楊立 陳海婷 姚小青 陳國(guó)平/江蘇省常州市金壇區(qū)金城獸醫(yī)站

雞場(chǎng)球蟲病調(diào)查

楊立 陳海婷 姚小青 陳國(guó)平/江蘇省常州市金壇區(qū)金城獸醫(yī)站

雞球蟲病是一種主要由艾美耳屬球蟲引起的呈世界性分布、嚴(yán)重危害養(yǎng)雞生產(chǎn)的主要雞病之一。目前已被美國(guó)農(nóng)業(yè)部列為對(duì)禽類危害最嚴(yán)重的五大疾病之一。在各種雞病中，球蟲病的發(fā)生率最高，占1/6～1/5，常呈暴發(fā)性流行。它對(duì)養(yǎng)雞生產(chǎn)的危害十分嚴(yán)重，15～50日齡的雛雞發(fā)病率最高，死亡率可高達(dá)80%。球蟲病流行的雞群生長(zhǎng)嚴(yán)重滯后，而且會(huì)誘發(fā)其他疾病，如大腸桿菌病、支原體病等。成年雞多為帶蟲者，增重和產(chǎn)蛋受到一定影響。耐過(guò)的病雞，長(zhǎng)期不得康復(fù)，生長(zhǎng)發(fā)育受到嚴(yán)重的影響。一些感染雞群不產(chǎn)生明顯的臨床型球蟲病，造成的隱性感染所帶來(lái)的損失可能更大。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年用于防治雞球蟲病的藥費(fèi)達(dá)數(shù)億元人民幣，占雞病全部防治費(fèi)用的近三分之一，而全球養(yǎng)禽業(yè)每年因?yàn)榍蛳x病造成的損失高達(dá)數(shù)十億美元。

一、材料與方法

（一）糞樣采集

筆者以群體采樣法，在常州某畜禽有限公司5個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)不同的點(diǎn)采集糞便(四周和中央共五點(diǎn))，每個(gè)糞樣重100～200 g，共采集5個(gè)雞群5個(gè)糞樣，按時(shí)間分兩次采樣，總計(jì)10個(gè)樣品。第1次采樣雞群日齡20～30 d，雞群大小1～2萬(wàn)只，共7.7萬(wàn)只雞；第2次采樣雞群日齡40～50 d，雞群大小1～2萬(wàn)只，共7.7萬(wàn)只雞。

（二）卵囊計(jì)數(shù)

每個(gè)樣品取2 g糞便，加入10 ml水?dāng)嚢杈鶆?，再加?0 ml飽和鹽水，過(guò)濾至小試管中，滴一滴至麥克馬斯特氏計(jì)數(shù)板，顯微鏡下觀察每克糞便中球蟲數(shù)量。

（三）卵囊分離與培養(yǎng)

將糞樣分別置于干凈的小燒杯中，再加入適量的清水?dāng)嚢杈鶆颍謩e經(jīng)60目銅絲篩和260目尼龍篩過(guò)濾，倒去糞渣，將濾液按照水洗沉淀法反復(fù)洗滌，傾去上清得到沉淀。沉淀中加入等量的3%～5%重鉻酸鉀，放入29℃的恒溫箱中培養(yǎng)，經(jīng)常晃動(dòng)，使有充分的氧氣孢子化，培養(yǎng)3～5 d使之孢子化。

（四）初次種類鑒定

取其培養(yǎng)后的卵囊（內(nèi)含重鉻酸鉀）加入離心管中，在2 000 rpm下離心10 min，使卵囊沉淀，傾棄全部重鉻酸鉀溶液，再加清水重新離心一次（時(shí)間和轉(zhuǎn)速與上同），傾棄全部上清液得沉渣，加飽和食鹽水入離心管中近滿，攪動(dòng)管底的沉渣，靜置3～5 min后，再在2000 rpm下離心5 min，沉渣中卵囊即漂浮至液面，再向離心管中加飽和食鹽水至管內(nèi)液面稍凸起，蓋上蓋玻片，立即取下以濕面蓋在載玻片上，在10×10或10×40的鏡下詳細(xì)觀察每種球蟲卵囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，測(cè)量卵囊大小，并用JVC顯微攝影機(jī)及顯微細(xì)胞圖象處理系統(tǒng)軟件拍攝卵囊圖片。

