朱婷婷，翁翠葉，賈宵宵，曾澤宇，王磊，李昌崇，張維溪

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院兒童呼吸內(nèi)科，浙江溫州 325027）

·論 著·

Wnt7b/β-catenin信號(hào)通路在大鼠哮喘氣道重塑中的作用

朱婷婷，翁翠葉，賈宵宵，曾澤宇，王磊，李昌崇，張維溪

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院兒童呼吸內(nèi)科，浙江溫州 325027）

目的：探討Wnt7b/β-catenin信號(hào)通路在哮喘氣道重塑中的作用。方法：選取無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)健康雄性SD大鼠16只，隨機(jī)分成哮喘組和對(duì)照組。哮喘組大鼠用雞卵清白蛋白（OVA）作為致敏物建立哮喘氣道重塑模型，對(duì)照組大鼠采用0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行處理。肺組織標(biāo)本予HE染色，觀察大鼠肺組織的病理結(jié)構(gòu)，圖像分析技術(shù)測(cè)定大鼠支氣管管壁厚度（Wat）和支氣管平滑肌厚度（Wam），免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織中Wnt7b、β-catenin和c-Myc蛋白的分布和表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法（qRT-PCR）測(cè)定Wnt7b、β-catenin、c-Myc mRNA的表達(dá)。結(jié)果：哮喘組大鼠Wat和Wam均高于對(duì)照組。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)顯示，哮喘組大鼠肺組織Wnt7b、β-catenin和c-Myc蛋白的表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。qRT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示，哮喘組大鼠肺組織Wnt7b、β-catenin、c-Myc mRNA的表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。肺組織中Wat、Wam與Wnt7b、β-catenin、c-Myc的蛋白表達(dá)量成正相關(guān)。結(jié)論：Wnt7b、β-catenin和c-Myc參與哮喘氣道重塑的形成。

哮喘；氣道重塑；Wnt信號(hào)通路；β-catenin；大鼠

支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘），是以慢性氣道炎癥為特征的異質(zhì)性疾病[1]。氣道重塑是哮喘最主要的病理學(xué)變化之一，表現(xiàn)為氣道平滑肌的肥大增生、氣道上皮破壞、氣道壁增厚、管腔縮窄、細(xì)胞外基質(zhì)改變、黏膜下新血管形成、黏液腺體肥厚增生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等[2]。研究顯示，細(xì)胞內(nèi)存在著復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，通過(guò)調(diào)節(jié)各種細(xì)胞的代謝、生長(zhǎng)、增殖、凋亡等生命活動(dòng)，調(diào)控炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子以及黏附因子等對(duì)機(jī)體的作用，參與哮喘氣道重塑[3]。Wnt信號(hào)通路是一條在進(jìn)化上呈高度保守的信號(hào)途徑，廣泛參與體內(nèi)多種組織細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生命過(guò)程。本研究通過(guò)建立哮喘大鼠氣道重塑模型，檢測(cè)Wnt7b、β-catenin及其下游產(chǎn)物c-Myc的表達(dá)，探討wnt7b/β-catenin信號(hào)通路在哮喘氣道重塑中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠16只，年齡為8周，體質(zhì)量180～200g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（滬）2012-0002，飼養(yǎng)于溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 主要試劑：卵清白蛋白（OVA，GrageV）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；兔抗大鼠Wnt7b多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)SantaCruz公司；兔抗大鼠β-catenin單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)CellSingnalTechnology公司；兔抗大鼠c-Myc單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)CellSingnalTechnology公司；Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；Lightcycle480SYBRGreenIMaster購(gòu)自美國(guó)Roch公司；反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Fermentas公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.1.3 主要儀器設(shè)備：空氣壓縮霧化器（德國(guó)百瑞公司）；顯微鏡（日本Olympus公司）；LightCycler480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)Roch公司）；酶標(biāo)儀（ELX808IU，美國(guó)Bio-Tek公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與模型建立：將16只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成哮喘組和對(duì)照組，每組各8只。參照課題組既往成功建立模型的方法[4]復(fù)制哮喘氣道重塑模型。模型的建立過(guò)程分為致敏和激發(fā)2個(gè)階段，共10周。致敏階段共2周，分別在每周第1天給哮喘組大鼠腹腔注射OVA、Al（OH）3和0.9%氯化鈉溶液混合液1.5mL（內(nèi)含OVA1mg，Al（OH）3100mg），相應(yīng)給予對(duì)照組大鼠腹腔注射0.9%氯化鈉溶液1.5mL。從第3周第1天開(kāi)始，隔天使用超聲霧化器向處于密閉塑料箱內(nèi)的哮喘組大鼠用含1%OVA的0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行霧化，每次30min，共持續(xù)8周，對(duì)照組大鼠相應(yīng)予0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行霧化。在末次激發(fā)后16～24h內(nèi)用10%水合氯醛（4mL/kg）腹腔注射處死大鼠，剪開(kāi)胸腔，迅速分離肺組織，將左肺組織分裝存于凍存管后置入液氮，轉(zhuǎn)移至-80℃低溫冰箱備用。

