張園 郝璐

?

炎癥細(xì)胞因子CRP/IL-6/IL-10多態(tài)性與社區(qū)獲得性肺炎易感性及嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)研究

張園 郝璐

目的 探討炎癥細(xì)胞因子IL-6/CRP/IL-10多態(tài)性與社區(qū)獲得性肺炎(community-acquired pneumonia，CAP)易感性及嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)。 方法 選擇2012年10月-2014年6月就診于我院的366例CAP患者作為CAP組，另選同期405名健康體檢者作為對(duì)照組。應(yīng)用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)對(duì)所有受試者的CRP 1059G/C、IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A進(jìn)行基因型分析，收集所有受試者臨床資料，并采用CURB-65和PSI評(píng)分衡量CAP患者易感性、嚴(yán)重程度及預(yù)后。 結(jié)果 CAP組IL-6 -597G/A的AA+AG基因型和A等位基因頻率均高于對(duì)照組(均P<0.05)，A等位基因可能是發(fā)生CAP的危險(xiǎn)因子。CAP組IL-10 -592C/AAA基因型和A等位基因頻率均高于對(duì)照組 (均P<0.05)。SCAP組(重癥肺炎組)的死亡率、呼吸衰竭比率、膿毒性休克比率、多器官功能障礙綜合癥(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)比率、APACHEⅡ評(píng)分和住院天數(shù)均明顯高于NSCAP(非重癥肺炎組)組(均P<0.05)。SCAP組中IL-6 -597G/A A等位基因攜帶者分布頻率高于NSCAP組(P<0.05)。IL-10 -592C/A在SCAP組中AA基因型及A等位基因的頻率均明顯高于NSCAP組(均P<0.05)。攜帶IL-6-597G/A 突變基因型(GA+AA)的肺炎患者白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、血沉均明顯高于野生基因型攜帶者GG(均P<0.05)。攜帶IL-6 -597G/A突變基因型(GA+AA)的患者在死亡組中的比例遠(yuǎn)高于存活組(P<0.05)。攜帶IL-6 -597G/A 突變基因型(GA+AA)的肺炎患者CURB-65和PSI評(píng)分均明顯高于野生基因型攜帶者GG(均P<0.05)。此外，攜帶IL-10 -592C/A突變基因型(CA+AA)的肺炎患者CURB-65和PSI評(píng)分也均明顯高于野生基因型CC攜帶者，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。結(jié)論 IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A與CAP的發(fā)生發(fā)展以及嚴(yán)重程度相關(guān)，而CRP 1059G/C則與CAP的發(fā)生發(fā)展以及嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)。

炎癥細(xì)胞因子；IL-6；CRP；IL-10；社區(qū)獲得性肺炎；嚴(yán)重程度；遺傳多態(tài)性

社區(qū)獲得性肺炎 (Community-acquired pneumonia，CAP) 是指在院外感染的，包括具有明確潛伏期的病原體感染而在入院后平均潛伏期內(nèi)發(fā)病的肺實(shí)質(zhì)炎癥[1]。目前已有研究表明，炎癥反應(yīng)通道關(guān)鍵分子的基因多態(tài)性與肺炎易感性相關(guān)[2]。CRP 基因位于 1 號(hào)染色體長(zhǎng)臂，基因組長(zhǎng) 2.5 kb，有 2 個(gè)外顯子，中間由 1 個(gè)內(nèi)含子隔開，編碼 206 個(gè)氨基酸殘基[3]。先前研究結(jié)果表明CRP +1059 的單核苷酸多態(tài)性與慢性牙周炎及克羅恩病易感性有關(guān)[3-4]。 IL-6 基因位于第 7 號(hào)染色體短臂上，含5 個(gè)外顯子和4 個(gè)內(nèi)含子。研究發(fā)現(xiàn)，IL-6 基因多態(tài)性與多種疾病存在密切相關(guān)性，包括膿毒癥及慢性阻塞性肺疾病[5-6]。IL-10 作為人體內(nèi)最重要的抑炎性細(xì)胞因子，其基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性可能是影響我國(guó)兒童哮喘嚴(yán)重程度的重要候選基因[7]。啟動(dòng)子區(qū)域的基因多態(tài)性通常被認(rèn)為影響基因的表達(dá)水平，故此，我們?cè)O(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)來(lái)研究CRP 1059G/C、IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A的多態(tài)性與CAP的易感性和嚴(yán)重程度的關(guān)系，并期望本研究能提高CAP的診斷和病情嚴(yán)重度的評(píng)估水平，并為尋求更好的診治方案提供參考。

