傅宇成 鄭傳禧 張世權(quán) 關(guān)弘 李偉 譚紀(jì)鋒

. 臨床研究與實(shí)踐 Clinical research and practice .

胸苷激酶 1 與 Ki67 在骨肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義

傅宇成 鄭傳禧 張世權(quán) 關(guān)弘 李偉 譚紀(jì)鋒

目的 檢測(cè)骨肉瘤組織中胸苷激酶 1 ( thymidine kinase 1，TK1 ) 及 Ki67 的表達(dá)水平，并分析 TK1 與 Ki67 之間的表達(dá)差異及其與患者臨床預(yù)后的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué) MaxVisionTM法測(cè)定TK1 及 Ki67 在 50 例骨肉瘤和 20 例骨軟骨瘤中表達(dá)情況。結(jié)果 TK1，Ki67 在骨肉瘤組中陽(yáng)性率分別為 84% ( 42 / 50 )，54% ( 27 / 50 )，在骨軟骨瘤對(duì)照組中陽(yáng)性率分別為 10% ( 2 / 20 )，15% ( 3 / 20 )，兩組間 TK1，Ki67表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在骨肉瘤組中 TK1 陽(yáng)性率高于 Ki67 并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TK1 及 Ki67 的表達(dá)均與患者 Enneking 分期、局部復(fù)發(fā)相關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤大小、病理類(lèi)型等均無(wú)關(guān)。同時(shí) TK1 的表達(dá)與患者肺轉(zhuǎn)移及化療后腫瘤壞死率相關(guān)。TK1 高表達(dá) ( 陽(yáng)性率＞25% ) 患者中位生存時(shí)間短于低表達(dá)者。單因素分析表明，局部復(fù)發(fā)、Enneking 分期、肺轉(zhuǎn)移及 TK1 表達(dá)水平是影響骨肉瘤患者預(yù)后的因素。多因素分析顯示，肺轉(zhuǎn)移 ( P＝0.012 ) 及 TK1 表達(dá)水平 ( P＝0.002 ) 是影響骨肉瘤預(yù)后的相關(guān)獨(dú)立因素。結(jié)論 TK1，Ki67 在骨良、惡性腫瘤中的表達(dá)顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且 TK1 在骨肉瘤中敏感性強(qiáng)于 Ki67；TK1 與骨肉瘤臨床病理學(xué)特征的聯(lián)系較 Ki67 緊密；TK1 的表達(dá)可作為預(yù)測(cè)骨肉瘤預(yù)后的指標(biāo)，而 Ki67 則無(wú)此特性。

骨肉瘤；免疫組織化學(xué)；胸苷激酶；Ki-67；預(yù)后

胸苷激酶 ( thymidine kinase，TK ) 是胸腺嘧啶核苷合成 DNA 的關(guān)鍵酶之一[1]，它以 TK1 及 TK2兩種同工酶的形式出現(xiàn)。TK2 位于細(xì)胞線(xiàn)粒體中，其表達(dá)與細(xì)胞周期無(wú)關(guān)。TK1 是一種細(xì)胞周期相關(guān)酶，定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，它的表達(dá)與 DNA 的合成呈正相關(guān)[2]。TK1 能夠調(diào)控細(xì)胞內(nèi)胸苷含量，并參與 DNA 的修復(fù)過(guò)程[3]。在正常的增殖細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中，TK1 濃度于 S 期 ( DNA 合成期 ) 早期開(kāi)始升高，并持續(xù)增長(zhǎng)至 G2 期 ( DNA 合成后期 )。有研究顯示，TK1 與肺癌、直腸癌、乳腺癌及宮頸癌患者的復(fù)發(fā)、3～5 年生存率及手術(shù)療效相關(guān)[4-5]，因此，TK1 表達(dá)濃度升高往往提示惡性腫瘤細(xì)胞的增殖活性較高，預(yù)示著患者的預(yù)后較差[6-8]，但其在骨肉瘤中的研究卻鮮見(jiàn)報(bào)道。