1.2.2 肺組織標(biāo)本病理學(xué)觀察：剪取右肺肺門(mén)中上、中下段肺葉，浸入4%多聚甲醛予以固定。將固定后的肺組織常規(guī)石蠟包埋，4μm切片，HE染色觀察肺組織病理結(jié)構(gòu)。

1.2.3 支氣管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）的檢測(cè)：根據(jù)文獻(xiàn)對(duì)各層氣道的定義[5]，每只大鼠均選取3支直徑為1～1.5mm的支氣管，使用ImageproPlus醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測(cè)定2組大鼠肺組織內(nèi)支氣管總面積（At）、支氣管管腔面積（Ac）、支氣管基底膜周徑（Pbm）、平滑肌內(nèi)緣內(nèi)氣管面積（AMi）和平滑肌外緣內(nèi)氣管面積（AMe），并用Pbm標(biāo)準(zhǔn)化處理。即Wat=（At-Ac）/Pbm，Wam=（AMe-AMi）/Pbm。

1.2.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織Wnt7b、βcatenin及c-Myc蛋白的表達(dá)：Wnt7b多克隆抗體、β-catenin單克隆抗體及c-Myc單克隆抗體的稀釋度均為1:50，經(jīng)抗體孵育，辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液處理，DAB顯色，蘇木素復(fù)染等處理，將PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，最終陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色。在高倍鏡下，應(yīng)用Image-proPlus圖像分析軟件隨機(jī)測(cè)定所選區(qū)域陽(yáng)性部位的平均吸光度（meanopticaldensity，MOD）值，計(jì)算10個(gè)MOD值的平均值作為該片的MOD值。

1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）法檢測(cè)Wnt7b、β-catenin及c-MycmRNA的表達(dá)：按照試劑盒說(shuō)明，以Trizol法提取大鼠肺組織總RNA，并測(cè)定RNA濃度及純度（A260/A280＞1.8）。根據(jù)濃度取2μg總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。取cDNA產(chǎn)物2μL，分別加入2×SYBRGreenPCRMasterMix10μL，10mmol/L上下游引物各0.5μL，去離子水7μL，以20μL反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增。每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性90s，95℃退火5s，58℃延伸30s，共40個(gè)循環(huán)，獲得各樣本待測(cè)基因的Ct值。采用2-ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理[6]，計(jì)算實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的基因表達(dá)倍數(shù)變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以±s表示；均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；方差齊性檢驗(yàn)采用Levene檢驗(yàn)；兩變量之間的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物一般情況觀察相較對(duì)照組大鼠，哮喘組大鼠霧化激發(fā)后明顯更為煩躁不安、易被激惹，出現(xiàn)抓耳撓腮、呼吸加深加快、腹肌痙攣、口唇發(fā)紺等癥狀，霧化結(jié)束后大鼠多呈俯伏不動(dòng)的姿態(tài)，密封霧化箱內(nèi)的大小便排泄物明顯較對(duì)照組大鼠增多。對(duì)照組大鼠在用0.9%氯化鈉溶液霧化的過(guò)程中仍活動(dòng)自如，無(wú)明顯異常表現(xiàn)。經(jīng)過(guò)多次激發(fā)之后，哮喘組大鼠體質(zhì)量相較對(duì)照組增長(zhǎng)緩慢，毛色蒼黃、無(wú)光澤。