資料與方法

一、 研究對(duì)象

選擇2012年10月-2014年6月就診于我院的366例CAP患者作為CAP組，其中男208例，女158例，平均年齡64.8±8.6歲。另選同期405名健康體檢者作為對(duì)照組，其中男255例，女150例，平均年齡63.5±5.8歲?；颊叻?001年美國(guó)胸科醫(yī)師學(xué)會(huì)制定的社區(qū)獲得性診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：① 新近出現(xiàn)的咳嗽、咳痰或原有呼吸道疾病癥狀加重，并出現(xiàn)膿性痰，伴或不伴胸痛；② 發(fā)熱；③ 肺實(shí)變體征和/或聞及濕性啰音；④ 白細(xì)胞計(jì)數(shù) >10×109/L或<4×109/L，伴或不伴細(xì)胞核左移；⑤ 胸部X線檢查顯示片狀、斑片狀浸潤(rùn)性陰影或間質(zhì)性改變，伴或不伴胸腔積液。以上①-④項(xiàng)中任何一項(xiàng)加第⑤項(xiàng)，并排除肺結(jié)核、肺部腫瘤、非感染性肺間質(zhì)性疾病、肺水腫、肺不張、肺栓塞、肺嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)癥及肺血管炎后，即可明確臨床診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 痰涂片抗酸桿菌陽(yáng)性；② 伴有代謝性疾病，如糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減低、原發(fā)性醛固酮增多癥等；③ 既往或住院期間診斷為良性或惡性腫瘤；④ 伴自身免疫性疾?。虎?診斷為病毒性肺炎。本研究獲得內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。CAP組與對(duì)照組的性別構(gòu)成、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

二、標(biāo)本收集

所有受試者空腹10-12 h，晨起抽取肘靜脈血5 mL，用于檢測(cè)血清LI-6、CRP和IL-10，其余血樣加EDTA抗凝劑后保存于-80℃冰箱中，待提取白細(xì)胞基因組的DNA。DNA提取采用蛋酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法。每提取8組DNA樣本后，用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)樣本中是否含有DNA。每份外周血標(biāo)本預(yù)留一個(gè)備份以便復(fù)查。

三、臨床資料收集

記錄CAP組所有病例的性別、年齡、合并的基礎(chǔ)疾病、入院時(shí)癥狀及持續(xù)時(shí)間，入院后24小時(shí)之內(nèi)的體溫、呼吸頻率、血壓、心率、意識(shí)狀態(tài)及血常規(guī)、肝功能、腎功能、血沉、C反應(yīng)蛋白、痰和/或血培養(yǎng)、影像學(xué)資料，入院后治療及病情改變，預(yù)后。預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)患者28天內(nèi)是否存活，分為死亡組和存活組。

四、肺炎患者病情嚴(yán)重量化標(biāo)準(zhǔn)和肺炎PSI評(píng)分

根據(jù)英國(guó)胸科協(xié)會(huì)改良肺炎評(píng)分(CURB-65)量化CAP嚴(yán)重程度[9]，意識(shí)障礙、氮質(zhì)血癥、呼吸≥30次/分、低血壓和年齡>65歲各為1分。將肺炎患者分成重癥肺炎組(severe community-acquired pneumonia，SCAP)(≥3分)，非重癥肺炎組(non-SCAP，NSCAP)(<3分)。根據(jù)PSI評(píng)分將肺炎患者分為5級(jí)：分值0分為Ⅰ級(jí)，<70分為Ⅱ級(jí)，70-90分為Ⅲ級(jí)，90-130分為Ⅳ級(jí)，>130分為V級(jí)[10]。