Ki67 是一種細(xì)胞增殖相關(guān)的核蛋白，其功能與細(xì)胞有絲分裂密切相關(guān)，在除 G0 期外的細(xì)胞周期中表達(dá)。Ki67 被廣泛應(yīng)用于測(cè)定各種腫瘤增殖活性[9]，同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn) Ki67 可能是判斷腫瘤良、惡性，組織學(xué)分級(jí)和預(yù)后的一個(gè)較好指標(biāo)，而與 Ki67表達(dá)相關(guān)的特異性基因有望成為腫瘤診斷和治療的新靶點(diǎn)[10-11]。

本研究通過(guò)選取臨床工作中骨肉瘤患者的送檢標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué) MaxVisionTM法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討 TK1 與 Ki67 之間的表達(dá)差異及其與患者臨床預(yù)后的關(guān)系。

材料與方法

一、納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

( 一 ) 骨肉瘤組

1. 納入標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 選自 2008 年 1 月至 2012 年2 月于我院就診骨肉瘤患者；( 2 ) 經(jīng)臨床、影像、病理三者結(jié)合診斷為原發(fā)性骨肉瘤患者；( 3 ) 經(jīng)病理確診后均行術(shù)前化療－手術(shù)－術(shù)后化療的規(guī)范化綜合治療；( 4 ) 留有化療前腫瘤組織標(biāo)本的患者。

2. 排除標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 合并其它類(lèi)型骨腫瘤者；( 2 ) 合并其它組織器官良、惡性腫瘤者；( 3 ) 就診前已于外院化療或手術(shù)者。

共納入 50 例。男 25 例，女 25 例，男女之比為 1∶1。患者年齡 8～41 歲，平均年齡 ( 23.60± 12.05 ) 歲。腫瘤部位：股骨 20 例，脛腓骨 18 例，肱骨 8 例，其他部位 4 例。按照 Enneking 分期：I 期 6 例，II 期 37 例，III 期 7 例。組織病理學(xué)分型：普通型骨肉瘤 42 例 ( 骨母細(xì)胞性骨肉瘤 25 例，軟骨母細(xì)胞性骨肉瘤 8 例，纖維母細(xì)胞性骨肉瘤 9 例 )，非普通型骨肉瘤 8 例 ( 骨旁骨肉瘤 3 例，髓內(nèi)高分化骨肉瘤 5 例 )。

( 二 ) 骨軟骨瘤組

1. 納入標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 選自 2008 年 1 月至 2012 年2 月診斷為骨軟骨瘤患者；( 2 ) 均為四肢單發(fā)病變；( 3 ) 病變均經(jīng)病理診斷確診為骨軟骨瘤者。

2. 排除標(biāo)準(zhǔn)：( 1 ) 合并其它類(lèi)型骨腫瘤患者；( 2 ) 合并其它組織器官良、惡性腫瘤者。

共納入 20 例。男 9 例，女 11 例，平均年齡( 11.27±4.28 ) 歲。全部患者均采用電話(huà)或定期門(mén)診隨訪(fǎng)，隨訪(fǎng)時(shí)間從病理確診日開(kāi)始至死亡 ( 或最后一次隨訪(fǎng) )，隨訪(fǎng)截止日期為 2015 年 3 月 15 日。

二、實(shí)驗(yàn)主要試劑

TK1 試劑盒購(gòu)自深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司，Ki67 單克隆抗體、快捷型聚合物標(biāo)羊抗鼠 / 兔IgG、DAB 顯色劑、檸檬酸抗原修復(fù)液 ( pH6.0 ) 均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

三、免疫組化方法

標(biāo)本為經(jīng) 10% 甲醛固定石蠟包埋的組織塊，切片厚度為 4 μm，連續(xù)切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)MaxVisionTM法檢測(cè) TK1 與 Ki67 的表達(dá)，操作步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。滴加一抗前均經(jīng)抗原修復(fù)( 95 ℃ 持續(xù) 20 min )，DAB 顯色后蘇木精對(duì)照染色。PBS 代替一抗做陰性對(duì)照。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷

