陳哲，張艷霞，羅卿，賈遠(yuǎn)航，何振華，張秀峰

（1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院胸心中心呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，湖南衡陽(yáng)421001；2.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南衡陽(yáng)421001）

臨床論著

哮喘患者血清胱抑素C水平與白細(xì)胞介素8的相關(guān)性分析

陳哲1，張艷霞2，羅卿1，賈遠(yuǎn)航1，何振華1，張秀峰1

（1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院胸心中心呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，湖南衡陽(yáng)421001；2.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院，湖南衡陽(yáng)421001）

目的探討胱抑素C（Cys-C）與白細(xì)胞介素8（IL-8）的相關(guān)性，并分析其在支氣管哮喘中的應(yīng)用價(jià)值。方法157例支氣管哮喘患者在南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院接受治療，病情穩(wěn)定后出院，根據(jù)患者入院時(shí)病情將其分為哮喘緩解期（A組）43例、輕度急性發(fā)作期（B組）42例、中度急性發(fā)作期（C組）39例和重度急性發(fā)作期（D組）33例以及110例健康者為對(duì)照組。測(cè)定上述各組患者血清Cys-C及IL-8含量，同時(shí)對(duì)各組痰細(xì)胞進(jìn)行分類并計(jì)數(shù)，并檢測(cè)各組肺功能。結(jié)果對(duì)照組、A組、B組、C組、D組Cys-C水平分別為（275.69±32.90）、（385.83±49.84）、（537.83±53.29）、（794.26±66.83）及（993.78±89.24）pg/ml；B、C、D組患者血漿Cys-C水平高于A組及對(duì)照組（P＜0.05），而D組患者高于B、C組（P＜0.05）。B、C、D組血清IL-8水平分別為（499.63± 75.84）、（586.73±72.38）和（625.92±98.43）pg/ml，高于A組（425.38±84.96）pg/mL及對(duì)照組（283.6±49.35）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），A組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。皮爾森相關(guān)分析表明，急性發(fā)作期患者Cys-C水平與FEV1（r=-0.585，P=0.008）、PEF％預(yù)計(jì)值（r=-0.493，P=0.019）、FEV1/FVC（r= -0.583，P=0.007）呈負(fù)相關(guān)，與IL-8（r=0.637，P=0.003）、誘導(dǎo)痰細(xì)胞總數(shù)（r=0.425，P=0.011）、嗜酸粒細(xì)胞百分比（r=0.485，P=0.019）呈正相關(guān)。結(jié)論隨著支氣管哮喘患者病情的發(fā)展，其血清漿中Cys-C和血清IL-8水平均升高，且Cys-C與IL-8具有相關(guān)性，可作為哮喘控制水平的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

哮喘；胱抑素C；白細(xì)胞介素8

哮喘是異質(zhì)性慢性炎癥呼吸道疾病，其主要特點(diǎn)是通過產(chǎn)生大量黏液及氣道壁重構(gòu)引起支氣管高反應(yīng)性和氣道阻塞。支氣管哮喘的主要特點(diǎn)是氣道炎癥，以及氣道炎癥引起的下呼吸道對(duì)各種環(huán)境刺激的高反應(yīng)性[1]。胱抑素C（Cystatin C，Cys-C）是半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，是一種衡量腎功能的新檢測(cè)指標(biāo)[2]。目前研究已經(jīng)證實(shí)，Cys-C與特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化和慢性阻塞性肺疾病等多種肺部呼吸道疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，也有研究發(fā)現(xiàn)Cys-C參與了哮喘發(fā)病，但其具體機(jī)制目前尚不清楚[3]。此外，支氣管哮喘屬于慢性炎癥疾病，白細(xì)胞介素作為一種重要炎癥因子在哮喘發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)IL-17、IL-6及IL-8等白細(xì)胞介素都與哮喘發(fā)病機(jī)制相關(guān)。Cys-C及血清IL-8均參與哮喘發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，本研究旨在分析哮喘患者中的兩者的關(guān)系，從而探討分析Cys-C和IL-8對(duì)哮喘病程進(jìn)展的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1～12月在南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院接受治療后的157例哮喘患者，效果良好，病情轉(zhuǎn)好，病情穩(wěn)定出院后均接受隨訪。根據(jù)患者入院時(shí)病情將所有患者分為4組：哮喘緩解期（A組）43例，其中男23例，女20例，平均年齡（41.9±2.8）歲；輕度急性發(fā)作期（B組）42例，其中男25例，女17例，平均年齡（42.8±3.7）歲；中度急性發(fā)作期（C組）39例，其中男22例，女17例，平均年齡（43.4±5.1）歲；重度急性發(fā)作期（D組）33例，男19例，女14例，平均年齡（42.6±4.2）歲。并選取110例健康體檢者為對(duì)照組，其中男68例，女42例，平均年齡（37.6± 4.8）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者符合支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)、無吸煙史、對(duì)本次研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：近1個(gè)月內(nèi)接受哮喘治療；近1個(gè)月上呼吸道感染；器官移植術(shù)患者；慢性肝、腎、心等系統(tǒng)性疾病者及妊娠期及哺乳期患者。