五、引物設(shè)計(jì)與合成

在PCR-RFLP技術(shù)中，使用特異性限制性內(nèi)切酶識(shí)別PCR產(chǎn)物特異性位點(diǎn)，然后通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，根據(jù)產(chǎn)物片斷大小來(lái)判斷相應(yīng)位點(diǎn)的基因型。按照參考文獻(xiàn)[11]，并與Gene bank核對(duì)無(wú)誤后，用primer 5.0設(shè)計(jì)引物序列，分別擴(kuò)增CRP 1059G/C、IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A等位基因，，由上海生物工程公司合成。引物序列及長(zhǎng)度見表1。

表1 PCR引物序列

六、基因多態(tài)性檢測(cè)

CRP 1059G/C PCR反應(yīng)體系為50μL，其中模板DNA 100 ng，10×PCR(含MgCl215 mmol/L)緩沖液5μL，Taq DNA聚合酶1.0 U，dNTPs 200 μmoL/L。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min，然后94℃1 min，56℃ 1 min，72℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸5min。取純化后的PCR產(chǎn)物5μL，限制性內(nèi)切酶Mae Ⅲ，55℃水浴4h，酶切片段進(jìn)行2% 瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。IL-6 -597G/A PCR反應(yīng)體系：10×PCR(含MgCl215 mmol/L)緩沖液2.5μL，10 μmoL/L dNTPs 4.0μL，上下游引物各1μL ，模板DNA 1μL，Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL，加蒸餾水至25μL。PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min，然后95℃ 30s，50℃ 30s，72℃ 50s，35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸7 min。取純化后的PCR產(chǎn)物5μL，限制性內(nèi)切酶FoKⅠ酶切，37℃消化2h，酶切片段進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。

IL-10 -592C/A PCR反應(yīng)體系為25μL，含2.5μL 10× PCR 緩沖液，0.4 mmoL/L dNTPs，上、下游引物各0.6μmoL/L。PCR的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性2 min，94℃變性45s，58℃退火45s，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min。取純化后的PCR產(chǎn)物5μL，限制性內(nèi)切酶RsaⅠ酶切，37℃消化8h，酶切片段進(jìn)行2% 瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。

CRP 1059G/C經(jīng)PCR擴(kuò)增片段為744bp，經(jīng)Mae Ⅲ酶切后，有野生純合基因型GG (310bp、233bp和201bp)，突變雜合基因型GC (434bp、310bp、233bp和201bp)和突變純合基因型CC為(434bp和310bp)，(見圖1A)。IL-6 -597G/A 經(jīng)PCR擴(kuò)增片段為321bp，經(jīng)FoKⅠ酶切后，野生純合型GG基因型為321bp，突變純合基因型CC(193bp和128bp)和突變雜合基因型CG為(321bp、193bp和128bp)，(見圖1B)。IL-10 -592C/A PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為412bp的DNA片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶RsaI酶切后，野生純合型AA基因型為412bp，突變純合基因型CC(237bp和175bp)和突變雜合基因型AC為(175bp，237bp和412 bp)，(見圖1C)。每批PCR反應(yīng)均以蒸餾水替代模板DNA作為陰性對(duì)照，隨機(jī)挑取10%的DNA標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以證實(shí)分型方法的可靠性。

七、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、CRP、IL-6和IL-10 SNPs基因型及等位基因型頻率在CAP組和對(duì)照組的分布

圖1 CRP 1059G/C、IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A基因多態(tài)性檢測(cè)

M:marker，1:PCR產(chǎn)物；2、4：GC；3、6：GG；5：CC(圖1A)；M:marker，1:GG；2：GA；3：AA(圖1B)；M:marker，1、2:CC；3、4：AC；5、6：AA(圖1C)

