何深(開(kāi)封市中心醫(yī)院 血液科 河南 開(kāi)封 475000)

91例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤與EB病毒的關(guān)系研究

何深
(開(kāi)封市中心醫(yī)院 血液科 河南 開(kāi)封 475000)

目的 研究彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)與EB病毒的關(guān)系。方法 將篩選的91例結(jié)外DLBCL患者標(biāo)本制成組織芯片，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)BCL-6、CD10和MUM1水平，將病例分為非生發(fā)中心型(non-GCB)、生發(fā)中心型(GCB)兩個(gè)免疫亞型。再通過(guò)原位雜交技術(shù)檢測(cè)兩個(gè)亞型DLBCL和20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EB病毒編碼的小核糖核酸(EBERs)的表達(dá)。結(jié)果 20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EBERs均為陰性，91例DLBCL中30例EBERs陽(yáng)性表達(dá)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。91例DLBCL中，GCB型44例(48.4%)，non-GCB型47例(51.6%)；EBERs陽(yáng)性表達(dá)30例(33.0%)，其中GCB組中10例EBERs陽(yáng)性(22.7%)，non-GCB組中20例陽(yáng)性(45.5%)。non-GCB組EB病毒感染率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 DLBCL發(fā)生、發(fā)展與EBV感染有關(guān)，不同免疫表型的結(jié)外彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的病因具有異質(zhì)性。

淋巴瘤；B細(xì)胞；EB病毒

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)占成人淋巴瘤總數(shù)的30%～40%，是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常見(jiàn)的一種類(lèi)型，病理機(jī)制較為復(fù)雜，發(fā)展過(guò)程呈侵襲性，臨床表現(xiàn)不一[1]。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，該病發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。低度侵襲性淋巴瘤(如濾泡性淋巴瘤)可以演變?yōu)镈LBCL，這種演變很大程度上可能與一些染色體結(jié)構(gòu)改變有關(guān)[2]，但大多數(shù)情況下，該淋巴瘤多為原發(fā)。國(guó)外學(xué)者等采用免疫組織化學(xué)方法深入研究淋巴瘤中CD10、BCL-6、MUM1蛋白的表達(dá)情況，將DLBCL區(qū)分為兩種免疫類(lèi)型：生發(fā)中心型(GCB)及非生發(fā)中心型(non-GCB)[3]。兩亞型在治療反應(yīng)及生物學(xué)行為表現(xiàn)上均有所不同，可用來(lái)反映不同的病因及其發(fā)病過(guò)程。本研究選取91例DLBCL患者的組織標(biāo)本，探討EB病毒在結(jié)外部位的DLBCL發(fā)病中的作用及其機(jī)制。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2012年1月至2015年7月河南省開(kāi)封市中心醫(yī)院收治的NHL病例，依據(jù)2001年WHO中有關(guān)淋巴造血組織腫瘤分類(lèi)DLBCL診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選[5]，根據(jù)組織形態(tài)、臨床和免疫組化等方面特點(diǎn)選出91例DLBCL病例，其中男51例，女40例， 中位年齡為52歲。對(duì)照組為20例淋巴結(jié)反應(yīng)增生組織患者，其中男12例，女8例，中位年齡為48歲。

1.2 免疫組織化學(xué) 采用免疫組化法(所用抗體均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司)檢測(cè)淋巴瘤中CD10、BCL-6、MUM1蛋白表達(dá)量。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：CD10陽(yáng)性表達(dá)率>10%，BCL-6陽(yáng)性表達(dá)率>5%，MUM1陽(yáng)性表達(dá)率>20%，均視為陽(yáng)性病例。

1.3 EB病毒原位雜交 原位雜交相關(guān)試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，按照試劑盒說(shuō)明中的步驟進(jìn)行檢測(cè)。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：切片中觀察到核型不規(guī)則的細(xì)胞或中—大的淋巴細(xì)胞3個(gè)以上呈EBERs陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，四格表資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫分型 依據(jù)CD10、MUM1、BCL-6免疫組化結(jié)果分為GCB與non-GCB兩種分型。其中GCB型為BCL-6陽(yáng)性、CD10陽(yáng)性(或陰性)、MUM-1陰性，共44例(占48.4%)。non-GCB型為BCL-6陰性或CD10陰性，BCL-6陽(yáng)性，MUM1陽(yáng)性、CD10陽(yáng)性，共47例(51.6%)。

2.2 EBERs原位雜交 GCB組EBERs陽(yáng)性10例(22.7%)，non-GCB組EBERs陽(yáng)性20例(45.5%)；GCB組EBERs陽(yáng)性率低于non-GCB組(P<0.05)。20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EBERs均陰性，91例DLBCL中30例(33.0%)EBERs陽(yáng)性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

DLBCL免疫表型、臨床發(fā)生發(fā)展過(guò)程及遺傳學(xué)特征極具異質(zhì)性，且先前已有報(bào)道證實(shí)其可能包含多個(gè)獨(dú)立的病種，每個(gè)獨(dú)立的病種有其不同的發(fā)病原因及機(jī)制[6]。鑒于此，本研究對(duì)91例DLBCL病例進(jìn)行免疫分型，生發(fā)中心型(GCB)有44例(48.4%)，非生發(fā)中心型(non-GCB)有47例(51.6%)。

在EBV基因組U5-TR區(qū)中，存在1個(gè)左向啟動(dòng)子控制轉(zhuǎn)錄片段，稱(chēng)為BNLF-1基因，PolyA位于BNLF-1基因166946-166950處。BNLF-1為潛在瘤基因，編碼為L(zhǎng)MP-1潛膜蛋白，已成為EB病毒分子學(xué)研究熱點(diǎn)。LMP-1生物學(xué)功能表現(xiàn)在以下方面：①對(duì)B細(xì)胞標(biāo)志及CD23、CD54、CD40等細(xì)胞黏附分子的表達(dá)起上調(diào)作用，對(duì)CD10表達(dá)進(jìn)行下調(diào)，還可激活細(xì)胞LFA3、LFAI、ICAM1等黏附分子的表達(dá)；②誘導(dǎo)NFKB表達(dá)活化；③誘導(dǎo)BCL-2基因及原癌基因的表達(dá)，同時(shí)可上調(diào)p53基因的表達(dá)。EBV基因產(chǎn)物有著關(guān)鍵性的作用，能直(間)接調(diào)節(jié)細(xì)胞基因的表達(dá)，又能影響宿主信號(hào)系統(tǒng)[7]。EBV之所以能夠參與淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展，可能與跟宿主B細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用有關(guān)。但為什么只有一些特定類(lèi)型的淋巴瘤與EB病毒密切相關(guān)，目前仍無(wú)明確答案。關(guān)于彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的病因還不十分清楚，有關(guān)DLBCL中EB病毒感染的報(bào)道，結(jié)果不一致。Pothen等[8]報(bào)道，380例韓國(guó)地區(qū)DLBCL中，有34例EBERs陽(yáng)性，占8.95%。本研究在組織芯片的基礎(chǔ)上大規(guī)模地采用EBERs原位雜交技術(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)EBERs陽(yáng)性率高達(dá)33.0%，GCB組陽(yáng)性率達(dá)22.7%，non-GCB組陽(yáng)性率高達(dá)45.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。將近50%的non-GCB病例EBERs為陽(yáng)性，提示EB病毒在淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色。值得一提的是，這與DLBCL中non-GCB預(yù)后較差是否有關(guān)聯(lián)，需要更深層面的探究。

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R 733.1

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.01.013

2016-03-18)