梁 多，劉智鈞，肖婉娜

（廣東科貿(mào)職業(yè)學(xué)院，廣東廣州 510430）

HPLC法同時(shí)測定青梅精中梅素和5-羥甲基糠醛

梁 多，劉智鈞，肖婉娜

（廣東科貿(mào)職業(yè)學(xué)院，廣東廣州 510430）

利用優(yōu)化的HPLC法，同時(shí)測定青梅精中梅素和5-羥甲基糠醛的梯度洗脫方法。該方法對(duì)梅素和5-羥甲基糠醛的檢出限LOD（S/N=3）分別是2.0，1.0 mg/kg，定量限LOQ（S/N=10）分別是6.5，3.5 mg/kg，線性范圍分別是2.0～500，1.0～500 μg/mL，相關(guān)系數(shù)（R2）分別是0.996，0.999。采用該方法對(duì)市售青梅精產(chǎn)品中的梅素和5-羥甲基糠醛進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品品質(zhì)參差不齊。通過研究以烏梅和梅胚為原料熬制青梅精過程中梅素和5-羥甲基糠醛的含量變化規(guī)律，得出該檢測方法的建立對(duì)青梅精產(chǎn)品的開發(fā)和研究具有重要的指導(dǎo)作用。

HPLC；青梅精；梅素；5-羥甲基糠醛

0 引言

青梅又稱酸梅、果梅，為薔薇科杏屬喬木果實(shí)，原產(chǎn)于我國。相關(guān)研究表明，在馬王堆漢墓中發(fā)現(xiàn)青梅，證明其栽培歷史在3 000年以上[1]。青梅是我國傳統(tǒng)的藥食兼用果品，因其酸澀味強(qiáng)而鮮食量少，多用于加工[2]。目前，市售青梅產(chǎn)品有話梅等果脯、蜜餞[3]。青梅精是日本一種傳統(tǒng)的青梅加工產(chǎn)品，是將青梅打漿榨汁后連續(xù)熬煮48 h，濃縮到73～78 Brix，顏色變成黑色，即得青梅精。青梅精號(hào)稱“堿性”食品之王，具有調(diào)節(jié)酸性體質(zhì)、殺菌、預(yù)防流感的作用[4]。

梅素（Mumefrual），又稱為梅華，在青梅精加工過程中產(chǎn)生，是青梅精中主要功能成分之一，具有改善血液循環(huán)的功效[5-6]。目前，國內(nèi)還沒有對(duì)梅素的研究報(bào)道。

梅素（梅華）分子式見圖1。

圖1 梅素（梅華）分子式

5-羥甲基糠醛（5-HMF）由葡萄糖或果糖經(jīng)脫水反應(yīng)生成，是轉(zhuǎn)化糖的副產(chǎn)物，少量存在時(shí)有增色功能，量大時(shí)對(duì)身體有危害。在青梅精的熬煮過程中有5-HMF產(chǎn)生。

試驗(yàn)優(yōu)化了一種利用高效液相色譜（HPLC）同時(shí)檢測青梅精中梅素和5-HMF的方法，為青梅精產(chǎn)品的開發(fā)和研究提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈，色譜純；梅素標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥95%；5-羥甲基糠醛標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99%；甲酸，分析純。

1.2 主要設(shè)備

LC-15AT型高效液相色譜儀、二元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測器及色譜工作站，日本島津公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

準(zhǔn)確稱取5.0 mg梅素標(biāo)準(zhǔn)品置于5 mL容量瓶中，用純凈水定容至刻度。準(zhǔn)確稱取5-HMF標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg放入5 mL容量瓶中，用純凈水定容至刻度；使用時(shí)，稀釋成不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，過0.45 μm濾膜，待檢測用。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：C18型（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相A：5%乙腈+0.2%甲酸，流動(dòng)相B：90%乙腈+ 0.2%甲酸；柱溫：25℃；流速：1 mL/min；紫外檢測器波長：λ=280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3.3 流動(dòng)相梯度選擇

以B泵體積分?jǐn)?shù)0為初始梯度，設(shè)置3個(gè)不同中間梯度的梯度洗脫程序，分別對(duì)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣。梯度洗脫：0～10 min，B泵0；10～25 min，B泵70%（梯度1），B泵80%（梯度2），B泵90%（梯度3）；25～30 min，B泵0。

