單文靜+吳健

[摘要]目的 探討中藥材川貝母中脂肪酸成分。方法 采用石油醚索氏抽提法提取中藥材川貝母中的脂肪油，經(jīng)三氟化硼乙醚甲醇溶液甲酯化處理，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）測(cè)定脂肪酸的組成。結(jié)果 試驗(yàn)共分出7個(gè)峰，確定了川貝母所含有的5種脂肪酸成分主要為豆蔻酸、棕櫚酸、亞油酸、丁酸、硬酯酸。結(jié)論 川貝母藥材中含有多種重要脂肪酸成分，為川貝母脂肪酸成分的使用提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]川貝母；脂肪酸；化學(xué)成分；氣相色譜-質(zhì)譜法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）11（c）-0135-03

[Abstract]Objective To analyzed Fatty Acids components in Fritillaria cirrhosa D.Don by GC-MS.Methods The contents and chemical compositions of the Fatty Acids in Fritillaria cirrhosa D.Don were investigated and determined in this paper.Fatty oil was extracted with petroleum ether.The oil was determined by GC-MS after the preparation of the methyl esters with BF3-CH3-OH.Results The experimental results showed that there were seperated 7 peaks，5 components of fatty acids in the oil of Fritillaria cirrhosa D.Don.There were Hexadecanoic acid，Octadecanoic acid，Tetradecanoic acid，Butanoic acid，Stearicacid.Conclusion The exepriment reveals that there are some impotent fatty acids in Fritillaria cirrhosa D.Don.These results provide a theoretical basis for management and utilization of atty acids in FritillariacirrhosaD.Don.

[Key words]Fritillaria cirrhosa D.Don；Fatty Acid；Chemistry composition；GC-MS

川貝母系百合科植物川貝母Fritillaria cirrhosa D.Don的干燥鱗莖[1]。川貝母也是川產(chǎn)道地藥材中最具有代表性的藥材之一，具有清熱潤(rùn)肺，化痰止咳的療效，有“止咳圣藥”之稱(chēng)。臨床主要用于虛勞咳嗽、肺熱燥咳、瘰疬、乳癰、肺癰[2]，目前，未發(fā)現(xiàn)關(guān)于其脂肪酸成分的研究報(bào)道。脂肪酸在生命過(guò)程中具有非常重要的作用[3-6]。本文用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)川貝母中的脂肪酸進(jìn)行了測(cè)定， 旨在為進(jìn)一步研究川貝母的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范藥物的使用奠定基礎(chǔ)。

1儀器與試藥

1.1儀器

GC-17A氣相色譜儀（日本島津公司），RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器（上海亞榮生化儀器廠），QP5050A質(zhì)譜儀（日本島津公司），HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華儀器有限公司），SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城儀器廠）。

1.2藥品與試劑

川貝母藥材2013年6月購(gòu)買(mǎi)于哈爾濱三棵樹(shù)藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)生藥學(xué)博士項(xiàng)崢鑒定，確認(rèn)其為百合科植物川貝母Fritillaria cirrhosa D.Don的干燥鱗莖。石油醚、氫氧化鈉、三氟化硼乙醚、正己烷、氯化鈉、甲醇、正十八烷等均為分析純?cè)噭綎|禹王化學(xué)試劑有效公司生產(chǎn)，水為純凈水。

2方法與結(jié)果

2.1處理方法

取川貝母粗粉約5 g，精密稱(chēng)定，置于250 ml圓底燒瓶中，加入石油醚100 ml，80℃水浴鍋中回流8 h，濾過(guò)，置于500 ml圓底燒瓶中，減壓回收石油醚，得到脂肪油；加入0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液5 ml，置80℃回流皂化40 min，至油珠全部消失；再加入體積分?jǐn)?shù)為15%的三氟化硼乙醚甲醇溶液2 ml，酯化反應(yīng)15 min，放冷；精密加入正己烷5 ml反應(yīng)5 min，取出，置于分液漏斗中，加入飽和氯化鈉溶液5 ml，振搖，靜置。精密量取上層溶液2 ml，置于10 ml量瓶中，正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2色譜條件

色譜柱：DB-1石英毛細(xì)管柱（30 mm×0.25 mm，0.25 μm）（大連中匯達(dá)科學(xué)儀器有限公司）；進(jìn)樣口溫度：290℃；升溫程序：初始溫度180℃，以5℃/min升至290℃維持10 min；載氣：體積分?jǐn)?shù)為99.999%的氦氣；進(jìn)樣量：0.5 μl；分流比∶10∶1；流速：0.8 ml/min。

2.3 質(zhì)譜條件

離子源：電子轟擊離子源（EI），離子源溫度：225℃，電子能量：75 eV，氣相色譜質(zhì)譜接口溫度：235℃，質(zhì)量掃描范圍：m/z=35～510。

