范瑩瑩,張 健△,徐 冰

1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬國(guó)際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學(xué)第三醫(yī)院婦科(北京 100191)

△通訊作者

Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細(xì)胞學(xué)篩查宮頸癌前病變的臨床研究

范瑩瑩1,張 健1△,徐 冰2

1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬國(guó)際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學(xué)第三醫(yī)院婦科(北京 100191)

目的：探討Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細(xì)胞學(xué)在篩查宮頸癌前病變中的作用。方法：選擇25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對(duì)象，先進(jìn)行TCT檢查，ASC-US及以上患者均進(jìn)行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細(xì)胞學(xué)陰性者中隨機(jī)抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測(cè)。結(jié)果：Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級(jí)別的增加,其陽性率也增加且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=52.135,P<0.05),陽性率變動(dòng)范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正?；蜓装Y及CIN1的陽性率且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.998,P>0.05)。靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論：Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細(xì)胞學(xué)篩查對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變具有重要的臨床價(jià)值。

宮頸癌是威脅女性生命健康居第二位的惡性腫瘤,據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年新發(fā)宮頸癌達(dá)50余萬例，每年有約23萬的女性死于宮頸癌[1],我國(guó)每年新發(fā)宮頸癌約15萬例,每年有約8萬的女性死于宮頸癌,近年來,宮頸癌新發(fā)病例數(shù)逐年上升,且呈年輕化的趨勢(shì)[2]。研究發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的首要因素，本研究擬以陰道鏡活檢病理診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)[3]，評(píng)價(jià)宮頸液基細(xì)胞學(xué)分別聯(lián)合Aptima HPV檢測(cè)、Cobas HPV分型檢測(cè)技術(shù)及羅氏CINtec-Plus細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，用于宮頸癌前病變篩查,期望發(fā)現(xiàn)更有效的宮頸癌聯(lián)合篩查的方法,為宮頸癌篩查提供新策略。

材料與方法

1 一般資料 選取2014年5月至2016年5月就診的25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：無宮頸物理治療及手術(shù)史，無盆腔放射史，均排除妊娠。采樣前3 d無性生活、陰道沖洗及陰道炎。

2 研究方法 ①宮頸液基細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查：所有研究對(duì)象均將宮頸管內(nèi)和鱗柱上皮交界處采集的細(xì)胞涮洗在TCT專用取樣瓶中，經(jīng)TCT專用制片機(jī)制成薄層涂片，經(jīng)巴氏染色后鏡檢。宮頸細(xì)胞學(xué)診斷按照國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的TBS(2001)分類法[4]。所有研究對(duì)象均采用宮頸液基細(xì)胞學(xué)進(jìn)行初篩，宮頸細(xì)胞學(xué)ASC-US及以上患者均進(jìn)行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細(xì)胞學(xué)陰性的患者中隨機(jī)抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測(cè)，以評(píng)估篩查的漏檢率。②Aptima HPV E6/E7 mRNA表達(dá)檢測(cè)：采用TCT剩余標(biāo)本，加入試劑處理后的標(biāo)本采用QuantiVirus TM冷光儀檢測(cè)；檢測(cè)結(jié)果為光子數(shù)，經(jīng)計(jì)算軟件轉(zhuǎn)換為拷貝數(shù)，≥1 copy/ml為陽性。③Cobas HPV DNA檢測(cè)：將鱗柱上皮交界處和宮頸管采集的細(xì)胞涮洗在HPV專用取樣瓶中，采用Cobas HPV(羅氏)評(píng)估HPV感染情況。④CINtec-Plus檢測(cè)：采用羅氏的CINtec-Plus檢測(cè)試劑盒(羅氏)，采用TCT剩余標(biāo)本，進(jìn)行檢測(cè)，雙染陽性的考慮為陽性，單染或者不染色的考慮為陰性。⑤組織病理學(xué)檢查：陰道鏡下宮頸活檢病理作為金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)病檢結(jié)果≥CIN2的患者行子宮頸電環(huán)切除(LEEP)或冷刀錐切術(shù)(CKC)，以獲取進(jìn)一步病理診斷。若不同部位有不同級(jí)別診斷，以病理級(jí)別最高者作為最后診斷。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 資料采用Epi Data 3.0軟件進(jìn)行錄入，采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)(百分比)表示，其比較采用χ2檢驗(yàn),評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的陽性率、陰性率、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 TCT、Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測(cè)和病理檢查結(jié)果 見表1。1506例研究對(duì)象,TCT檢查結(jié)果為未見上皮內(nèi)病變及惡性細(xì)胞(NILM)1317例(87.45%)，≥無明確意義的非典型細(xì)胞的改變(ASC-US)189例(12.55%)，對(duì)189例≥ASC-US患者均進(jìn)行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查，病理檢查為CIN1、CIN2、CIN3、ICC(宮頸浸潤(rùn)癌)的患者，Aptima HPV E6/E7 mRNA總體陽性率為82.08%(142/173)，低于Cobas HPV DNA總體陽性率89.60%(155/173)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=4.018,P<0.05),高于CINtec-Plus總體陽性率79.19%(137/173)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.463,P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級(jí)別的增加，其陽性率也增加且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=52.135,P<0.05)，陽性率變動(dòng)范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正?；蜓装Y及CIN1的陽性率且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.998,P>0.05)。在1317例NILM的患者中隨機(jī)抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測(cè),篩查的漏檢率為1.52%(1/66)。