每張切片隨機(jī)選取 10 個(gè)高倍視野，以陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)占同類(lèi)細(xì)胞的百分比作為計(jì)數(shù)點(diǎn)，選取其平均值為該患者的細(xì)胞陽(yáng)性率，并據(jù)此對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判定：( - ) 瘤細(xì)胞染色陰性或＜5% 的瘤細(xì)胞有少量著色，( + ) 5%～25% 瘤細(xì)胞呈陽(yáng)性，( ++ ) 26%～50% 瘤細(xì)胞陽(yáng)性，( +++ )＞50% 瘤細(xì)胞陽(yáng)性且著色程度較強(qiáng)。所有染色標(biāo)本均由 2 位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師在雙盲分析下分別計(jì)數(shù)，相同判定結(jié)果直接納入統(tǒng)計(jì)，有差異的結(jié)果經(jīng)另一病理醫(yī)師雙盲判定后取 3 位判定的平均值納入統(tǒng)計(jì)。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組陽(yáng)性率之間比較采用卡方檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier 法和 Log-rank 非參數(shù)檢驗(yàn)；Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素生存分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、TK1、Ki67 在骨肉瘤與骨軟骨瘤組織中的表達(dá)

TK1 陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒 ( 圖1，2 )。50 例骨肉瘤標(biāo)本中，陽(yáng)性率為 84% ( 42 / 50 )，其中 ( - ) 8 例，( + ) 17 例，( ++ ) 19 例，( +++ ) 6 例，而對(duì)照組 20 例骨軟骨瘤標(biāo)本中，陽(yáng)性率為 10% ( 2 / 20 )，其中 ( - ) 18 例，( + ) 2 例，( ++ ) 0 例，( +++ ) 0 例。Ki67 陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒 ( 圖3，4 )。50 例骨肉瘤組中陽(yáng)性率為 54% ( 27 / 50 )，其中 ( - ) 23 例，( + ) 20 例，( ++ ) 4 例，( +++ ) 3 例。對(duì)照組20 例骨軟骨瘤標(biāo)本中，陽(yáng)性率為 15% ( 3 / 20 )，其中 ( - ) 17 例，( + ) 3 例，( ++ ) 0 例，( +++ ) 0 例。結(jié)果顯示：( 1 ) TK1 與 Ki67 在良、惡性骨腫瘤對(duì)照組間的陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＜0.01，表1 )；( 2 ) 骨肉瘤組中 TK1 與 Ki67 間的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＜0.01，表2 )。

圖1 TK1 在骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá) ( 免疫組化 MaxVisionTM法，DAB，× 400 )圖2 TK1 在骨軟骨瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)( 免疫組化 MaxVisionTM法，DAB，× 400 )圖3 Ki67 在骨肉瘤細(xì)胞核中表達(dá) ( 免疫組化MaxVisionTM法，DAB，× 200 )圖4 Ki67 在骨肉瘤細(xì)胞核中表達(dá) ( 免疫組化MaxVisionTM法，DAB，× 400 )Fig.1 The immunohistochemistry showed expression of TK1 in nucleus and cytoplasm of osteosarcoma ( by immunohistochemical MaxVisionTM, by DAB, × 400 )Fig.2 The immunohistochemistry showed expression of TK1 in nucleus and cytoplasm of osteochondroma ( by immunohistochemical MaxVisionTM, by DAB, × 400 )Fig.3 The immunohistochemicsl staining showed expression of Ki67 in nucleus of osteosarcoma ( by immunohistochemical MaxVisionTM, by DAB, × 200 )Fig.4 The immunohistochemistry showed expression of Ki67 in nucleus of osteosarcoma ( by immunohistochemical MaxVisionTM, by DAB, × 400 )

表1 TK1、Ki67 分別在骨肉瘤與骨軟骨瘤中的表達(dá)比較Tab.1 Comparison of the expressions of TK1 and Ki67 in osteosarcoma and osteochondroma

表2 骨肉瘤組中 TK1 與 Ki67 的表達(dá)比較Tab.2 Comparison of the expressions of TK1 in osteosarcoma