表2 CRP、IL-6和IL-10 SNPs基因型及等位基因型頻率在病例組和對(duì)照組中的分布

對(duì)CAP組和對(duì)照組CRP 1059G/C、IL-6 -597G/A和IL-10 -592C/A 3個(gè)位點(diǎn)的基因型頻數(shù)分布分別進(jìn)行擬和優(yōu)度χ2檢驗(yàn)，結(jié)果表明3個(gè)位點(diǎn)在兩組中的頻數(shù)分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(均P>0.05)。CAP組IL-6 -597G/A的野生基因型(AA/AG)和A等位基因頻率均高于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，A等位基因可能是發(fā)生CAP的危險(xiǎn)因子(AAvs.GG：OR=3.103，95%CI=1.561-6.170；AA+GAvs. GG：OR=2.097，95% CI=1.406-3.127；Avs. G：OR=2.117，95% CI=1.384-3.238)。CAP組IL-10 -592C/A的野生基因型(AA)和A等位基因頻率均高于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，A等位基因可能是CAP的危險(xiǎn)因子(AAvs.CC：OR=2.485，95% CI=1.558-3.964；AA+CAvs. CC：OR=1.615，95% CI=1.166-2.235；Avs. C：OR=1.428，95% CI=1.116-1.826)，而CRP 1059G/C各基因型和等位基因在兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)，(見表2)。

二、CAP患者的一般資料

SCAP組的死亡率、呼吸衰竭比率、膿毒性休克比率、多器官功能障礙綜合癥(MODS)比率、APACHEⅡ評(píng)分和住院天數(shù)均明顯高于NSCAP組(均P<0.05)，而SCAP組年齡、性別比例與NSCAP組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均P>0.05，(見表3)。

表3 非重癥社區(qū)獲得性肺炎與重癥肺炎患者臨床資料比較

三、CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性

SCAP組中IL-6 -597G/AA等位基因攜帶者分布頻率高于NSCAP組(P<0.05)，而各基因型在NSCAP組和SCAP組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。此外，IL-10 -592C/A各基因型和等位基因的分布頻率在兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且SCAP組中AA基因型及A等位基因的頻率均明顯高于NSCAP組(均P<0.05)。而CRP 1059G/C各基因型和等位基因的分布頻率在兩組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均P>0.05，(見表4)。

四、CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎患者病情的相關(guān)性

攜帶IL-6-597G/A 突變基因型(GA+AA)的肺炎患者白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、血沉均明顯高于野生基因型攜帶者GG，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，而在住院時(shí)間方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。此外，CRP 1059G/C和IL-10 -592C/A攜帶者的住院時(shí)間、白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、血沉在各基因型間的差異也均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均P>0.05，(見表5)。

表4 CRP、IL-6和IL-10 SNPs在SCAP組與NSCAP組中的分布

表5 CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎患者病情的相關(guān)性

與野生基因型比較，*P<0.05

五、CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎患者病死率的相關(guān)性

IL-6 -597G/A 野生基因型GG在死亡組與存活組中的分布頻率分別是62.5%、81.3%，突變基因型(GA+AA)在死亡組與存活組中的分布頻率分別是37.5%、18.7%，攜帶突變基因型(GA+AA)的患者在死亡組中的比例遠(yuǎn)高于存活組(P<0.05)，而 CRP 1059G/C和IL-10-592C/A各基因型在死亡組與存活組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)，(見表6)。而在Puren等的報(bào)道中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)IL-6水平和死亡率的關(guān)系[12]。

六、CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性

攜帶IL-6 -597G/A 突變基因型(GA+AA)的肺炎患者CURB-65和PSI評(píng)分均明顯高于野生基因型攜帶者GG，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。此外，攜帶IL-10-592C/A突變基因型(CA+AA)的肺炎患者CURB-65和PSI評(píng)分也均明顯高于野生基因型CC攜帶者，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，而攜帶CRP 1059G/C肺炎患者的CURB-65和PSI評(píng)分在各基因型間的差異也均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均P>0.05，(見表7)。