表1 病理檢查結(jié)果與Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測(cè)結(jié)果關(guān)系 [例(%)]

2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對(duì)CIN2診斷價(jià)值 見表2。本研究中靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對(duì)CIN2診斷價(jià)值(%)

討 論

宮頸癌的主要致病病因?yàn)楦呶Ｐ偷腍PV,所以對(duì)女性檢測(cè)是否感染高危型的HPV,對(duì)于防控宮頸癌的發(fā)病具有重要的意義[5]。宮頸液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV DNA已經(jīng)在臨床上廣泛用于宮頸癌的普查，但是宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸感染HPV病毒等因素的協(xié)同作用下引起細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)改變以后才能進(jìn)行臨床診斷，所以其不能早期發(fā)現(xiàn)疾病，HPV DNA檢測(cè)只是能夠?qū)Σ《靖腥镜念愋瓦M(jìn)行判斷，不能夠表達(dá)感染病毒的致癌基因活性[6]，所以尋找能夠早期發(fā)現(xiàn)高危人群的篩查辦法是十分必要的。

目前有研究[7]發(fā)現(xiàn)高危HPV感染,會(huì)引起宮頸上皮內(nèi)發(fā)生病變后,導(dǎo)致E6、E7的表達(dá)增多,而E6、E7基因是HPV編碼區(qū)中的癌基因,基因編碼產(chǎn)物E6、E7蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用,可抑制P53蛋白功能,從而抑制細(xì)胞凋亡,E7蛋白還可通過抑制pRB使細(xì)胞周期失控。研究發(fā)現(xiàn)E6/E7mRNA的表達(dá)與宮頸病變程度呈正相關(guān)[8]。本研究發(fā)現(xiàn)Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級(jí)別的增加，其陽性率也增加，陽性率變動(dòng)范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。靈敏度以Cobas HPV DNA最高，但其特異度僅45.45%為最低，特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高，未發(fā)現(xiàn)Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。進(jìn)一步驗(yàn)證了E6/E7 mRNA 表達(dá)是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必經(jīng)步驟，E6/E7基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物E6/E7mRNA 反映了癌基因活性，其相比DNA，E6、E7 mRNA與病變的相關(guān)性更好。

綜上所述，Aptima HPV聯(lián)合宮頸液基細(xì)胞學(xué)篩查對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變具有重要的臨床價(jià)值。

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(收稿：2016-06-20)

子宮頸腫瘤 多相篩查 @Aptima HPV @液基細(xì)胞學(xué) @羅氏CINtec-Plus細(xì)胞學(xué)檢測(cè)

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10.3969/j.issn.1000-7377.2017.02.009