二、TK1、Ki67 表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

TK1 及 Ki67 的表達(dá) 水平與患者性別、年齡、腫瘤大小及組織病理學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)，而與 Enneking 分期及局部復(fù)發(fā)密切相關(guān)，Enneking III 期及局部復(fù)發(fā)的骨肉瘤患者其 TK1 及 Ki67 的表達(dá)水平明顯高于 Enneking I＋I(xiàn)I 期及局部未復(fù)發(fā)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( TK1：P1＝0.03，P2＝0.008，Ki67：P1＝0.038，P2＝0.015 )。

本實(shí)驗(yàn)將術(shù)前化療后切片顯示腫瘤壞死率≥90% 視為化療有效，共計(jì) 30 例，其 TK1 水平明顯低于化療效果欠佳組 ( 腫瘤壞死率＜90% )，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＝0.028 )，而 Ki67 表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＞0.05 )。本實(shí)驗(yàn)共計(jì) 22 例發(fā)生肺部轉(zhuǎn)移，其 TK1 表達(dá)水平高于無(wú)肺部轉(zhuǎn)移組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＝0.026 )，而 Ki67 表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＞0.05，表3 )。

三、TK1、Ki67 的表達(dá)與骨肉瘤患者生存預(yù)后的關(guān)系

50 例骨肉瘤患者，術(shù)后死亡 16 例，總計(jì) 3 年生存率為 68% ( 34 / 50 )。將所有患者按切片染色陽(yáng)性率分為兩組，陽(yáng)性率＞25% 為高表達(dá)組，≤25%為低表達(dá)組。TK1 高表達(dá)與低表達(dá)兩組患者的中位生存時(shí)間分別為 22 ( 95% CI：13～34 ) 個(gè)月和 35 ( 95% CI：25～49 ) 個(gè)月，TK1 低表達(dá)組患者的中位生存時(shí)間顯著延長(zhǎng) 13 個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( χ2＝15.3，P＜0.05 )。Ki67 的表達(dá)強(qiáng)度與患者的中位生存時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＞0.05 )。

表3 骨肉瘤組織中 TK1 及 Ki67 表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系Tab.3 Expression of TK1 and Ki-67 in relation to clinicopathological features in osteosarcoma

運(yùn)用單因素生存分析處理各臨床、病理參數(shù)與患者預(yù)后間的關(guān)系，結(jié)果表明性別、年齡、組織學(xué)分型、腫瘤壞死率、腫瘤大小、Ki67 表達(dá)強(qiáng)度等與骨肉瘤患者預(yù)后無(wú)關(guān)；TK1 表達(dá)強(qiáng)度、Enneking 分期、局部復(fù)發(fā)、肺轉(zhuǎn)移是影響骨肉瘤患者預(yù)后的相關(guān)因素。Cox 回歸多因素分析顯示，TK1 的表達(dá)水平 ( P＝0.002 ) 及肺轉(zhuǎn)移 ( P＝0.012 ) 是影響骨肉瘤患者預(yù)后的獨(dú)立因素 ( 表4 )。

表4 Cox 多因素模型回歸分析影響骨肉瘤患者預(yù)后的因素Tab.4 Cox regression analysis of prognostic factors in osteosarcoma

