賀 敏，秦建設(shè)，呂武賓,姜興鵬△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系 404120;2.重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬醫(yī)院針灸科，重慶 404100)

柚皮苷對胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中SOD和NO水平的影響*

賀 敏1，秦建設(shè)1，呂武賓2,姜興鵬2△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校中醫(yī)系 404120;2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院針灸科，重慶 404100)

目的 觀察柚皮苷對乙酸型胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，探討柚皮苷對胃潰瘍的治療作用。方法 60只SPF級SD大鼠分成6組，即正常組，模型組，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組和蘭索拉唑組(3mg/kg)。采用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型。造模后次日開始給藥，每天1次，連續(xù)給藥1周后處死大鼠，采集標(biāo)本，檢測血清與胃黏膜組織液中SOD和NO水平。結(jié)果 柚皮苷具有明顯的抗?jié)冏饔谩Ｅc模型組相比，柚皮苷中、高劑量組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD和NO水平明顯升高(P<0.05)，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)。結(jié)論 柚皮苷具有顯著的抗胃潰瘍作用，其作用機(jī)制可能與提高血清及胃黏膜組織中SOD和NO的水平有關(guān)。

橙皮苷；胃潰瘍；超氧化物歧化酶;一氧化氮

柚皮苷(naringin)即柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又稱柚苷、柚皮素，是一種雙氫黃酮類化合物，是骨碎補(bǔ)、陳皮、枳實、青皮等中藥的主要有效成分之一?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗過敏及改善局部微循環(huán)和營養(yǎng)供給的性能，其較強(qiáng)的抗炎、抗氧化能力已被證實[1]。2013年，柚皮苷被國家批準(zhǔn)作為一類新藥進(jìn)入臨床試驗。大量藥物成分分析研究顯示，對胃潰瘍有治療作用的很多中成藥，如健脾舒胃凝膠、胃蘇顆粒、胃炎靈顆粒等中均檢測出含有大量的柚皮苷成分[2-4]。但是，有關(guān)柚皮苷對胃潰瘍的治療作用研究文獻(xiàn)比較少見。本文旨在研究柚皮苷對胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷的保護(hù)作用，特別是對超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平的影響，進(jìn)一步闡明柚皮苷的藥理作用，為治療胃潰瘍提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 柚皮苷(編號：101291319，Sigma公司)，蘭索拉唑片(規(guī)格：15mg，批號：120623，重慶科瑞制藥有限公司)，柚皮苷用羚甲基纖維素納(CMC)制成100%柚皮苷懸濁液。Bio-TekELX800多功能酶標(biāo)儀(美國)，H-1850R湘儀高速離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 分組 清潔級4月齡SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(渝)2012-0005。將大鼠分為正常組，模型組，柚皮苷低劑量、中劑量、高劑量組，蘭索拉唑組，每組10只。

1.2.2 模型制備 用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型[5-6]。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射進(jìn)行麻醉，在劍突下沿正中線作2～3cm的正中切口，打開腹腔，將胃輕輕拉出，用1.0mL注射器在胃前壁胃小彎角切跡下方刺入漿膜下注入0.1mL100%的乙酸，以出現(xiàn)白點為度，然后用細(xì)棉簽將溢出乙酸吸凈，用含生理鹽水清洗，將胃小心地納入腹腔，逐層縫合創(chuàng)口。術(shù)后當(dāng)日給大鼠自由飲水，次日開始自由飲食。

1.2.3 給藥方法 造模次日開始給藥：模型組給予生理鹽水1mL/100g灌胃；柚皮苷低劑量組給予50mg/kg灌胃；柚皮苷中劑量組給予100mg/kg灌胃；柚皮苷高劑量組給予200mg/kg灌胃；蘭索拉唑組給予3mg/kg蘭索拉唑。每天 1 次，連續(xù)給藥 1 周。正常組正常飲食。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 給藥1周后，所有組別大鼠禁食24h后，進(jìn)行腹腔麻醉，開腹采用腹主動脈取血方法收集血液標(biāo)本，取血后室溫靜置1h后3 500r/min離心10min，吸出上層血清存放在-85 ℃冰箱保存。胃黏膜用組織勻漿器勻漿后離心，吸出上層澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.2.5 觀測指標(biāo)與方法

1.2.5.1 血清SOD水平檢測 采用WST-1法檢測血清SOD水平。按試劑盒要求設(shè)定對照孔、對照空白孔、測定孔和測定空白孔，分別加樣品、雙蒸水、酶工作液、酶稀釋液、底物應(yīng)用液后，37 ℃孵育反應(yīng)20min。用多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekELX800，美國)在450nm波長測定光密度值(OD值)。依據(jù)公式計算樣品中SOD水平。

1.2.5.2 血清NO水平檢測 采用一步法，按試劑盒要求設(shè)定空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和測定孔，分別加雙蒸水，20mol/L亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，樣品，顯色劑后，靜置15min。用多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekELX800，美國)在550nm波長測定各孔吸光度值(A值)，依據(jù)計算公式得出各樣本NO水平。

