吳金鵬,范建新

牛子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌的分離、鑒定與治療

吳金鵬1,范建新2

(1.黑龍江省巴彥縣黑山鎮(zhèn)畜牧發(fā)展服務(wù)中心151800；2. 黑龍江省巴彥縣松花江鄉(xiāng)獸牧發(fā)展服務(wù)中心151800)

母牛子宮內(nèi)膜炎為子宮黏膜急性發(fā)炎，如不及時治療，炎癥易于擴(kuò)散，引起子宮肌炎、子宮漿膜炎或子宮周圍炎，并常轉(zhuǎn)化為慢性炎癥，導(dǎo)致母牛不孕。子宮內(nèi)膜炎是造成母牛不孕的主要原因之一，嚴(yán)重影響著母牛的繁殖，而且增加飼料消耗和治療費，會造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

產(chǎn)房衛(wèi)生條件差，臨產(chǎn)母牛的外陰、尾根部污染糞便而未徹底洗凈消毒；助產(chǎn)或剝離胎衣時，術(shù)者的手臂、器械消毒不嚴(yán)，胎衣不下腐敗分解，惡露停滯等，均可引起產(chǎn)后子宮內(nèi)膜感染。產(chǎn)后早期能引起子宮炎的細(xì)菌有：化膿性放線菌、壞死梭桿菌、擬桿菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、變形桿菌、假單胞菌、梭狀芽孢桿菌。

1 材料與方法

1.1 材料

本次實驗選用的為不同地區(qū)養(yǎng)牛場患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛105頭作為研究對象。

1.2 方法

1.2.1 采集病樣

選取臨床確診為患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛，對其陰戶進(jìn)行清洗消毒，并使用一次性輸精管一支，用棉球沾濕75%的酒精進(jìn)行擦拭消毒，然后通過把握直腸法將輸精管向牛子宮內(nèi)插入。而在輸精管另一側(cè)，將輸精管直接接上，并數(shù)次在牛子宮內(nèi)抽吸，這樣輸精管內(nèi)就能吸入少量的子宮分泌物。此時將輸精管抽出，其外部的粘附物使用75%的酒精棉球擦拭干凈，然后剪下含有牛子宮分泌物的一段，將其放入無菌試管中，實施密封備用。在這個過程中，要盡可能進(jìn)行確保無菌操作，以防感染。

1.2.2 細(xì)菌的分離、鑒定與治療

首先，在牛鮮血平皿或者綿羊鮮血平皿上，對子宮分泌物進(jìn)行接種，培養(yǎng)18～24 h。其次，在長出細(xì)菌的培養(yǎng)皿中，挑選出一些優(yōu)勢菌落，接著對這些菌落進(jìn)行分離純化培養(yǎng)。在這個過程中，可以接種一些馬丁肉湯，以促進(jìn)純化較難的菌種，20 min劇烈搖動之后，再于平皿中進(jìn)行接種培養(yǎng)，直至將單個菌落分離出來。三是細(xì)菌純化結(jié)束之后，進(jìn)行革蘭氏染色，同時按照菌體大小、菌落形態(tài)以及抗酸染色等，初步對細(xì)菌進(jìn)行分類，然后在鑒別培養(yǎng)基中，如麥康凱瓊脂平皿、卻甫曼瓊脂平皿、愛德華瓊脂平皿中，分別進(jìn)行改良和培養(yǎng)。最后是在此前提下，進(jìn)行一系列的生化實驗，如OF實驗、氧化酶、接觸酶等，以便對各科之間的細(xì)菌、非發(fā)酵型細(xì)菌以及發(fā)酵型細(xì)菌進(jìn)行合理的分類。也可按照染色特點、細(xì)菌形等進(jìn)行分類，而鑒定則采用生化鑒定編碼，這樣就能根據(jù)各科/屬真菌/細(xì)菌生化鑒定編碼等，將鑒定結(jié)果查找出來。

1.2.3 藥物敏感試驗

從杭州天和微生物試劑有限公司購買MH瓊脂培養(yǎng)基與藥敏紙片。質(zhì)控菌從中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所購買，主要為ATCC25923金黃葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌、ATCC25922大腸桿菌。按相關(guān)臨床要求以及藥敏試驗選取規(guī)則，所選擇的抗菌藥片為：頭孢呋辛（呋）、恩諾沙星（恩）、新生霉素（生）、卡那霉素（卡）、環(huán)丙沙星（環(huán)）、先鋒V（V）、氧氟沙星（嗪）、慶大霉素（慶）、鏈霉素（鏈）、四環(huán)素（四）、菌必治（菌）、復(fù)達(dá)欣（欣）、青霉素G（青）、氨芐青霉素（氨）、林可霉素（林）、氯霉素（氯）、紅霉素（紅）、多粘菌素（多）。

實驗通過藥敏紙片供試片瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）完成。

2 結(jié)果

2.1 鑒定結(jié)果

本次實驗通過分離鑒定105頭牛的子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌，其中，只有兩頭牛的子宮分泌物中，沒有病原菌分離出來，其余102頭牛子宮內(nèi)的分泌物中，均有病原菌分離出來，且分離出的菌株有200個，病原菌35種。其中，腸桿菌科細(xì)菌的分離率為43.5%，相對較高，而非發(fā)酵細(xì)菌的分離率為17.5%，弧菌科細(xì)菌的分離率為23%。另外，還有真菌、鏈球菌以及葡萄球菌等分離出來，占到了分離菌種總數(shù)的16%左右。通過分離牛子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌的實驗可以看出，目前牛患有的子宮內(nèi)膜炎中，存在兩種感染形式，即單一感染和混合感染。

2.2 藥敏試驗結(jié)果

通過藥敏試驗結(jié)果得出，非發(fā)酵型細(xì)菌、弧菌科細(xì)菌以及腸桿菌科細(xì)菌等，對于青霉素以及氨芐青霉素等產(chǎn)生的耐藥性相對較強(qiáng)；而對于鏈霉素、四環(huán)素、先鋒V、卡那霉素、頭孢呋辛、氯霉素、新霉素以及多粘霉素等，也出現(xiàn)了程度不同的耐藥菌株，但是對慶大霉素、恩諾沙星等，出現(xiàn)的反應(yīng)則較為敏感。另外，鏈球菌以及葡萄球菌等，對青霉素產(chǎn)生的耐藥性非常強(qiáng)，而對于新生霉素、新霉素、鏈霉素以及卡那霉素等，產(chǎn)生的耐藥性的程度具有較大的不同。

3 討論

本次實驗中，對于真菌、弧形菌、變形桿菌、不動桿菌、假單胞菌、鏈球菌、葡萄球菌以及腸桿菌等的分離鑒定，與引起牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌，例如變形桿菌、放線菌、金黃色葡萄球菌、克雷伯氏菌、沙門氏菌、大海滄桿菌、摩氏桿菌、鏈球菌、假單胞桿菌等大體一致，但是又存在一定的差異，而這可能與牛所處的環(huán)境以及衛(wèi)生條件等有關(guān)。由于時間的限制，本次實驗沒有分離培養(yǎng)厭氧菌，而從患有子宮內(nèi)膜炎的牛子宮分泌物中分離出了多種病原菌，這些病原菌并不能直接作為導(dǎo)致牛子宮內(nèi)膜炎的致病因子。對于是何種或者哪幾種病原菌導(dǎo)致牛患有子宮內(nèi)膜炎，則還需進(jìn)行深入的研究。

S858.23

B

1005-2739（2017）02-0041-02

2016-12-19

吳金鵬（1972-），男，本科，獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)工作。