覃日吉,韋海春
(1.柳州市柳江區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科,廣西柳州545100;2.柳州市婦幼保健院檢驗(yàn)科,廣西柳州545001)
新生兒ABO血型鑒定方法的研究進(jìn)展
覃日吉1,韋海春2
(1.柳州市柳江區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科,廣西柳州545100;2.柳州市婦幼保健院檢驗(yàn)科,廣西柳州545001)
新生兒ABO血型鑒定常因抗體效價(jià)低或紅細(xì)胞表面抗原形成不足而出現(xiàn)正、反定型不符,給血型鑒定帶來(lái)了困難,嚴(yán)重影響新生兒的輸血安全。因此,重視對(duì)新生兒ABO血型鑒定方法的研究,選取最佳的鑒定方法,以確保新生兒輸血的安全性和有效性顯得十分重要。本文對(duì)近年新生兒ABO血型鑒定方法的研究進(jìn)展作一綜述。
新生兒;血型鑒定;玻片法;試管法;微量板法;微柱凝膠法
ABO血型是唯一一個(gè)抗原抗體正反規(guī)律的血型,也是臨床輸血最重要的血型。ABO血型不合的輸血可導(dǎo)致致命的急性血管內(nèi)溶血反應(yīng)和母子ABO系統(tǒng)血型不合造成的ABO系統(tǒng)新生兒溶血病[1]。由于新生兒紅細(xì)胞血型抗原形成不足或抗體效價(jià)低,以及母體抗體包被抗原等而出現(xiàn)血型鑒定方法凝集很弱或不凝集現(xiàn)象,出現(xiàn)正、反定型不符結(jié)果,給血型鑒定帶來(lái)一定的困難[2],嚴(yán)重影響新生兒的輸血安全。本文對(duì)新生兒ABO血型鑒定方法的研究進(jìn)展綜述如下:
玻片法是利用血凝反應(yīng)原理,IgM型抗-A和抗B抗體及有A/B抗原的紅細(xì)胞在液體介質(zhì)中直接反應(yīng),通過(guò)抗體的力量凝紅細(xì)胞而無(wú)離心力加速反應(yīng),出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集[1]。操作方法:(1)正定型:在清潔的玻片上,用蠟筆劃成3個(gè)圓圈,在其中滴加受檢者紅細(xì)胞懸液各1滴,再分別加1滴抗-A、抗-B和抗-A、B標(biāo)準(zhǔn)血清,混勻;(2)反定型:另取潔凈玻片1張,同樣用蠟筆劃成3個(gè)圓圈,分別滴加受檢者血清各1滴,再用滴管加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴,混勻。2 m in末觀察結(jié)果,凝集(或溶血)為陽(yáng)性反應(yīng),均勻細(xì)胞懸液為陰性結(jié)果。玻片法操作簡(jiǎn)單、方便快捷被廣泛應(yīng)用于臨床,但受環(huán)境和經(jīng)驗(yàn)因素影響較大,準(zhǔn)確性較低,適宜作為初篩方法。
王然婷[3]將154例受檢者分別采用玻片法及試管法進(jìn)行血型鑒定,結(jié)果顯示兩種方法鑒定結(jié)果基本一致,其中AB型兩種方法鑒定結(jié)果相同,A型、B型及O型以試管法的鑒定準(zhǔn)確率高于玻片法,但兩種方法鑒定結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);她認(rèn)為采用玻片法和試管法進(jìn)行血型鑒定,應(yīng)做好一人一玻片,以避免檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤;在采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范操作,避免標(biāo)本采集錯(cuò)誤;填寫(xiě)報(bào)告單、輸血單時(shí)要嚴(yán)謹(jǐn)仔細(xì),認(rèn)真核對(duì)嚴(yán)防血型填寫(xiě)錯(cuò)誤[3]。劉凱等[4]為了觀察玻片法和微柱凝膠法鑒定ABO血型正確性的差異,對(duì)224例患者采用EDTA-K2抗凝劑抗凝的血型鑒定標(biāo)本,同時(shí)采用玻片法和手工微柱凝膠法進(jìn)行鑒定。結(jié)果玻片法一次性判讀正確率正定型為98.6%、反定型為97.5%;手工微柱凝膠法一次性判讀正確率正定型為100%、反定型為99.9%,兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。表明在一次性判讀正確率方面,手工微柱凝膠法優(yōu)于玻片法,可以有效減少或杜絕血型鑒定的錯(cuò)誤。
