關春林+石玉星

摘要：采用菌絲生長速率法測定了7種復配劑（30%醚菌酯和95.2%百菌清按照不同體積混配，其濃度梯度均為0微克/毫升、0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）對蘋果斑點落葉病菌進行毒力測定。結(jié)果表明：相對于醚菌酯或百菌清單劑，混配后均表現(xiàn)出增效作用，其中醚菌酯和百菌清按照體積比為3∶1的增效作用最為明顯，EC50為1.4716微克/毫升，共毒系數(shù)為410.12。因此在對蘋果斑點落葉病菌的防治中，建議使用醚菌酯與百菌清混配藥劑防治效果最佳。

關鍵詞：蘋果斑點落葉病菌；殺菌劑；混配；增效作用

基金項目：國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（201203030）

中圖分類號： S436.611 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.01.018

蘋果斑點落葉病又稱為褐紋病，褐色葉枯病，褐色斑點病及大星病。該病最早于1956年報道于日本巖手縣，之后成為日本蘋果樹上僅次腐爛病的第二大病害。自20世紀70年代末在我國各蘋果產(chǎn)區(qū)都時有發(fā)生，以渤海灣和黃河古道地區(qū)受害較重。主要為害葉片，造成早落，也為害新梢和果實，影響樹勢和產(chǎn)量。葉片染病初期出現(xiàn)褐色圓點，其后逐漸擴大為紅褐色，邊緣紫褐色，病部中央常具一深色小點或同心輪紋。天氣潮濕時，病部正反面均可長出墨綠色至黑色霉狀物，即病菌的分生孢子梗和分生孢子。夏、秋季高溫高濕，病菌繁殖量大，發(fā)病周期縮短，秋梢部位葉片病斑迅速增多，一片病葉上常有病斑10～20個，多斑融合成不規(guī)則大斑，葉即穿孔或破碎，生長停滯，枯焦脫落。葉柄、1年生枝和徒長枝上，出現(xiàn)褐至灰褐色病斑，邊緣有裂縫。幼果出現(xiàn)1～2毫米的小圓斑，有紅暈，后期變黑褐色小點或成瘡痂狀。影響葉片正常生長，常造成葉片扭曲和皺縮，病部焦枯，易被風吹斷，殘缺不全。果實染病，在幼果果面上產(chǎn)生黑色發(fā)亮的小斑點或銹斑。病部有時呈灰褐色瘡痂狀斑塊，病健交界處有龜裂，病斑不剝離，僅限于病果表皮，但有時皮下淺層果肉可呈干腐狀木栓化。蘋果斑點落葉病，造成蘋果早期落葉，引起樹勢衰弱，果品產(chǎn)量和質(zhì)量降低，貯藏期還容易感染其他病菌造成腐爛，是造成蘋果減少的重要病害。

蘋果斑點落葉病病原菌主要以菌絲和分生孢子在落葉上、 一年生枝的葉芽和花芽以及枝條病斑上越冬。目前防治該病的藥劑品種種類繁多，但防治效果參差不齊，從眾多藥劑中篩選出高效低毒的藥劑對防治該病具有重要意義。我們選出了百菌清、醚菌酯兩種藥劑將其用于混配實驗，試驗出最佳的配比來抑制蘋果斑點落葉病菌的生長從而達到防治蘋果斑點落葉病的目的。

1 材料與方法

1.1實驗材料

室內(nèi)毒力測定所采用的蘋果斑點落葉病菌由山西農(nóng)業(yè)大學農(nóng)藥學實驗室提供。

30%醚菌酯可溶粉劑（陜西恒田化工有限公司）。

95.2%百菌清可溶粉劑（江蘇利民化工股份有限公司）。

1.2實驗方法

1.2.1 PDA營養(yǎng)液的配制 將馬鈴薯200克洗凈去皮切成小塊，加1000毫升水煮沸30分鐘左右，撈起用多層紗布過濾去渣，過濾后在溶液內(nèi)加入瓊脂20克和葡萄糖粉20克，小火煮至瓊脂完全溶解，補水至足量即可。然后趁熱將其分裝于三角瓶內(nèi)，瓶口塞好棉塞。然后置于高壓消毒鍋內(nèi)滅菌30分鐘，并趁熱排成斜面，保存好待用。

1.2.2 單劑及復配劑的配制

單劑：先用蒸餾水將醚菌酯和百菌清原藥稀釋，配制成1000微克/毫升的母液，試驗時再將母液按照濃度梯度稀釋，根據(jù)預實驗結(jié)果選取6個不同濃度梯度（0微克/毫升 0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）。