1.2 方法

1.2.1 肺功能測(cè)定使用美國(guó)SENSORMEDICS 2100肺功能儀由本院肺功能技師操作測(cè)定支氣管哮喘組患者未控制階段的PC20 FEV1以及不同控制階段的肺通氣功能。肺通氣功能主要包括FEV1（forced expiratory volume in one second）/FEV1預(yù)計(jì)值、FVC（forced vital capacily）/FVC預(yù)計(jì)值、FEV1/ FVC、PEF（peak expiratory now）/PEF預(yù)計(jì)值。

1.2.2 誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)受試者超聲霧化吸入4％高滲鹽水，吸入時(shí)間20～30 min。所有參與者均未因出現(xiàn)呼吸困難而終止誘導(dǎo)。收集的痰標(biāo)本在2 h內(nèi)處理，加等量的0.1％二硫蘇糖醇（美國(guó)Signla公司）混勻，置37℃水浴振蕩孵育15 min，以確保痰液進(jìn)一步液化。用48μm尼龍濾網(wǎng)緩慢過濾，去除黏液及碎渣。將濾液充分混勻，務(wù)必分散成單個(gè)細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.2.3 血清Cys-C及IL-8測(cè)定取所有患者清晨空腹外周靜脈血5 ml，室溫放置20 min，2 000 r/min離心15min，取血清用于ELISA檢測(cè)Cys-C及IL-8。采用上海圻明生物科技有限公司提供的IL-8和Cys-C ELISA試劑盒測(cè)定血清IL-8和Cys-C含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較用方差分析，相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)分析法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般資料比較

各組受試者性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。哮喘患者FEV1、PEF以及FEV1/FVC值低于對(duì)照組（P＜0.05），且急性期患者較緩解期患者低（P＜0.05），急性期各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 各組患者血清Cys-C及IL-8含量比較

對(duì)照組、A組、B組、C組和D組Cys-C水平分別為（275.69±32.90）、（385.83±49.84）、（537.83± 53.29）、（794.26±66.83）和（993.78±89.24）pg/ml。B組、C組及D組患者血清Cys-C水平高于A組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=49.372，P＜0.05），而D組患者高于B組及C組（P＜0.05）。B、C和D組血清IL-8水平分別為（499.63±75.84）、（586.73± 72.38）和（625.92±98.43）pg/ml，高于A組（425.38± 84.96）pg/ml及對(duì)照組（283.6±49.35）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而A組與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1 患者一般資料比較

表2 各組受試者血清Cys-C及IL-8含量比較（pg/ml，±s）

表2 各組受試者血清Cys-C及IL-8含量比較（pg/ml，±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P＜0.05；2）與A組比較，P＜0.05

組別IL-8含量對(duì)照組（n=110）275.69±32.90283.6±49.35 A組（n=43）385.83±49.841）425.38±84.961）2）B組（n=42）537.83±53.291）2）499.63±75.841）2）C組（n=39）794.26±66.831）2）586.73±72.381）2）D組（n=33）993.78±89.241）2）625.92±98.431）2）F值49.37229.743 P值0.0000.000Cys-C含量