（五）回歸動(dòng)物試驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。1日齡健康出殼的蘇禽黃羽肉雞，在無(wú)球蟲環(huán)境中飼養(yǎng)，其飼料和飲水中也無(wú)球蟲污染且無(wú)抗球蟲藥。飼養(yǎng)到20日齡時(shí)，進(jìn)行卵囊接種試驗(yàn)。

2.卵囊接種。收集的卵囊經(jīng)培養(yǎng)孢子化后，以每個(gè)雞場(chǎng)2次采樣的卵囊為一組，混合接種20日齡的黃羽雛雞6只。

3.糞檢卵囊。接種90 h時(shí)收集糞便，檢查是否有卵囊，此時(shí)檢測(cè)出來(lái)的卵囊為早熟艾美耳球蟲。接種96 h收集糞便，檢查是否有卵囊，此時(shí)檢測(cè)出來(lái)的卵囊為和緩艾美耳球蟲。接種109 h收集糞便，檢查是否有卵囊，此時(shí)檢測(cè)出來(lái)的卵囊為堆型艾美耳球蟲或和緩艾美耳球蟲。

4.腸道黏膜分段檢查。在120 h與144 h分別剖殺，觀察病變、蟲體寄生部位與特征并拍照。剖殺時(shí)每只雞取其腸道，按不同的腸段分離后，各置于小燒杯中，加入適量水剖開腸道，腸內(nèi)容物及腸道黏膜稍研磨后經(jīng)銅篩漏斗過(guò)濾，濾液靜置1 h～2 h后傾去上清夜，沉渣中加入等量的3%～5%重鉻酸鉀，放入29℃的恒溫箱中培養(yǎng)，經(jīng)?；蝿?dòng)，使有充分的氧氣孢子化，并視情況滴加2.5%重鉻酸鉀防止干涸，培養(yǎng)3～5 d后待檢。

二、結(jié)果

（一）雞場(chǎng)感染球蟲的克糞卵囊數(shù)

雞場(chǎng)感染球蟲的克糞卵囊數(shù)（o.p.g）見表1，可見5個(gè)雞場(chǎng)在前后兩次的克糞卵囊數(shù)變化不盡一致，其中楊某、張某和顧某的雞場(chǎng)的克糞卵囊數(shù)降低，袁某的雞場(chǎng)的克糞卵囊數(shù)增加，王某的雞場(chǎng)卵囊數(shù)變化不大。

表1 雞場(chǎng)感染球蟲的克糞卵囊數(shù)（o.p.g）

（二）結(jié)果

1.球蟲種類。經(jīng)觀察鑒定和回歸動(dòng)物試驗(yàn)后驗(yàn)證，該公司部分雞場(chǎng)流行的雞球蟲種類有：柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲。

2.感染率。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲與和緩艾美耳球蟲的感染率分別為100%，毒害艾美耳球蟲的感染率20%，布氏艾美耳球蟲的感染率20%，早熟艾美耳球蟲的感染率20%。柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲與和緩艾美耳球蟲為優(yōu)勢(shì)種。

三、分析與討論

本次調(diào)查采用觀察卵囊形態(tài)特征與回歸動(dòng)物試驗(yàn)后腸道病變相結(jié)合的方法，對(duì)該公司部分雞場(chǎng)進(jìn)行了種類調(diào)查，根據(jù)結(jié)果分析其原因：在不了解雞場(chǎng)流行球蟲種類的情況下該公司雞場(chǎng)在雛雞4日齡時(shí)免疫雞球蟲疫苗（五聯(lián)苗），引進(jìn)了本來(lái)沒(méi)有的球蟲株；球蟲藥物的濫用，導(dǎo)致球蟲耐藥性的產(chǎn)生，使得球蟲對(duì)藥物的敏感性降低，最終導(dǎo)致球蟲的暴發(fā)。