表6 CRP、IL-6和IL-10 SNPs在死亡組與存活組中的分布

表7 CRP、IL-6和IL-10 SNPs與肺炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性

與野生基因型比較，*P<0.05

討 論

CAP是一種世界范圍內(nèi)的致病和致死疾病[13]。CAP相關(guān)肺損傷的確切機(jī)制是復(fù)雜的，并涉及到大量受遺傳因子影響的細(xì)胞和分子過(guò)程[12]。CRP、IL-6和IL-10的表達(dá)水平與CAP的易感性和嚴(yán)重度關(guān)系被廣泛研究并被認(rèn)為是急性炎癥反應(yīng)中起重要作用的細(xì)胞因子?；騿?dòng)子區(qū)的位點(diǎn)的多態(tài)性被認(rèn)為與基因的表達(dá)有密切聯(lián)系，故而對(duì)以上幾個(gè)基因的啟動(dòng)子多態(tài)性與CAP易感性的關(guān)系研究有可能為我們預(yù)測(cè)易感人群、判別疾病分級(jí)，預(yù)后等工作提供參考。我們選擇IL-6 597G/A，IL-10-592C/A，和CRP-1059G/C等以報(bào)道的多態(tài)性位點(diǎn)，這些位點(diǎn)在其他疾病中多有研究，但據(jù)我們所知，本文是針對(duì)這幾個(gè)位點(diǎn)與CAP易感度和嚴(yán)重程度及預(yù)后之間相關(guān)性的首次分析。

我們發(fā)現(xiàn)， IL-6 -597G/A的多態(tài)性的基因型頻率在CAP患者組和健康對(duì)照組存在明顯的差別，A等位基因的存在與CAP的易感性、病情嚴(yán)重程度、不良病理參數(shù)、高的病情分級(jí)指數(shù)以及病人高死亡率存在正相關(guān)性，提示A等位基因可能是危險(xiǎn)因子。在針對(duì)埃及地區(qū)兒童的CAP回顧分析中，Zidan等人的文章表明IL-6 174GG基因型和G等位基因與CAP的易感性成顯著相關(guān)，意外的是，正是GG基因型和G等位基因?qū)χ匕Y膿毒癥、急性呼吸衰竭和醫(yī)院死亡率有保護(hù)作用，在CAP患兒中，血清IL-6的水平是升高的，但Zidan的數(shù)據(jù)并沒(méi)有顯示血清IL-6的水平與IL-6 174G等位基因存在相關(guān)性[14]。雖然研究的SNP位點(diǎn)不同，但這間接支持了IL-6啟動(dòng)子區(qū)位點(diǎn)多態(tài)性與CAP的敏感度和病癥嚴(yán)重程度是相關(guān)的。這種相關(guān)性的機(jī)制還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來(lái)研究，可能的機(jī)制包括IL6-597G/A的多態(tài)性影響血清和肺部炎癥局部IL-6的表達(dá)水平，或者此位點(diǎn)的作用僅僅是因?yàn)榕c真正具有功能的遺傳位點(diǎn)之間具有連鎖不平衡。

我們還發(fā)現(xiàn)IL-10-592C/A AA基因型和A等位基因頻率與CAP易感性、嚴(yán)重程度、和PSI、CURB-65評(píng)分成正相關(guān)，顯示A等位基因?yàn)榭赡艿奈ｋU(xiǎn)因子。而在Gallagher等人的研究中，也顯示IL-10的一個(gè)啟動(dòng)子位點(diǎn)1082G/A的多態(tài)性與CAP的嚴(yán)重程度相關(guān)[15]。而且IL-10 592C/A被認(rèn)為與肺炎膿毒癥有關(guān)[16]。此位點(diǎn)與CAP的關(guān)系雖未見報(bào)道，我們合理的猜測(cè)IL-10 592C/A的多態(tài)性可能是通過(guò)影響IL-10的轉(zhuǎn)錄水平而影響機(jī)體在急性反應(yīng)期的免疫調(diào)節(jié)功能。Marthe S. Paats等人的研究也指出重癥CAP患者相較輕癥患者和健康人血清中IL-6和IL-10的水平明顯增高，且這些細(xì)胞因子的水平與肺炎嚴(yán)重指數(shù)成顯著正相關(guān)[17]，提示它們?cè)贑AP病理方面有重要作用。

