總糖加樣回收率試驗(yàn)

表4 還原糖加樣回收率試驗(yàn)

2.1.5 樣品的測(cè)定取不同產(chǎn)地艾納香，按2.1.2和2.1.3項(xiàng)制備供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下方法顯色并依法測(cè)定顯色后吸光度，計(jì)算樣品中總糖和還原糖含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

2.2 艾納香多糖含量測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備將葡萄糖置于60℃下烘1 h，再逐漸升溫至105℃干燥至恒重。精密稱取5 mg置于25 ml容量瓶中，用蒸餾水溶解并定容至刻度。取6支試管，按表3加試劑。加入顯色劑后，于沸水浴中加熱10 min，冷卻1 h至室溫，于625 nm處測(cè)定吸光度，y=12.265X-0.0101，R=0.9997，n=6。

表5 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線試液的制備（ml）

2.2.2 可溶性多糖測(cè)定液的制備精密稱取艾納香粉末(恒重)1.000 g，置100 ml具塞三角瓶中，加80%乙醇45 ml，浸泡30 min，超聲30 min，靜置過(guò)濾。重復(fù)1次，兩次濾液合并，置100 ml容量瓶中，用80%乙醇定容，備用。

2.2.3 粗多糖測(cè)定液的制備提取后的濾渣蒸干，加2%的鹽酸45 ml，置沸水浴中提取l h，充分放冷，濾過(guò)后濾液置于100 ml容量瓶中，濾渣重復(fù)提取1次，過(guò)濾，洗滌濾紙，合并濾液及洗滌液加入到容量瓶中，最后用2%鹽酸定容至刻度，備用。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 精密度試驗(yàn)精確吸取葡萄糖對(duì)照品溶液1 ml，依法顯色定容后測(cè)定，測(cè)定吸光度值，RSD為0.26%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一樣品6份，每份1.0 g，依法顯色定容后測(cè)定，測(cè)得樣品中多糖的平均含量為32.61%，RSD=1.00%，表明重復(fù)性良好。

2.2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)精確稱取樣品分別按2.2.2和2.2.3制備供試品溶液，依法顯色后放置0，10，20，30，40，50，60 min測(cè)定吸光度，多糖吸光度的RSD為0.97%，結(jié)果表明供試品溶液顯色后60 min內(nèi)基本穩(wěn)定，說(shuō)明樣品在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4.4 加樣回收率試驗(yàn)精密稱定已知含量的艾納香粉末6份，每份0.5 g，置圓底燒瓶中，加入葡萄糖對(duì)照品溶液適量。按2.2.2和2.2.3項(xiàng)制備供試品溶液，在625 nm最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，多糖平均加樣回收率為99.92%，RSD為2.21%；具體見(jiàn)表6，結(jié)果表明該方法可行。

表6 樣品加樣回收率試驗(yàn)

2.2.5 樣品的測(cè)定取不同來(lái)源艾納香，按2.2.2和2.2.3項(xiàng)制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下方法顯色并依法測(cè)定顯色前后吸光度，計(jì)算樣品中多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

根據(jù)下列公式計(jì)算多糖含量：多糖含量=可溶性多糖含量＋粗多糖含量。

3 結(jié)果與分析

表7 不同產(chǎn)地艾納香中總糖、還原糖和多糖的含量

4 討論

通過(guò)測(cè)定不同產(chǎn)地艾納香中的總糖、還原糖和多糖的含量發(fā)現(xiàn)總糖含量大多數(shù)在20%左右，2號(hào)、5號(hào)、6號(hào)樣品的含量則相對(duì)偏高一些。還原糖含量在2%～7%左右，可溶性多糖含量在1.4%～4.95%左右，粗多糖在15%左右。通過(guò)查閱大量文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)對(duì)艾納香的研究多集中于其黃酮類成分和揮發(fā)油方面，對(duì)艾納香糖類成分的含量測(cè)定方面幾乎沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道，因此借鑒了其他關(guān)于糖類成分含量測(cè)定的方法的文獻(xiàn)，測(cè)定艾納香中糖類成分的含量。近年來(lái)，多糖的研究成為熱點(diǎn)，具有抗癌等藥理活性，因此通過(guò)測(cè)定艾納香糖類的含量可以為其是否具有開(kāi)發(fā)價(jià)值提供參考依據(jù)。

[1]中國(guó)科學(xué)院《中國(guó)植物志》編委會(huì).中國(guó)植物志：第75卷[M].北京：科學(xué)出版社，1979：13，75.

[2]貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].貴陽(yáng):貴州科學(xué)技術(shù)出版社，2003:118.

[3]周欣，楊小生.艾納香揮發(fā)油化學(xué)成分的氣相質(zhì)譜分析分析[J].測(cè)試學(xué)報(bào)，2001，76(1)128-130.

[4]趙金華，康暉，姚光輝，等.艾納香化學(xué)成分研究[J].中草藥，2007，28(3): 350-352.

[5]韋睿斌，楊全，龐玉新，等.艾納香不同部位多酚和黃酮類抗氧化活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2015，27(7):1242-1247，1286

[6]嚴(yán)敏，王玉鳳，湯洪敏.黔產(chǎn)艾納香生物堿的提取及含量測(cè)定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，53(10):2236-2239.

Contents Determination of Miao Medicine Saccharide in Blumea balsamifera DC

LIU Gang1,2,3,LIU Yuchen1,2,3,WEI Hanmei1,YU Fulai4,5,PANG Yuxin4,5,LI Xia6,JIA Jinyan6
(1.School of Pharmacy,Guiyang University of Chinese Medicine,Guiyang 550002,China; 2.National Miao's Mendicines Engineering Research Center,Guiyang 550025,China; 3.Guizhou Provincial Key Lab of Miao's Mendicines,Guiyang 550025,China; 4.Tropical Crops Genetic Resources Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key Laboratory of Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China,Hainan Province,Danzhou 571737,China; 5.Hainan Provincial Engineering Research Center for Blumea Balsamifera,Hainan Province,Danzhou 571737,China; 6.Guizhou Holy Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guiyang 550018,China)

Objective To investigate the carbohydrate components of Blumea balsamifera in different habitats.Methods The UV visible spectrophotometer was used to determine the carbohydrate components of Blumea balsamifera.Results The total sugar,from different habitats of Blumea balsamifera the reducing sugar and polysaccharide content is basically same,No.2 and No.6 origin of the sugar content is relatively high.Conclusion Guizhou Red River the cultivation of Blumea balsamifera sugar content is relatively high, and there is no obvious difference between other origins.This study could provide a simple,rapid and scientific evidence to construct a multiple indicator system for evaluating the quality of Blumea balsamifera DC.

Blumea balsamifera;total sugar;reducing sugar;polysaccharide;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.04.060

1672-2779（2017）-04-0135-03

：張文娟本文校對(duì)：龍毅

2016-10-24）

貴州重大課題專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目【No：黔科合重大專項(xiàng)字[2013]6011號(hào)】

*通訊作者：lyc8564732@163.com