2.2 肺組織病理學(xué)改變對(duì)照組大鼠肺組織HE染色顯示正常小氣道和肺泡結(jié)構(gòu)，肺組織結(jié)構(gòu)完整，黏膜上皮完整，支氣管管腔規(guī)則，支氣管、血管周?chē)匆?jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)圖1A）。哮喘組大鼠肺組織HE染色顯示氣道壁明顯增厚，基底膜不規(guī)則增厚，黏膜褶皺增多，出現(xiàn)上皮杯狀細(xì)胞增生和上皮細(xì)胞脫落，可見(jiàn)黏液腺增生、黏液栓形成和黏膜下水腫，管腔內(nèi)可見(jiàn)滲出物和炎性細(xì)胞增多，支氣管黏膜下、支氣管和血管周?chē)梢?jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的廣泛浸潤(rùn)（見(jiàn)圖1B）。

圖1 大鼠肺組織HE染色結(jié)果(×400)

圖2 大鼠肺組織Wnt7b表達(dá)情況(×400)

2.3 哮喘組和對(duì)照組Wat和Wam的變化與對(duì)照組相比，哮喘組Wat和wam顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 2組大鼠Wat及Wam比較（n=8，±s，μm2/μm）

表1 2組大鼠Wat及Wam比較（n=8，±s，μm2/μm）

組別WatWam對(duì)照組27.00±4.8812.60±1.14哮喘組62.28±5.1029.47±4.94 t 21.2014.13 P＜0.01＜0.01

2.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織Wnt7b、β-catenin及c-Myc的表達(dá)情況結(jié)果顯示，哮喘組大鼠肺組織中Wnt7b、β-catenin及c-Myc的蛋白表達(dá)均較對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表2，圖2-4。

表2 2組大鼠肺組織Wnt7b、β-catenin和c-Myc蛋白表達(dá)比較（n=8，±s）

表2 2組大鼠肺組織Wnt7b、β-catenin和c-Myc蛋白表達(dá)比較（n=8，±s）

組別Wnt7bβ-cateninc-Myc對(duì)照組0.07±0.020.19±0.030.20±0.04哮喘組0.17±0.050.33±0.070.41±0.13 t 5.725.094.37 P＜0.01＜0.01＜0.01

圖3 大鼠肺組織β-catenin表達(dá)情況（×400）

圖4 大鼠肺組織c-Myc表達(dá)情況（×400）

2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肺組織Wnt7b、βcatenin及c-Myc mRNA表達(dá)情況結(jié)果顯示，哮喘組大鼠肺組織中Wnt7b、β-catenin、c-MycmRNA的表達(dá)均較對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表3。

2.6 Wnt7b、β-catenin、c-Myc表達(dá)與Wat、Wam的相關(guān)性分析Wat、Wam均與Wnt7b蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（分別為r=0.811、0.847，均P＜0.01），Wat、Wam均與大鼠肺組織β-catenin蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（分別為r=0.821、0.854，均P＜0.01），Wat、Wam均與大鼠肺組織c-Myc蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（分別為r=0.787、0.853，均P＜0.01）。大鼠肺組織中Wnt7b蛋白、β-catenin蛋白的表達(dá)與c-Myc蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.856、0.808，均P＜0.01）。

表3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果（n=8，±s）

表3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果（n=8，±s）

Wnt7bmRNAβ-cateninmRNAc-MycmRNA△Ct2-△△Ct△Ct2-△△Ct△Ct2-△△Ct對(duì)照組13.28±0.441.00（0.74-1.36）11.67±0.331.00（0.80-1.26）8.10±0.151.00（0.90-1.10）哮喘組9.96±0.5010.03（7.11-14.18）10.70±0.091.95（1.84-2.06）6.81±0.252.44（2.05-2.91）t-14.249-7.602-12.470 P＜0.01＜0.01＜0.01組別