2 結(jié)果與分析

2.1 梯度洗脫

按照1.3.3設(shè)置的3個(gè)不同中間梯度洗脫樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。

3個(gè)梯度條件下分別洗脫樣品的HPLC色譜見圖2。

圖2 3個(gè)梯度條件下分別洗脫樣品的HPLC色譜

梯度1、梯度2和梯度3條件下，隨著中間梯度有機(jī)相比例的逐步提高，標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間逐漸縮短，樣品中5-HMF和梅素的保留時(shí)間也在逐漸縮短。對(duì)3個(gè)梯度條件下的樣品色譜圖進(jìn)行比較，梯度1峰寬較大，梯度2和梯度3峰形優(yōu)于梯度1，且出峰時(shí)間早，有利于縮短檢測時(shí)間。在梯度2條件下，樣品與標(biāo)準(zhǔn)品梅素附近組分出峰時(shí)間，峰前起始于基線，峰后回歸基線，與其他物質(zhì)的分離度達(dá)到要求。采用HPLC法，若色譜峰沒有回歸基線即有下一種物質(zhì)被洗脫出來，說明被檢測組分與其他組分的分離度不夠，會(huì)影響到樣品中被檢測組分的定量。與梯度3條件相比，在梯度2條件下，有機(jī)溶劑的使用量減少，有利于檢測成本的降低。因此，選擇中間梯度B泵80%為最終梯度洗脫程序。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢出限

將500 μg/mL的梅素和5-HMF標(biāo)準(zhǔn)品母液逐級(jí)稀釋，配制成質(zhì)量濃度分別為0.25，0.50，1.00，5.00，10.00，100.00，250.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。以峰面積-質(zhì)量濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)；以3倍信噪比（S/N）所對(duì)應(yīng)樣品中該物質(zhì)的質(zhì)量濃度確定為方法檢出限（LOD），以10倍信噪比（S/N）所對(duì)應(yīng)樣品中該物質(zhì)的質(zhì)量濃度確定為方法定量限（LOQ）。

5-HMF和梅素線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限、定量限見表1。

表1 5-HMF和梅素線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限、定量限

2.3 精密度和準(zhǔn)確度

重復(fù)測定已知質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液10次，將其進(jìn)行計(jì)算得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

日間精密度試驗(yàn)（n=10）見表2。

表2 日間精密度試驗(yàn)（n=10）

在已知梅素和5-HMF質(zhì)量濃度的樣品中分別加入質(zhì)量濃度為0.5，5.0，50.0 μg/mL梅素和5-HMF標(biāo)準(zhǔn)品的方法，進(jìn)行加標(biāo)回收率和日間精密度試驗(yàn)，每個(gè)質(zhì)量濃度水平連續(xù)6 d重復(fù)進(jìn)行操作，將得出的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

5-HMF的加標(biāo)回收率和日間精密度（n=6） 見表3，梅素的加標(biāo)回收率和日間精密度（n=6） 見表4。

2.4 方法適用性

為驗(yàn)證該方法，使用該檢測方法對(duì)市售青梅精產(chǎn)品中梅素和5-HMF進(jìn)行了檢測。

表3 5-HMF的加標(biāo)回收率和日間精密度（n=6）

表4 梅素的加標(biāo)回收率和日間精密度（n=6）

青梅精產(chǎn)品檢測結(jié)果見表5。

表5 青梅精產(chǎn)品檢測結(jié)果

由表5可知，不同品牌青梅精產(chǎn)品中的梅素和5-HMF含量差別較大，說明市面上售賣的青梅精產(chǎn)品品質(zhì)參差不齊，不排除有假冒偽劣產(chǎn)品混入市場的可能。試驗(yàn)分別以烏梅干提取液和梅胚脫鹽提取液為原料自制青梅精，在加熱熬煮青梅精的過程中每間隔一段時(shí)間采樣進(jìn)行檢測。

烏梅干熬煮過程中梅素和5-HMF的變化見表6，梅胚熬煮過程中梅素和5-HMF的變化見表7，烏梅干熬煮過程中梅素和5-HMF的變化見圖3，梅胚熬煮過程中梅素和5-HMF的變化見圖4。