2.3 各組患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

哮喘患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞百分比、巨噬細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞百分比、嗜酸粒細(xì)胞百分比均高于對(duì)照組，且隨哮喘病程的發(fā)展，誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而各組誘導(dǎo)痰淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

2.4 Cys-C和IL-8表達(dá)相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析，急性發(fā)作期患者Cys-C水平與FEV1（r=-0.585，P=0.008）、PEF％預(yù)計(jì)值（r=-0.493，P=0.019）、FEV1/FVC（r=-0.583，P=0.007）呈負(fù)相關(guān)，與IL-8（r=0.637，P=0.003）、誘導(dǎo)痰細(xì)胞總數(shù)（r= 0.425，P=0.011）、嗜酸粒細(xì)胞百分比（r=0.485，P= 0.019）呈正相關(guān)，與巨噬細(xì)胞百分比（r=0.036，P= 0.145）、中性粒細(xì)胞百分比（r=0.035，P=0.211）、淋巴細(xì)胞百分比（r=0.013，P=0.404）無相關(guān)性。見表4。

表3 各組誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)分析（±s）

表3 各組誘導(dǎo)痰細(xì)胞計(jì)數(shù)分析（±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P＜0.05；2）與A組比較，P＜0.05；3）與B組比較，P＜0.05；4）與C組比較，P＜0.05

組別嗜酸性粒細(xì)胞/％對(duì)照組（n=110）4.9±2.123.2±1.464.2±1.612.5±1.70.4±0.2 A組（n=43）7.5±3.11）29.6±6.51）46.8±9.31）13.8±2.99.8±4.31）B組（n=42）9.6±3.21）2）32.8±5.41）2）41.4±8.61）2）12.5±2.611.6±3.71）2）C組（n=39）11.8±4.11）2）3）35.4±6.21）2）3）35.8±2.71）2）3）13.4±2.513.8±5.21）2）3）D組（n=33）13.4±4.11）2）3）4）38.7±7.51）2）3）4）27.4±4.21）2）3）4）12.8±2.25.1±1.21）2）3）4）F值62.73375.895128.46356.13749.795 P值0.0080.0010.0000.0040.007細(xì)胞總數(shù)（×105個(gè)/ml）中性粒細(xì)胞/％巨噬細(xì)胞/％淋巴細(xì)胞/％

表4 Cys-C與臨床參數(shù)的相關(guān)性分析

3 討論

支氣管哮喘的發(fā)病率自19世紀(jì)70年代以來不斷上升，目前全世界支氣管哮喘的發(fā)病率為4％～7％。支氣管哮喘的主要特點(diǎn)是氣道炎癥，以及氣道炎癥引起的下呼吸道對(duì)各種環(huán)境刺激的高反應(yīng)性。由于支氣管哮喘引起氣道口徑減小，支氣管痙攣和黏液過度分泌，導(dǎo)致患者呼吸困難。支氣管哮喘是一種可逆性疾病，可以通過服用支氣管擴(kuò)張劑或抗炎治療部分恢復(fù)患者氣道異常低氣流率。支氣管哮喘的臨床特征主要包括呼吸困難、胸部喘息和哮吼性咳嗽[4]。研究發(fā)現(xiàn)，Cys-C在哮喘患者的支氣管上皮細(xì)胞、呼吸道腺體內(nèi)皮細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、氣道和血管平滑肌細(xì)胞以及周圍的炎癥細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等）中高表達(dá)，并可以從機(jī)體的血清、痰液及支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中可以檢測(cè)到，其表達(dá)水平的高低可能與患者是否吸煙、哮喘的嚴(yán)重程度分級(jí)等因素相關(guān)。臨床研究顯示，與健康對(duì)照組比較，哮喘患者的痰液、BALF中的Cys-C水平明顯增高[5]。此外，對(duì)成年哮喘患者的血清中Cys-C水平與健康對(duì)照組中水平進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)在成年哮喘組中測(cè)得的Cys-C水平高于健康對(duì)照組中水平。AKELMA等[6]在＞5歲的哮喘兒童患者血清Cys-C水平研究中也得到了一致的結(jié)果。另外，李敏等[7]在0～5歲的哮喘患兒中研究也發(fā)現(xiàn)哮喘組患兒血清中Cys-C與TGF-β1明顯增高，且兩者呈正直線正相關(guān)關(guān)系。