試管法是利用血凝反應(yīng)原理,將IgM抗-A和抗B抗體及有A/B抗原的紅細(xì)胞在液體介質(zhì)中直接反應(yīng),并通過(guò)離心力加速反應(yīng),出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集[1]。操作方法:(1)正定型:分別滴加抗-A、抗-B和抗-A、B標(biāo)準(zhǔn)血清各1滴于標(biāo)記的試管,再用滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液各1滴,混勻;(2)反定型:另取試管3支,分別標(biāo)明A紅細(xì)胞、B紅細(xì)胞和O紅細(xì)胞,用滴管分別在試管中滴加受檢者血清各2滴,再分別加入A、B和O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液各1滴,混勻;(3)室溫反應(yīng)平衡后,以900~1000 g,離心15~30 s。輕輕搖動(dòng)試管,用液體沖刷紅細(xì)胞扣,肉眼觀察細(xì)胞扣劃落情況,判斷有無(wú)凝集或溶血現(xiàn)象。試管法是傳統(tǒng)經(jīng)典的ABO定型方法,也是基層醫(yī)院常規(guī)采用的血型鑒定方法,配合正反定型,確定ABO血型的準(zhǔn)確性高。但與微柱凝膠法相比,其操作難以規(guī)范化、自動(dòng)化,鑒定敏感性較差,且檢測(cè)結(jié)果不易保存。
張敏等[5]采用試管法、微柱凝膠血型卡和抗人球蛋白卡對(duì)60名嬰兒全血標(biāo)本進(jìn)行ABO血型鑒定,同時(shí)比較60名標(biāo)本抗體檢出率在血型和年齡分布中的差異。結(jié)果顯示:試管法、微柱凝膠血型卡和抗人球蛋白卡鑒定時(shí),正定型結(jié)果一致;反定型時(shí),其抗體檢出率分別為81.7%、70.0%、91.7%,三種方法抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在≥4個(gè)月嬰兒A型抗體檢出率分別為100%、75%、93.8%,試管法和微柱凝膠血型卡A型抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。指出采用試管法檢測(cè)時(shí),控制好離心力和振蕩試管力度,反而能觀察到較弱的凝集,在微柱凝膠血型卡未能檢出的抗體反而試管法可以檢測(cè)出。申衛(wèi)和[6]對(duì)1 193例門(mén)診新生兒患者分別采用玻片法、試管法和手工微柱凝膠法進(jìn)行ABO、RhD血型正反對(duì)比鑒定,結(jié)果顯示:一次性正確率,玻片法正定型為98.91%,試管法正定型為99.92%、反定型為99.83%,手工微柱凝膠法分別為100%、99.97%,提示在ABO血型鑒定中,手工微柱凝膠法的靈敏度和準(zhǔn)確性優(yōu)于試管法,試管法優(yōu)于玻片法。李萌等[7]對(duì)408例嬰幼兒(其中0~6個(gè)月115例,6個(gè)月~1歲124例,>1歲169例)血型采用微柱凝膠法結(jié)合鹽水試管法進(jìn)行血型反定型。結(jié)果:正反定型不一致的比例分別為0~6個(gè)月為73%(84/115),6個(gè)月~1歲為14.5%(18/124),1歲以上為3.0%(5/169);正反定型不一致者血型構(gòu)成比分別為A型占41.1%(44/107),B型占19.6%(21/107),O型占39.3%(42/107);23例正反定型不一致者經(jīng)鹽水試管法離心3次后,其反定型結(jié)果與正定型相符。認(rèn)為抗原較弱血型鑒定時(shí),微柱凝膠法均能清晰反應(yīng),結(jié)果直觀可靠。但在檢測(cè)弱抗體時(shí),若采用傳統(tǒng)鹽水試管法進(jìn)行鑒定,則可以有效檢出弱抗體。所以在嬰幼兒ABO血型鑒定時(shí),采用微柱凝膠法結(jié)合鹽水試管法,更能準(zhǔn)確反映血型結(jié)果。鄺苑麗等[8]分析了某醫(yī)院2003年8月至2013年8月試管法血型鑒定錯(cuò)誤有11例、住院患者輸血不符有3例的主要原因,其中43%(6/14)是檢驗(yàn)人員粗心大意或操作不當(dāng)所造成;29%(4/14)是臨床醫(yī)生或護(hù)士粗心大意或不嚴(yán)格執(zhí)行查對(duì)制度所致;21% (3/14)是由于受檢者血液含有較多的自身冷凝素造成的假陽(yáng)性。因此,在ABO血型鑒定過(guò)程中必須嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程完成,以獲得準(zhǔn)確的血型,確保安全輸血。