討 論

TK1 是近年新發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞增殖緊密相關(guān)的關(guān)鍵酶之一，其定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，表達(dá)水平與DNA 的合成呈正相關(guān)。TK1 能夠調(diào)控細(xì)胞內(nèi)胸苷含量，并參與 DNA 的修復(fù)過(guò)程[4]。有研究顯示，TK1和許多惡性腫瘤患者預(yù)后緊密相關(guān)[12-14]。Ki67 蛋白是在增殖細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種核蛋白，它在除 G0 期以外的所有細(xì)胞周期中均有表達(dá)。作為敏感的核蛋白抗 原，Ki67 能反映增殖細(xì)胞活性，被廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤組織的診斷。一些研究顯示 Ki67 的表達(dá)與骨肉瘤的惡性程度及預(yù)后等因素密切相關(guān)[15]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法檢測(cè) 50 例原發(fā)骨肉瘤患者中 TK1 及 Ki67 的表達(dá)率，同時(shí)選取 20 例臨床中常見(jiàn)的良性骨腫瘤——骨軟骨瘤行對(duì)照研究。結(jié)果顯示骨肉瘤組中 TK1 及 Ki67 陽(yáng)性率均遠(yuǎn)高于骨軟骨瘤組 ( TK1 84%＞0%，Ki67 54%＞15% )，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＜0.01 )。這表明 TK1 與 Ki67 在增殖活躍、異型性大、惡性度高的骨肉瘤細(xì)胞中高表達(dá)，而在分化良好的低級(jí)別良性骨軟骨瘤中低表達(dá)，從側(cè)面證實(shí)了 TK1、Ki67 和腫瘤細(xì)胞增殖活躍度相關(guān)，均是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的良好指標(biāo)，兩者可作為鑒別良、惡性腫瘤的輔助指標(biāo)，用于骨肉瘤的臨床檢驗(yàn)工作中。筆者繼續(xù)對(duì)比 TK1 與 Ki67在骨肉瘤中的表達(dá)狀況，發(fā)現(xiàn) TK1 在骨肉瘤中的表達(dá)明顯高于 Ki67 ( 84%＞54% )，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＜0.01 )，這提示在骨肉瘤組織中，TK1 的敏感性高于 Ki67，是更優(yōu)的檢驗(yàn)指標(biāo)。

TK1 與 Ki67 的表達(dá)強(qiáng)度與患者性別、年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型等因素?zé)o相關(guān)性，而與Enneking 分期及局部復(fù)發(fā)狀況相關(guān)，說(shuō)明 TK1 和Ki67 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定的聯(lián)系。肺部是骨肉瘤常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位，發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的患者其預(yù)后往往較差，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 TK1 陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度與患者發(fā)生肺轉(zhuǎn)移緊密相關(guān)，而 Ki67 則無(wú)此特性，這表明在評(píng)估患者預(yù)后方面，TK1 具有一定優(yōu)勢(shì)。

隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，化療已成為骨肉瘤治療的主要手段之一，其在骨肉瘤的綜合治療中有著舉足輕重的地位[16]?；熋舾械墓侨饬龌颊咂漕A(yù)后明顯優(yōu)于不敏感者[17-18]。化療藥物對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的重要作用機(jī)制之一是誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡反應(yīng)，因此觀察骨肉瘤組織化療后的細(xì)胞壞死率是預(yù)測(cè)骨肉瘤患者化療敏感性的最直接、也是最可靠的指標(biāo)。腫瘤壞死率高的患者，其化療有效率往往較高，預(yù)后較好[19]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，50 例骨肉瘤患者中，20 例腫瘤壞死率＜90%，其 TK1 陽(yáng)性率為 90% ( 18 / 20 )，腫瘤壞死率≥90% 的患者中 TK1 陽(yáng)性率為 80% ( 24 / 30 )，兩者不同表達(dá)強(qiáng)度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P＝0.028 )，而 Ki67 則無(wú)此特性。這表明TK1 表達(dá)水平升高會(huì)降低化療后骨肉瘤細(xì)胞的壞死率，提示 TK1 的檢測(cè)或許可以作為預(yù)測(cè)骨肉瘤化療敏感性的指標(biāo)。目前尚無(wú)研究指出 TK1 影響骨肉瘤患者化療敏感性的機(jī)制，筆者推測(cè)可能與 TK1 參與腫瘤細(xì)胞 DNA 的修復(fù)或誘導(dǎo)產(chǎn)生化療耐受有關(guān)，具體機(jī)制有待今后進(jìn)一步深入研究。

本實(shí)驗(yàn)將骨肉瘤切片染色陽(yáng)性率＞25% 認(rèn)為是高表達(dá)，結(jié)果顯示 TK1 高表達(dá)組患者中位生存時(shí)間顯著短于低表達(dá)者，而 Ki67 則無(wú)此特性，提示 TK1高表達(dá)的患者預(yù)后較差，TK1 是較 Ki67 更優(yōu)的判斷患者預(yù)后狀況的指標(biāo)。這可能是因?yàn)樵鲋郴钴S的腫瘤組織，其處于 S 期及 G2 期的細(xì)胞比例往往較高，而 TK1 恰好在 S 期早期濃度開(kāi)始升高，至 G2 期濃度達(dá)到高峰[3]，因而其高表達(dá)提示腫瘤組織增殖活躍，患者預(yù)后往往較差。