2 結(jié) 果

2.1 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織SOD的變化 與模型組相比，柚皮苷低、中、高劑量給藥組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中SOD水平均升高，但柚皮苷中劑量、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中SOD水平的變化

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與柚皮苷低劑量組比較。

2.2 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織NO的變化 與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組與蘭索拉唑組大鼠血清及胃黏膜組織中NO水平均升高，但柚皮苷中、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中NO水平

a：P<0.01，與正常組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與低劑量組比較。

3 討 論

胃潰瘍是臨床常見的消化道疾病，各種物理和化學(xué)因素刺激、機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)及病原菌的感染導(dǎo)致胃黏膜損傷，誘發(fā)或加劇潰瘍病的發(fā)生[7-8]。大量研究表明，胃潰瘍產(chǎn)生與修復(fù)是一個非常復(fù)雜的過程，是多種細(xì)胞、生長因子及細(xì)胞外基質(zhì)相互作用的結(jié)果，而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保護(hù)因子減少是形成胃潰瘍的重要病理基礎(chǔ)之一。SOD是存在于體內(nèi)抑制和防御自由基損傷的重要抗氧化酶之一，胃潰瘍發(fā)生過程中氧自由基損傷是重要因素之一，大量試驗研究表明，SOD活性下降、抗氧化能力降低，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)，是胃潰瘍產(chǎn)生的重要機(jī)制[9]。本實驗研究結(jié)果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中SOD水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

NO不僅具有抗氧化作用，還是重要的胃黏膜保護(hù)因子，其主要通過以下機(jī)制發(fā)揮作用：(1)舒張血管平滑肌直接擴(kuò)張血管，增加胃黏膜血流，從而改善胃黏膜微循環(huán)；(2)改善受損胃黏膜的血管通透性，維持血管壁的完整性[10]；(3)拮抗內(nèi)皮素-1(ET-1)的縮血管作用[11]。本實驗結(jié)果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中NO的水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，相比柚皮苷低劑量組與蘭索拉唑組，柚皮苷高劑量組效果更明顯。

柚皮苷是一種在植物界廣泛存在的天然單體化合物，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其具有抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗過敏、改善局部微循環(huán)和營養(yǎng)供給的性能。其較強(qiáng)的抗炎、抗氧化能力已被證實[1]。本實驗結(jié)果顯示，柚皮苷具有明顯的促進(jìn)胃潰瘍愈合作用，且治療效果與蘭索拉唑無明顯差異。柚皮苷的作用機(jī)制可能是通過刺激胃黏膜細(xì)胞，促進(jìn)黏膜保護(hù)因子SOD及NO分泌，提高SOD及NO水平，加快胃黏膜的增殖與修復(fù)，從而達(dá)到保護(hù)胃黏膜，預(yù)防和治療胃潰瘍的作用。

[1]時雪峰．柚皮苷提取純化及其降血糖活性研究[D]．南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2008．

[2]牛曉靜，魯靜，段曉穎，等．HPLC同時測定健脾舒胃凝膠中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草酸銨5種成分水平[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2015，21(2)：77-79．

[3]楊佳靜，薛佳，周華方，等．HPLC法同時測定胃蘇顆粒中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的水平[J]．中國藥房，2014，25(4)：372-374．

[4]張詠梅，陳曉峰，姚莉萍．HPLC法測定無糖型胃炎靈顆粒中柚皮苷的水平[J]．安徽醫(yī)藥，2014，18(6)：1045-1047．

[5]OkabeS,AmagaseK.Anoverviewofaceticacidulcermodels-thehistoryandstateoftheartofpepticulcerresearch[J].BiolPharmBull,2005,28(8):1321-1341.

[6]才麗平，蔣寧，曲怡，等．“毒熱證”胃潰瘍大鼠模型的制備與評價[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(3)：501-504．

[7]LiuXH,ZhaoLG,LiangJ,etal.Componentanalysisandstructureidentificationofactivesubstancesforanti-gastriculcereffectsinradixastragalibyliquidchromatographyanntandemmassspectromeltry[J].JChromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci,2014(960):43-51.

[8]陳月，曲連悅，李曉赫，等．蘭索拉唑治療胃潰瘍4周和8周愈合率的療效評價[J]．中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(23)：1956-1960．

[9]王海燕，劉亞明，李海燕，等．高良姜對胃潰瘍小鼠模型血清NO,SOD及MDA的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(7)：1640-1642．

[10]杜勇，趙偉春，沈文文，等．腹水草抗大鼠乙酸型胃潰瘍的作用及其對NO,iNOS和VEGF表達(dá)的影響[J]．浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，10(37)：1151-1155．

[11]林潔，文穎娟．加味左金湯對胃潰瘍大鼠血清NO及胃黏膜EGF,EGFR表達(dá)的影響[J]．中國中醫(yī)急癥，2013，11(22)：1836-1838．

?驗交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.026

重慶市教育委員會科學(xué)技術(shù)研究資助項目(KJ131805)。

賀敏(1980-)，講師，碩士，主要從事中醫(yī)藥治療脾胃疾病方面研究?！?/p>

E-mail：657537946@qq.com。

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1671-8348(2017)02-0230-03

2016-07-10

2016-10-11)