相關(guān)研究顯示，對(duì)于重度急性哮喘患者對(duì)其進(jìn)行支氣管肺泡灌洗可發(fā)現(xiàn)患者氣道組織、痰液以及支氣管肺泡灌洗液中中性粒細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，也有學(xué)者認(rèn)為中性粒細(xì)胞數(shù)量增加屬于哮喘的特征之一[8]。最近也有相關(guān)研究表明，中性粒細(xì)胞在氣道重塑及哮喘氣道炎癥中發(fā)揮重要的作用[9]。同時(shí)也有研究指出，Cys-C可直接的或者是通過與許多炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子之間的相互作用而間接的參與肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的趨化、浸潤(rùn)，從而促進(jìn)哮喘發(fā)生、發(fā)展。本研究顯示，隨著哮喘病程的發(fā)展，患者中性粒細(xì)胞百分比、誘導(dǎo)痰細(xì)胞總數(shù)均顯著上升，而Cys-C含量也相應(yīng)升高，經(jīng)相關(guān)性分析，急性發(fā)作期患者Cys-C水平與誘導(dǎo)痰巨噬細(xì)胞總數(shù)，嗜酸粒細(xì)胞百分比呈正相關(guān)，提示Cys-C促進(jìn)慢性哮喘炎癥過程。

大量研究表明，哮喘患者支氣管中IL-8分泌與哮喘嚴(yán)重程度密切相關(guān)[10]。自從有研究發(fā)現(xiàn)，哮喘患者唾液和支氣管灌洗液中發(fā)現(xiàn)IL-8含量降低后，后續(xù)大量研究都證實(shí)該結(jié)果，且還發(fā)現(xiàn)IL-8含量與哮喘嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。IL-8含量、Th17細(xì)計(jì)數(shù)結(jié)果、Th17/Th2細(xì)胞混合浸潤(rùn)和唾液、支氣管灌洗液、肺切片和外周血中含有IL-8產(chǎn)生的3型天然淋巴細(xì)胞（IL-C3）都被認(rèn)為與成年和少兒哮喘嚴(yán)重程度有關(guān)。近來有研究證實(shí)，糖皮質(zhì)激素聯(lián)合長(zhǎng)效β2受體激動(dòng)劑吸入治療，能降低誘導(dǎo)痰中IL-17A、IL-8和MMP9水平，減輕嗜酸性粒細(xì)胞性炎癥，從而緩解哮喘患者病情[11]。因此IL-8在哮喘的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，哮喘患者血清中可檢測(cè)到IL-8，且隨著患者病情的逐步控制，血清中IL-8的水平會(huì)持續(xù)下降，當(dāng)患者哮喘達(dá)到緩解期時(shí)，其水平與健康患者相當(dāng)，從而提示IL-8可在哮喘患者及健康人體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。經(jīng)相關(guān)性研究分析發(fā)現(xiàn)，急性發(fā)作期患者Cys-C水平與IL-8呈正相關(guān)，從而提示，在急性哮喘患者中其病情的發(fā)展可能是Cys-C與IL-8共同作用的結(jié)果，但由于本研究樣本量較小，對(duì)于Cys-C與IL-8在哮喘中的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。

[1]吳迪.支氣管哮喘治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2013,19(4):664-667.

[2]程創(chuàng)業(yè),張道友.胱抑素C的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015,6(5):677-679.

[3]CIMERMAN N,BRGULJAN P,KRASOVEC M,et al.Serum cystatin C,a potent inhibitor of cysteine proteinases,is elevated in asthmatic patients[J].Clinica Chimica Acta,2000,300(300):83-95.

[4]莊蒙麗,白生龍,韓曉華,等.支氣管哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)因素及診治進(jìn)展[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué),2015,7(2):105-109.

[5]TAKEYABU K,BETSUYAKU T,NISHIMURA M,et al.Cysteine proteinases and cystatin C in bronchoalveolar lavage fluid from subjects with subclinical emphysema[J].European Respiratory Journal,1998,12(5):1033-1039.