復配劑：將醚菌酯與百菌清按照體積比為（1∶1、1∶3 3∶1、1∶4、4∶1、1∶7、7∶1）設置配比組合，每個配比設6個不同濃度（0微克/毫升、 0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）。

1.2.3室內(nèi)毒力測定 本實驗采用的是菌絲生長速率法，來測定醚菌酯與百菌清復配劑對蘋果斑點落葉病菌的毒力。取某一復配劑稀釋成一系列濃度梯度的藥液，在無菌操作條件下，吸取1毫升藥液倒入的滅菌培養(yǎng)皿中，然后往其中倒入9毫升40℃～50℃滅菌培養(yǎng)基，制成不同濃度的含藥平板，以不含藥劑的滅菌培養(yǎng)皿做空白對照。每個濃度重復3次。用打孔器在已培養(yǎng)好的蘋果斑點落葉病病原菌菌落邊緣往中央一圈圈切取菌餅，用接種針將切取好的菌餅接種于已冷卻凝固的培養(yǎng)皿中央，蓋上皿蓋，然后將培養(yǎng)皿堆放整齊置于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待空白對照的病原菌菌落即將擴展到全皿時，用十字交叉法測量各不同濃度藥液菌落直徑。

1.3數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計菌落擴展直徑并計算出抑制率，然后運用DPS軟件計算出復配劑的毒力回歸方程及EC50值。菌絲生長抑制率（%）=[1-（處理菌落平均直徑-菌餅直徑）/（空白對照菌落直徑-菌餅直徑）]×100。

采用孫云沛公式（Sun法）求出共毒系數(shù)（CTC）設復配劑為M，構成M的單劑分別作為A、B，毒理指數(shù)設為TI，百分含量為P，以A作為標準藥劑。其中增效作用判斷：CTC≥120為增效作用；80≤CTC<120為相加作用；CTC<80為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

測定醚菌酯、百菌清及兩者不同比例混配后對蘋果斑點落葉病菌的毒力，計算EC50和95%置信區(qū)限，見表1。

由表1可以看出，兩種單劑對蘋果斑點落葉病菌的毒力以醚菌酯較高，其EC50為5.1921微克/毫升，百菌清較低，其EC50為11.77微克/毫升。

由表1可知，醚菌酯EC50為5.1921微克/毫升，百菌清EC50為11.77，醚菌酯與百菌清混配后EC50依次為5.1645微克/毫升 ，3.6014微克/毫升，7.8639微克/毫升，4.5708微克/毫升，4.8218微克/毫升，3.6272微克/毫升，1.4716微克/毫升。經(jīng)孫沛云公式計算得出各體積比復配劑的共毒系數(shù)（CTC）依次為181.82，342.77，74.33，222.29，115.77，246.44，

410.12。

根據(jù)判斷標準可知：醚菌酯和百菌清復配3（4∶1）的CTC<80，表現(xiàn)為拮抗作用，復配劑5（7∶1）的CTC在80～120之間，表現(xiàn)為相加作用，復配劑1（1∶4）、復配劑2（1∶1）、復配劑4（1∶7）、復配劑6（1∶3）和復配劑7（3∶1）的CTC>120，表現(xiàn)為增效作用。

3 討論

本實驗測得了醚菌酯、百菌清及其7種比例復配對蘋果斑點落葉病菌的毒力，結(jié)果表明兩種殺菌劑按照不同比例復配，表現(xiàn)增效效果的配比分別為1∶4、1∶1、1∶7、1∶3、3∶1，其共毒系數(shù)（CTC）分別為181.82、342.77、222.29、246.44、410.12。表現(xiàn)為相加作用的配比為7∶1，其共毒系數(shù)（CTC）為115.77。表現(xiàn)為拮抗作用的配比為4：1，其共毒系數(shù)（CTC）為74.33。

根據(jù)制劑的增效配比、成本核算、用藥量等因素的影響，確定共毒系數(shù)為410.12的3：1醚菌酯和百菌清配比為最佳增效配比。室內(nèi)試驗表明，醚菌酯和百菌清的混配，有明顯的增效作用，同時兼具兩種殺菌劑的作用特點，是防治蘋果斑點落葉病菌的較好配比，并且如今的殺菌劑合理混配不僅能夠提高殺菌劑的藥效、擴大防治范圍、節(jié)約勞動力、減少殺菌劑用量、降低農(nóng)業(yè)成本、減少環(huán)境的污染等優(yōu)點，同時能夠有效延緩蘋果斑點落葉病菌抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。為了延緩蘋果斑點落葉病菌抗藥性的發(fā)展，應展開各種殺菌劑的混配深入研究，以便找出高效合理的復配藥劑。

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作者簡介：關春林，碩士，助理研究員，研究方向：旱作農(nóng)業(yè)研究。