3 討論

Wnt信號(hào)通路普遍存在于從低等無(wú)脊椎動(dòng)物至高等哺乳動(dòng)物體內(nèi)，是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路之一，廣泛參與組織細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等多種生命過(guò)程。自1982年Wnt基因被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，Wnt信號(hào)通路已得到廣泛的研究。目前認(rèn)為，Wnt信號(hào)通路主要通過(guò)Wnt蛋白、蛋白受體、胞內(nèi)蛋白、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子等途徑傳遞信號(hào)，激活下游靶基因的表達(dá)，參與調(diào)控過(guò)程。至今已發(fā)現(xiàn)19種Wnt信號(hào)蛋白家族成員，包括Wnt1、Wnt3、Wnt5a、Wnt7b、Wnt8等。Wnt信號(hào)通路包括經(jīng)典型Wnt/β-catenin信號(hào)通路和非經(jīng)典型信號(hào)通路。其中，Wnt7b是經(jīng)典型信號(hào)途徑的重要組成成員，通過(guò)與卷曲蛋白（frizzled，F(xiàn)rz）跨膜受體結(jié)合進(jìn)行信號(hào)傳遞[7]。Wnt7b主要在肺上皮細(xì)胞中表達(dá)，在肺的發(fā)育和維持血管平滑肌的完整中起了重要作用[8]。研究[9-10]顯示，Wnt7b能通過(guò)調(diào)節(jié)肺間葉細(xì)胞的分化過(guò)程調(diào)控肺部平滑肌細(xì)胞的發(fā)育，其表達(dá)失衡與多種肺部疾病，如支氣管肺發(fā)育不良、肺動(dòng)脈高壓、肺纖維化等密切相關(guān)，而與哮喘及氣道重塑的關(guān)系尚不明確。

β-catenin的作用主要是與鈣黏附蛋白相結(jié)合固定在細(xì)胞骨架上，作為膜結(jié)合蛋白介導(dǎo)細(xì)胞之間的黏附[11]，而胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)的β-catenin則是Wnt信號(hào)通路中最關(guān)鍵的激活因子。當(dāng)信號(hào)通路被激活時(shí)，胞質(zhì)內(nèi)β-catenin的含量不斷提高，開(kāi)始轉(zhuǎn)移入核，與T細(xì)胞因子（Tcellfactor，TCF）/淋巴樣增強(qiáng)因子（lymphoidenhancerfactor，LEF）相結(jié)合，參與調(diào)控下游基因的表達(dá)[12]。近來(lái)研究表明，β-catenin在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖以及穩(wěn)態(tài)的維持中具有重要作用。ZHU等[13]發(fā)現(xiàn)，β-catenin參與氣道上皮細(xì)胞的損傷和修復(fù)過(guò)程。GIANGRECO等[14]研究顯示，β-catenin的激活能促進(jìn)肺上皮基底細(xì)胞的增殖。此外有研究[15-17]指出，β-catenin參與氣道平滑肌細(xì)胞（airwaysmoathmusclecells，ASMC）的有絲分裂過(guò)程，其在胞內(nèi)聚集和核內(nèi)轉(zhuǎn)移對(duì)維持ASMC的生長(zhǎng)具有重要作用，并參與調(diào)控ASMC分泌細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)程。另有研究[18]發(fā)現(xiàn)，β-catenin能調(diào)控氣道平滑肌的張力變化，調(diào)控氣道平滑肌的收縮功能。考慮到上述細(xì)胞以及生理現(xiàn)象在氣道重塑中扮演重要角色，β-catenin的激活可能是產(chǎn)生氣道重塑的一個(gè)關(guān)鍵機(jī)制。

Wnt信號(hào)通路靶基因豐富多樣，1998年，HE等[19]研究發(fā)現(xiàn)，β-catenin與TCF4結(jié)合形成的復(fù)合體能與c-Myc基因啟動(dòng)子上的TCF位點(diǎn)相互作用從而激活其表達(dá)，首次證實(shí)c-Myc為Wnt信號(hào)通路的靶基因之一。原癌基因廣泛參與信號(hào)通路的各個(gè)環(huán)節(jié)，其表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的表達(dá)和釋放，廣泛參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程。有研究[20]顯示，原癌基因的表達(dá)與氣道炎癥和氣道重塑密切相關(guān)。