微量板法主要包括梯形微板法和U型微板法。梯形微板法:是用全自動(dòng)加樣系統(tǒng)將標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和待檢血漿分別加入梯形微板中,振蕩混勻,靜置反應(yīng)后,用數(shù)字血型分析儀進(jìn)行讀板。該方法是將每個(gè)微孔分解為6 300點(diǎn),劃分為3個(gè)不同的區(qū)域進(jìn)行掃描,并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用CCD系統(tǒng)圖像數(shù)字化處理,運(yùn)用模糊數(shù)學(xué)的方法進(jìn)行分析判斷,得出血型鑒定結(jié)果。U型微板法:也是用全自動(dòng)加樣系統(tǒng)將標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和待檢血漿加入U(xiǎn)型微板中,振蕩混勻、離心、懸浮、靜置稍許。用酶標(biāo)儀掃描。獲取每孔的相對(duì)透光率Tc。根據(jù)ABO血型定型原則確定反定型結(jié)果[9]。韓璐等[9]采用梯形微板法和U型微板法進(jìn)行血型反定型檢測(cè)的比較研究,結(jié)果顯示:(1)1次判斷正確率梯形微板法為100%(1 003/1 003),U型微板法為98.5%(988/1 003),兩種方法比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(2)靈敏度:分別取A型、B型血漿各30份混合配成AB型血漿,倍比稀釋后用梯形微板法和U型微板法檢測(cè)。結(jié)果:梯型微板法A、B細(xì)胞側(cè)可檢出的稀釋倍數(shù)均為6.25%(1/16);U型微板法A細(xì)胞側(cè)可檢出的稀釋倍數(shù)為25%(1/4),B細(xì)胞側(cè)可檢出的稀釋倍數(shù)為12.5%(1/8)。(3)亞型和不規(guī)則抗體檢查率:兩種方法對(duì)ABO亞型的檢出率均為0.013%(P>0.05),不規(guī)則抗體檢出率梯形微板法為0.03%(36/120 469),明顯高于U型微板法的0.008%(9/115 278),兩種方法比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說(shuō)明梯型微板法的準(zhǔn)確性、靈敏度、不規(guī)則抗體的檢出率都優(yōu)于U型微板法。萬(wàn)德學(xué)等[10]、鄔麗芳等[11]研究認(rèn)為微量板法把血型儀、全自動(dòng)加樣儀、酶標(biāo)儀有機(jī)結(jié)合,改變了傳統(tǒng)的手工操作,減少了人工誤差,實(shí)現(xiàn)了ABO血型鑒定自動(dòng)化,是一種既省時(shí)又省力的ABO血型鑒定方法。
微柱凝膠法是新興的血型血清學(xué)檢測(cè)技術(shù),在微柱凝膠介質(zhì)中,紅細(xì)胞A、B抗原與相應(yīng)抗-A、抗-B抗體結(jié)合,利用凝膠的空間位阻,經(jīng)低速離心,凝集的紅細(xì)胞懸液在凝膠上層,未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠底部[1]。操作方法:①按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程配制好檢測(cè)樣本的紅細(xì)胞懸液和試劑紅細(xì)胞懸液。②在反定型的微柱凝膠檢測(cè)管中先加入檢測(cè)樣本的血清或血漿,再加入試劑紅細(xì)胞懸液;在正定型的微柱凝膠檢測(cè)管中加入樣本的紅細(xì)胞懸液。③按實(shí)驗(yàn)操作流程在專用微柱凝膠離心機(jī)中低速離心。出現(xiàn)凝集和(或)溶血結(jié)果為陽(yáng)性,不凝集為陰性。