[6]AKELMA A Z,CIZMECI M N,KANBUROGLU M K,et al.Elevated level of serum cys-c in school-age children with asthma[J]. Allergologia Et Immunopathologia International Journal for Clinical ＆amp;Investigate Allergology＆amp;ClinicalImmunology,2013,42(4): 275-281.

[7]李敏,宋麗,張建波,等.哮喘患兒CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及IL-10和TGF-β1的變化[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2009,11(10): 829-832.

[8]BROOKS C R,GIBSON P G,DOUWES J,etal.Relationship betweenairwayneutrophiliaandageinginasthmaticsand non-asthmatics[J].Respirology,2013,18(5):857–865.

[9]DE V V,SMULDERS S,HAENEN S,et al.Neutrophil and eosinophil granulocytes as key players in a mouse model of chemical-induced asthma[J].Toxicological Sciences,2013,131(2): 406-418.

[10]阮正英,李昌崇,童夏生,等.髓過氧化物酶、CD11b和IL-8在哮喘大鼠模型中表達(dá)增加[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2006,26(4):400-404.

[11]張輝,王靜,程哲,等.哮喘患者誘導(dǎo)痰中IL-17A、IL-8及MMP-9水平變化及糖皮質(zhì)激素對(duì)其的影響[J].山東醫(yī)藥,2009, 49(3):35-38.

（張西倩 編輯）

Changes of serum Cys-C and IL-8 and their significance in bronchial asthma

Zhe Chen1,Yan-xia Zhang2,Qing Luo1,Yuan-hang Jia1,Zhen-hua He1,Xiu-feng Zhang1
(1.Department of Respiratory Medicine,the Second Affiliated Hospital,University of South China,Hengyang,Hunan 421001,China;2.The Second Affiliated Hospital,University of South China,Hengyang,Hunan 421001,China)

ObjectiveTo explore the correlation of Cys-C and IL-8,and analyze its application value in bronchial asthma.MethodsTotally 157 patients with bronchial asthma received treatment in our hospital,and discharged from our hospital when their disease state was stable.According to the patient's condition at admission,they were divided into 4 groups;there were 43 cases in remission stage in group A,42 cases in mild acute attack stage in group B,39 cases in moderate acute attack stage in group C and 33 cases in severe acute attack stage in group D.And 110 healthy people were enrolled into control group.The content of serum Cys-C and IL-8 was measured,sputum cells were accounted and sorted,and lung function was tested in each group.ResultsThe Cys-C level of the control group,group A,group B,group C and group D was(275.69±32.90)pg/ml,(385.83±49.84)pg/ml,(537.83± 53.29)pg/ml,(794.26±66.83)pg/ml and(993.78±89.24)pg/ml respectively.The plasma Cys-C level of the groupsB,C and D was higher than that of the group A and the control group(P＜0.05);and the plasma Cys-C level of the group D was higher than that of the groups B and C(P＜0.05).The serum IL-8 level of the groups B,C and D was (499.63±75.84)pg/ml,(586.73±72.38)pg/ml and(625.92±98.43)pg/ml respectively,which was higher than (425.38±84.96)pg/mL of the group A and(283.6±49.35)pg/ml of the control group,the differences were statistically significant(P＜0.05);but there was no statistical difference between the group A and the control group (P＞0.05).Pearson correlation analysis showed that Cys-C level of the patients in acute attack period was in negative correlations with FEV1(r=-0.585,P=0.008),PEF％expectation(r=-0.493,P=0.019)and FEV1/FVC (r=-0.583,P=0.007),while in positive correlations with IL-8(r=0.637,P=0.003),total number of induced sputum cells(r=0.425,P=0.011)and percentage of eosinophiles(r=0.485,P=0.019).ConclusionsWith the development of bronchial asthma,the serum levels of Cys-C and IL-8 significantly increase,and Cys-C is associated with IL-8,which can be used as an indicator of asthma control.

bronchial asthma;Cys-C;IL-8

R562.2

：A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.02.008

1005-8982（2017）02-0047-05

2016-06-29

張秀峰，E-mail：zxf96178@126.com；Tel：13975488987