目前，國(guó)外學(xué)者主要通過(guò)培養(yǎng)ASMC來(lái)研究Wnt信號(hào)通路在哮喘氣道重塑中的作用，而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究相對(duì)較少。本研究用過(guò)OVA致敏建立大鼠哮喘氣道重塑模型，通過(guò)免疫組織化學(xué)法和Westernblot法檢測(cè)Wnt7b、β-catenin、c-Myc在肺組織和肺組織勻漿中的表達(dá)，結(jié)果顯示：哮喘組中Wnt7b、βcatenin、c-Myc的蛋白表達(dá)水平均較正常組顯著升高，提示哮喘氣道重塑大鼠存在Wnt7b/β-catenin信號(hào)通路的激活。此外，Wat、Wam均與Wnt7b、β-cantenin、c-Myc的表達(dá)均呈顯著正相關(guān)，提示W(wǎng)nt7b/β-cantenin信號(hào)通路參與氣道重塑的形成。c-Myc的表達(dá)與Wnt7b、β-catenin均呈正相關(guān)，提示W(wǎng)nt7b/β-catenin信號(hào)通路的激活可能增加c-Myc的表達(dá)，參與氣道重塑。

Wnt信號(hào)通路在哮喘發(fā)生的作用研究尚處于起步階段，下一步，我們將進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)一步通過(guò)抑制實(shí)驗(yàn)探究Wnt信號(hào)通路與氣道重塑形成的關(guān)系。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組, 中華兒科雜志編輯委員會(huì). 兒童支氣管哮喘診斷與預(yù)防指南(2016年版)[J]. 中華兒科雜志, 2016, 54(3): 167-181.

[2] HOMER R J, ELIAS J A. Consequences of long-term infammation∶ Airway remodeling[J]. Clin Chest Med, 2000, 21(2)∶ 331-343.

[3] ZHANG W X, LI C C. Airway remodeling∶ a potential therapeutic target in asthma[J]. World J Pediatr, 2011, 7(2)∶ 124-128.

[4] ZHANG W X, LIANG Y F, WANG X M, et al. Urotensin upregulates transforming growth factor-β1 expression of asthma airway through ERK-dependent pathway[J]. Mol Cell Biochem, 2012, 364(1-2)∶ 291-298.

[5] BAI A, EIDELMAN D H, HOGG J C, et al. Proposed nomenclature for quantifying subdivision s of the bronchial wall[J]. J Appl Physio, 1994, 77(2)∶ 1011-1014.

[6] LIVAK K J, SCHMITTGEN T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-△△CTmethod[J]. Methods, 2001, 25(4)∶ 402-408.

[7] ZHENG Y, ZHANG K, ZHU P. Reviews and prospectives of signaling pathway analysis in idiopathic pulmonary fbrosis[J]. Autommun Rev, 2014, 13(10)∶ 1020-1025.

[8] SHU W, JIANG Y Q, LU M M, et al. Wnt7b regulates mesenchymal proliferation and vascular development in the lung [J]. Development, 2002, 129(20)∶ 4831-4842.

[9] COHEN E D, IHIDA-STANSBURY K, LU M M, et al. Wnt signaling regulates smooth muscle precursor development in the mouse lung via a tenascin C/PDGFR pathway[J]. J Clin Invest, 2009, 119(9)∶ 2538-2549.

[10] RAJAGOPAL J, CARROLL T J, GUSEH J S, et al. Wnt7b stimulates embryonic lung growth by coordinately increasing the replication of epithelium and mesenchyme[J]. Development, 2008, 135(9)∶ 1625-1634.

[11] VALENTA T, HAUSMANN G, BASLER K. The many faces and functions of beta-catenin[J]. EMBO J, 2012, 31(12)∶2714-2736.

[12] BAARSMA H A, KONIGSHOFF M, GOSENS R. The WNT signaling pathway from ligand secretion to gene transcripton∶ molecular mechanis ms and pharmacological targets[J]. Pharmacol Ther, 2013, 138(1)∶ 66-83.