本研究還分析了患者 3 年生存率與各臨床、病理因素的關(guān)系。根據(jù)單因素及多因素分析發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤患者 TK1 的表達(dá)水平 ( P＝0.002 ) 及是否合并肺轉(zhuǎn)移 ( P＝0.012 ) 是影響其預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，此結(jié)果表明 TK1 的表達(dá)水平與患者的預(yù)后緊密相關(guān)，其具體作用機(jī)制尚待進(jìn)一步深入研究。

本實(shí)驗(yàn)提示 TK1 及 Ki67 蛋白的表達(dá)均與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，但 TK1 與骨肉瘤患者臨床病理學(xué)特征的聯(lián)系較 Ki67 更緊密，對(duì)預(yù)后的判斷更有價(jià)值，是判斷骨肉瘤生物學(xué)行為及預(yù)后的一個(gè)更優(yōu)指標(biāo)，而且可能是骨肉瘤診斷和治療的潛在靶點(diǎn)。然而，TK1 在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的確切作用機(jī)制尚未揭示，有待于進(jìn)一步的深入研究。

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( 本文編輯：裴艷宏 )

Expression and clinical significance of thymidine kinase 1 and Ki67 in osteosarcoma

FU Yu-cheng, ZHENG Chuan-xi, ZHANG Shi-quan, GUAN Hong, LI Wei, TAN Ji-feng. Department of Surgical Intensive Care Unit ( SICU ), the f rst Aff liated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang, 310003, China

ZHANG Shi-quan, Email: gukezsq@163.com

ObjectiveTo test the level of thymidine kinase 1 ( TK1 ) and Ki67 in the osteosarcomas, to compare the difference in the clinical features and prognosis.MethodsThe expressions of TK1 and Ki67 in 50 cases of osteosarcoma and 20 cases of osteochondroma tissues were studied by immunohistochemical staining.ResultsThe positive rate of TK1 and Ki67 in osteosarcoma group was 84% ( 42 / 50 ) and 54% ( 27 / 50 ), in osteochondroma group was 10% ( 2 / 20 ) and 15% ( 3 / 20 ), respectively. There was a signif cant difference in the expression of TK1 and Ki67 between the 2 groups. In osteosarcoma group, the positive rate of TK1 was signif cantly higher than Ki67. Both markers had a signif cant correlation in Enneking stage and the local recurrence. But there were no signif cant differences in gender, age, tumor size, and pathological type . Besides, the expression of TK1 was signif cantly different in tumor cell necrosis rate and lung metastasis. The median survival time of TK1 high expression patients ( positive rate ＞ 25% ) was significantly shorter than low expression patients. Univariate analysis showed that local recurrence, Enneking stage, lung metastasis and TK1 expression were the factors inf uencing the prognosis of osteosarcoma patients. Multivariate analysis showed that the expression level of lung metastasis ( P = 0.012 ) and TK1 ( P = 0.002 ) were independent factors inf uencing the prognosis of osteosarcoma.ConclusionsThe expression of Ki67 and TK1 shows signif cant differences in benign and malignant tumors. TK1 is more sensitive than Ki67 in osteosarcoma. TK1 is more related to the clinical and pathology features in osteosarcoma. The expression of TK1 could be a predictor of the prognosis of osteosarcoma.

Osteosarcoma; Immunohistochemical; Thymidine kinase; Ki67; Prognosis

10.3969/j.issn.2095-252X.2017.02.011

R738.1

深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目 ( JCYJ20130323111349 )

310003 杭州，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 SICU ( 傅宇成 )；518035 深圳市第二人民醫(yī)院骨關(guān)節(jié)骨腫瘤科( 鄭傳禧、張世權(quán)、李偉、譚紀(jì)鋒 )，病理科 ( 關(guān)弘 )

張世權(quán)，Email: gukezsq@163.com

2016-07-04 )