從表6和表7可知，以不同青梅產(chǎn)品為原料熬制得到的青梅精成品中梅素和5-HMF含量差別很大。梅素作為青梅精中重要的功能成分，是青梅中的糖和酸在持續(xù)加熱過程中通過化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的。梅胚進(jìn)行脫鹽的漂洗處理過程中流失了大量的糖和酸，所以生成梅素的進(jìn)程明顯慢于烏梅干，最后得到的成品中梅素的含量也遠(yuǎn)低于烏梅干，這可能是由于烏梅干本身就是新鮮青梅以炭火慢慢烤制而得。

表6 烏梅干熬煮過程中梅素和5-HMF的變化

表7 梅胚熬煮過程中梅素和5-HMF的變化

圖3 烏梅干熬煮過程中梅素和5-HMF的變化

圖4 梅胚熬煮過程中梅素和5-HMF的變化

在烤制烏梅干的過程中，糖和酸已經(jīng)在進(jìn)行合成梅素的化學(xué)反應(yīng)，通過檢測發(fā)現(xiàn)烏梅干提取液中已經(jīng)含有少量梅素。試驗(yàn)表明，以烏梅干為原料熬制青梅精所需要的時(shí)間明顯少于梅胚提取液。說明烏梅干也可作為熬制青梅精的原料，而且還有加工時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法對(duì)青梅精產(chǎn)品中的梅素和5-HMF含量進(jìn)行了梯度洗脫條件的優(yōu)化，確定了最佳洗脫條件，并用該方法檢測了市售青梅精產(chǎn)品中的梅素和5-HMF含量。在保證分離度、準(zhǔn)確度的前提下，實(shí)現(xiàn)了快速、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)檢測青梅精中梅素和5-HMF的目的，為研究青梅精產(chǎn)品保健功效和實(shí)現(xiàn)工業(yè)化加工具有一定意義。

[1]張雁，張名位，徐志宏.新型青梅保健果凍的研制 [J].中國果菜，2002（4）：26-29.

[2]劉瓊，張躍廷.青梅資源及其綜合開發(fā)利用 [J].釀酒，2001，28（6）：68-69.

[3]黃偉素，潘秋月，高一勇.青梅果產(chǎn)品的開發(fā)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 [J].食品工業(yè)科技，2011（11）：519-521.

[4]李慶衛(wèi).梅研究進(jìn)展 [J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26：116-122.

[5]Nongluk，Sriwilaijaroen.Mumefural and related HMF derivatives from Japanese apricot fruit juice concentrate show multiple inhibitory effect on pandemic influenza A（H1N1）virus[J].Food Chemistry，2011，127：1-9.

[6]Karl W.Normington characterization of a nitrite scavenger，3-Hydroxy-2-pyranone from chinese wild plum juice[J]. Food Chemistry，1986，34：215-217.◇

Simultaneous Determination of Mumefrual and 5-HMF in Plum Essence by HPLC

LIANG Duo，LIU Zhijun，XIAO Wanna

（Guangdong Polytechnic of Science and Trade，Guangzhou，Guangdong 510430，China）

This paper optimizes furfural elution method for the simultaneous determination of mumefrual and 5-HMF by HPLC. The limit of detection LOD（S/N=3） are 2.0，1.0 mg/kg，the limit of quantifictation LOQ（S/N=10） are 6.5，3.5 mg/kg respectively for mumefrual and 5-HMF by HPLC.The linear range are 2.0～500，1.0～500 μg/mL，correlation coefficient are 0.996 and 0.999.Mumefrua and 5-HMF are detected by the method.The study finds that the quality of product is different. Research the change of mumefrua and 5-HMF during boiling for dark plum and salted plum as the raw materials.The established detection method has an important guiding role for the research and development of plum essence products.

HPLC；plum essence；mumefrual；5-HMF

R286

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.01.016

1671-9646（2017）01a-0057-03

2016-10-18

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目“青梅精加工技術(shù)研究與推廣”（2014A070713002）。作者簡介：梁 多（1977— ），女，碩士，副教授，研究方向?yàn)槭称芳庸づc檢測。