該方法具有易于操作標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化、判讀客觀和可靠、鑒定準(zhǔn)確性較高、結(jié)果可長(zhǎng)期保存、有利于大量樣本操作等優(yōu)點(diǎn)[1]。尤其在引入全自動(dòng)加樣、離心判讀結(jié)果后,實(shí)現(xiàn)了血型鑒定的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化[12],消除了人為因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響[13],已有取代試管法的趨勢(shì),是西方國(guó)家常規(guī)采用ABO血型的鑒定方法[14-15]。但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如果被檢血清、血漿中存在高效價(jià)冷凝集抗體或蛋白異常,可能出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性,同時(shí)微柱凝膠法檢測(cè)成本較高。
范小春[16]將257例住院的1d~6個(gè)月嬰幼兒根據(jù)年齡分為四組,1~10 d為Ⅰ組,共69例;10 d~1個(gè)月為Ⅱ組,共71例;1~3個(gè)月為Ⅲ組,共60例;3~6個(gè)月為Ⅳ組,共57例。分別采用試管法和微柱凝膠法進(jìn)行ABO血型正反定型鑒定,結(jié)果:試管法Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組正反定型符合率分別為52.17%、53.52%、66.67%、73.68%,微柱凝膠法則分別為65.22%、67.61%、83.33%、87.72%,兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),提示微柱凝膠法檢測(cè)正反定型符合率明顯高于試管法,表明隨著嬰幼兒年齡的增長(zhǎng),其正反定型符合率也隨之增加。常靜秋[17]分別采用國(guó)產(chǎn)、進(jìn)口微柱凝膠卡,試管法對(duì)500份新生兒血液標(biāo)本進(jìn)行ABO血型鑒定,結(jié)果顯示微柱凝膠法比試管法的操作更加標(biāo)準(zhǔn)化,靈敏度、特異性、客觀性等方面均優(yōu)于試管法(均P<0.05),國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口微柱凝膠卡的血型鑒定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但國(guó)產(chǎn)微柱凝膠卡費(fèi)用相對(duì)較低,可廣泛應(yīng)用于臨床。馬曙軒等[18]觀察了國(guó)產(chǎn)微柱凝膠卡(甲卡)與進(jìn)口微柱凝膠卡(乙卡)鑒定3歲以下嬰幼兒ABO及RhD血型的效果,共檢測(cè)6個(gè)月齡以下患兒3 938例,其中早產(chǎn)兒96例,足月新生兒355例,血液病患兒570例,其他疾病患兒2 917例。A抗原、B抗原、D抗原初檢及復(fù)檢兩種卡符合率為100%;早產(chǎn)兒A、B抗原凝集強(qiáng)度3+以上者兩種卡均達(dá)83%左右,兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。檢測(cè)7個(gè)月齡~3歲患兒12 500例,A抗原、B抗原、D抗原初檢及復(fù)檢符合率為100%。表明甲卡和乙卡在鑒定3歲以下嬰幼兒A抗原、B抗原、D抗原的能力方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩者均能夠保證患兒血型鑒定及安全輸血的需求。王嬌華等[19]采用微柱凝膠法檢測(cè)6 560血型標(biāo)本,結(jié)果顯示正反定型不符37例。分析其原因,分別是疾病因素影響26例(70.3%),臨床治療影響7例(18.9%),生理因素影響4例(10.8%)。徐星洋等[20]采用Autovue Innova血型儀全自動(dòng)法與鹽水手工法對(duì)5 302例血型標(biāo)本進(jìn)行ABO血型及Rh(D)血型鑒定,結(jié)果合格率分別為99.7%和99.6%,兩種方法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但Autovue Innova全自動(dòng)法比手工鹽水法速度快、效率高、結(jié)果準(zhǔn)確,更適用于大批量血型標(biāo)本檢測(cè)。