2.4結(jié)果

川貝母脂肪酸成分的測(cè)定采用脂肪酸甲酯化法對(duì)川貝母中脂肪酸成分進(jìn)行分離、分析，共分離得到7個(gè)色譜峰（圖1）。

川貝母石油醚提取物甲酯化后的總離子流色譜圖（TIC），根據(jù) GC-MS 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，確定每一種成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，所有化合物的匹配度（≥60%），終推測(cè)出脂肪酸成分5個(gè)（表1）。

3討論

3.1脂肪油提取時(shí)間的考察

采用石油醚（60～90℃）為提取溶劑，考察不同的提取時(shí)間（4、8、12 h）對(duì)川貝母中各脂肪酸成分的影響，最后得出結(jié)論，提取時(shí)間為8 h的條件下，川貝母中的脂肪酸提取率較高。

3.2 甲酯化方法的選擇

選擇甲醇為酯化試劑、三氟化硼為催化劑的甲醇-三氟化硼法進(jìn)行酯化反應(yīng)，方法簡(jiǎn)便、快速[7]。

3.3 川貝母中脂肪酸的特點(diǎn)

川貝母中脂肪酸成分含量較高的依次為亞油酸和棕櫚酸，其中亞油酸的含量最高。亞油酸和棕櫚酸是川貝母的主要脂肪酸，占脂肪酸總量的92.64%，亞油酸是人體必需的但又不能在人體自行合成的不飽和脂肪酸，對(duì)血管壁功能的穩(wěn)定與改善起著重要的作用[8]。

在川貝母中檢測(cè)到肉豆蔻酸，可以從大豆發(fā)酵后的產(chǎn)物中提取純化得到，目前已經(jīng)證明其有很強(qiáng)的抗腫瘤作用，是一種極具市場(chǎng)前景的抗腫瘤藥物[9-10]。

文獻(xiàn)[11]通過(guò)肉豆蔻酸對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的探討亦表明：20～40 μg/ml的肉豆蔻酸對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用。

目前人類(lèi)健康受到嚴(yán)重威脅的疾病中，癌癥的死亡率僅次于心血管病。抗腫瘤藥物研究重點(diǎn)從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類(lèi)藥物已經(jīng)轉(zhuǎn)移到新型抗腫瘤藥物領(lǐng)域中，其中以阻斷特異腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為熱點(diǎn)，因此能以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵酶為靶點(diǎn)的高效、低毒、特異性強(qiáng)的新型抗癌藥物成為當(dāng)今抗腫藥物研發(fā)的重要方向[12]。實(shí)驗(yàn)表明，肉豆蔻酸可以阻斷花生四烯酸的通路，干擾環(huán)氧合酶-2的后繼產(chǎn)物血栓素A2的產(chǎn)生，且末端支鏈脂肪酸可通過(guò)抑制髓過(guò)氧化物酶的釋放，減輕自由基反應(yīng)造成的組織損傷[13]。以加入140 mg/ml肉豆蔻酸后培養(yǎng)的腫瘤和正常細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)證明肉豆蔻酸可以高效地誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，不會(huì)引起正常人乳腺上皮細(xì)胞凋亡[14]。黃枚等[15]的實(shí)驗(yàn)也表明肉豆蔻酸有高效的抗癌活性并且可顯著提高鼠的生命存活期。黃健等[16]為了研究肉豆蔻酸促進(jìn)腫瘤凋亡的機(jī)制，選取半胱氨酸蛋白酶家族研究其對(duì)各種底物的作用，實(shí)驗(yàn)表明肉豆蔻酸可以使癌細(xì)胞阻滯于G0/G1期，加速凋亡的過(guò)程。文獻(xiàn)[17-18]研究肉豆蔻酸抗小鼠腫瘤作用實(shí)驗(yàn)證明，肉豆蔻酸可以通過(guò)阻斷小鼠宮頸癌U14腫瘤CPT-1酶通路，抗腫瘤作用強(qiáng)度與抑制腫瘤線粒體CPT-1酶活性呈正比，同時(shí)與傳統(tǒng)抗癌藥物比較，肉豆蔻酸表達(dá)出顯著的抗腫瘤特點(diǎn)，其最高抑瘤率可達(dá)64.9%，且毒副作用小。

綜上所述，川貝母作為川產(chǎn)道地藥材中最具有代表性的藥材，其中的脂肪酸成分，特別是含量較高的亞油酸，棕櫚酸等成分具有多種生物活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，川貝母中可提取出大量對(duì)人體有益的脂肪酸成分，可對(duì)川貝母資源的開(kāi)發(fā)、利用和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂起一定指導(dǎo)作用。

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（收稿日期：2016-07-18 本文編輯：顧雪菲）