[13] ZHU M, TIAN D, LI J, et al. Glycogen synthase kinase 3beta and beta-catenin are involved in the injury and repair of bronchial epithelial cellsinduced by scratching[J]. Exp Mol Pathol, 2007, 83(1)∶ 30-38.

[14] GIANGRECO A, LU L, VICKERS C, et al. β-Catenin determines upper airway progenitor cell fate and preinvasive squamous lung cancer progression bymodulating epithelialmesenchymal transition[J]. J Pathol, 2012, 226(4)∶ 575-587.

[15] GOSENS R, BAARSMA H A, HEIJINK I H, et al. De novo synthesis of β-catenin via H-Ras and MEK regulates airway smooth muscle growth[J]. FASEB J, 2010, 24(3)∶ 757-768.

[16] NUNES R O, SCHMIDT M, DUECK G, et al. GSK-3/βcatenin signaling axis in airway smooth muscle∶ role in mitogenic signaling[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2008, 294(6)∶ L1110-L1118.

[17] BAARSMA H A, MENZEN M H, HALAYKO A J, et al. β-Catenin signaling is required for TGF-β1-induced extracellular matrix production by airway smooth muscle cells[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2011, 301(6)∶ L956-L965.

[18] JANSEN S R, VAN ZIEL A M, BAARSMA H A, et al. {beta}-Catenin regulates airway smooth muscle contraction[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2010, 299(2)∶ L204-L214.

[19] HE T C, SPARKS A B, RAGO C, et al. Identifcation of c-MYC as target of the APC pathway[J]. Science, 1998, 281 (5382)∶ 1509-1512.

[20] 劉穎格, 戚好文, 李煥章. 原癌基因表達(dá)在哮喘氣道重塑中的作用[J]. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2001, 22(5): 418-421.

（本文編輯：丁敏嬌）

The role of Wnt7b/β-catenin signal pathway in the course of airway remodeling of asthma rats

ZHU Tingting, WENG Cuiye, JIA Xiaoxiao, ZENG Zeyu, WANG Lei, LI Changchong, ZHANG Weixi. Department of Pediatric Pulmonology, the Second Affiliated Hospital & Yuying Children’s Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325027

Objective:To explore the role of Wnt7b/β-catenin signaling pathway in airway remodeling in asthma.Methods:This study enrolled 16 8-week-old healthy male Sprague-Dawley (SD) rats (SPF grade), weighting from 180-200 g, without specifc pathogens, and assigned them into asthma group and normal control group. Asthmatic airway remodeling models were established in rats with ovalbumin while the normal control group was given spray of physiological saline. HE staining was used to observe pulmonary pathological structure of two groups of rats, and color medical image analysis was used to determine the thickness of bronchial wall (Wat) and the thickness of smooth muscles (Wam). Immunohistochemical method was used to detect the distribution and protein expression of Wnt7b, β-catenin and c-Myc in the lung tissues, qRT-PCR was used to determine the mRNA expressions of Wnt7b, β-catenin and c-Myc.Results:Wat and Wam of asthma group were signifcant higher than those in normal group. The protein expression of Wnt7b, β-catenin, c-Myc detected by IHC in asthma group were signifcant higher than those in normal group (P＜0.01, respectively). The mRNA expression of Wnt7b, β-catenin, c-Myc detected by qRT-PCR in asthma group were signifcant higher than those in normal group (P＜0.01, respectively). There were signifcantly positive correlation between Wat and the protein expression of Wnt7b, β-catenin and c-Myc, also between Wam and the protein expression of Wnt7b, β-catenin and c-Myc.Conclusion:Wnt7b, β-catenin and c-Myc play important roles in airway remodeling in asthma.

asthma; airway remodeling; Wnt signal pathway; β-catenin; rats

R562.2

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2017.01.003

2016-03-31

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（LY15H010006）；溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（Y20130234）；浙江省科技廳科研基金資助項(xiàng)目（2016C33182）；浙江省衛(wèi)生高層次創(chuàng)新人才項(xiàng)目。

朱婷婷（1990-），女，浙江樂(lè)清人，住院醫(yī)師，碩士。

張維溪，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，Email：zhangweixi112@163.com。