吳穗等[12]分別采用美國(guó)強(qiáng)生Ortho Autouve Innova全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)(儀器法)和傳統(tǒng)試管法對(duì)9 350份EDTA-K2抗凝血樣本進(jìn)行ABO血型和RhD血型檢測(cè)。結(jié)果:儀器法與試管法共檢出A型2 982例、B型2 545例、O型2 823例、AB型1 000例,一次性判斷準(zhǔn)確率分別為99.71%、100.00%;共檢出Rh陰性48例,陰性率占0.51%,一次性判斷準(zhǔn)確率分別為99.74%、100.00%。兩種方法檢測(cè)準(zhǔn)確率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。其中儀器法檢出正反定型不一致者37例,包括新生兒18例,抗原減弱、抗體效價(jià)減低6例等。表明全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)用于ABO血型和RhD血型檢測(cè)安全可靠,靈敏度高,易于檢出弱抗原、弱抗體及發(fā)現(xiàn)ABO亞型。由于強(qiáng)生Antove系統(tǒng)能將所有樣本、各種檢測(cè)試劑用條碼識(shí)別進(jìn)入主數(shù)據(jù)庫(kù),實(shí)現(xiàn)了血型鑒定過(guò)程中加樣、離心、結(jié)果判讀的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化[20-24]。對(duì)提高ABO血型鑒定檢驗(yàn)質(zhì)量發(fā)揮了很大的促進(jìn)作用。
上述4種鑒定方法各有優(yōu)缺點(diǎn),玻片法簡(jiǎn)單易行,但易受環(huán)境和經(jīng)驗(yàn)因素的影響,準(zhǔn)確性相對(duì)較低,適合作為初篩方法。試管法是經(jīng)典的ABO定型方法,操作簡(jiǎn)單、快捷,確定ABO血型的準(zhǔn)確性高,但操作難以規(guī)范化、自動(dòng)化,且檢測(cè)結(jié)果不易保存。微量板法和微柱凝膠法改變了傳統(tǒng)的手工操作,減少了人工誤差,實(shí)現(xiàn)了操作自動(dòng)化,其鑒定準(zhǔn)確率高,且檢測(cè)數(shù)據(jù)可以保存和網(wǎng)絡(luò)傳送,但檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高。美國(guó)強(qiáng)生Ortho Autouve Innova全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了血型鑒定過(guò)程中加樣、離心、結(jié)果判讀、保存及查詢?nèi)^(guò)程的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化,提高了ABO血型鑒定檢驗(yàn)質(zhì)量。總之,新生兒ABO血型鑒定方法取得了許多理想的研究成果,對(duì)于提高血型鑒定質(zhì)量,確保新生兒輸血的安全性和有效性都具有重要的臨床意義。至于制定適合嬰幼兒個(gè)體化血型鑒定作業(yè)程序,標(biāo)本采集和處理的標(biāo)準(zhǔn)化要求,應(yīng)用多少濃度紅細(xì)胞懸液才能準(zhǔn)確鑒定血型,多少溫度和濕度才能確??乖罴逊磻?yīng),怎樣的抗原抗體比例才能完全表達(dá)紅細(xì)胞表型,如何解決ABO以外抗體對(duì)血型鑒定的干擾,諸如此類(lèi)問(wèn)題仍有待今后的進(jìn)一步研究[25]。
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R457.1+1
A
1003—6350(2017)13—2164—04
10.3969/j.issn.1003-6350.2017.13.031
2016-11-17)
廣西衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)自籌資金課題(編號(hào):2016694)
覃日吉。E-mail:ganhongyu1111@163.com