雖然血清的CRP水平在肺炎和各種急性炎癥的診斷中被認(rèn)為有價(jià)值[18-20]，并且CRP 1059G/C的多態(tài)性被認(rèn)為影響CRP的表達(dá)[21]。但是我們的分析中并沒(méi)有顯示此位點(diǎn)多態(tài)性與CAP的相關(guān)具有顯著性。該位點(diǎn)通常被認(rèn)為是與心腦血管疾病相關(guān)的[22]。在Paats等人的文章中，也報(bào)道CRP的血清水平與CAP的嚴(yán)重程度沒(méi)有相關(guān)性[17]。在Kruger.S等人的研究中，也指出血清CRP作為診斷分級(jí)依據(jù)的價(jià)值較低[23]。

為了更好的理解基因多態(tài)性與CAP的關(guān)系，其作用的機(jī)制，還需要大量的努力。我們相信對(duì)CAP在病源學(xué)的準(zhǔn)確分型能幫助我們更好地去研究這些因子在疾病進(jìn)程中的作用[24]。雖然IL-6、IL-10的各種基因多態(tài)性位點(diǎn)與血清中IL-6、IL-10水平關(guān)系的研究在很多種疾病中都有研究，在健康個(gè)體中，IL-6的啟動(dòng)子區(qū)域基因多態(tài)性與外周表達(dá)水平是相關(guān)的，但是多數(shù)疾病的研究并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)IL-6啟動(dòng)子區(qū)的基因多態(tài)性與外周血中IL-6的含量有顯著相關(guān)性，故尋找能影響IL-6表達(dá)水平的基因多態(tài)位點(diǎn)是非常重要的，很可能這些蛋白的表達(dá)受多種基因位點(diǎn)的影響，故而在分析中掩蓋了單一位點(diǎn)的作用。另一個(gè)方面說(shuō)，外周血的含量對(duì)診斷是重要的，但并不一定就反映炎癥局部的情況[25]，故而對(duì)肺泡灌洗液的細(xì)胞因子水平的檢測(cè)在可行的條件下對(duì)理解多態(tài)性位點(diǎn)與表達(dá)水平的關(guān)系是有幫助的。但在CAP患者中IL-6 572G/A多態(tài)性與IL-6的血清水平的關(guān)系還無(wú)人報(bào)道，因而，對(duì)血清中因子的水平進(jìn)行測(cè)量也有利于我們證實(shí)或證偽這些位點(diǎn)的基因型與真實(shí)發(fā)生作用的因子的表達(dá)水平的關(guān)系。從我們對(duì)機(jī)理的初步推測(cè)，在感染的不同時(shí)期，相同的炎癥因子可能隨著疾病的進(jìn)程和病人病灶內(nèi)環(huán)境的改變產(chǎn)生不同的甚至相反的影響，我們希望有機(jī)會(huì)在動(dòng)物模型上跟蹤C(jī)AP組模型與對(duì)照組模型的這些因子的時(shí)序變化，以期更準(zhǔn)確地把握這些因子影響CAP的機(jī)理。我們的分析結(jié)果顯示IL-6 572G/A 和IL-10 592C/A 的遺傳位點(diǎn)的多態(tài)性與CAP的易感性、病情嚴(yán)重程度、和預(yù)后具有相關(guān)性， 但需要更多的研究去揭示這種相關(guān)性的機(jī)制。

[1] 徐加紅, 江桂林, 施永敏,等. 中醫(yī)拔罐治療老年社區(qū)獲得性肺炎30例療效觀察[J]. 河北中醫(yī), 2014(12):1834-1835.

[2] Cai X, Fu Y, Chen Q. Association between TLR4 A299G Polymorphism and Pneumonia Risk: A Meta-Analysis[J]. Med Sc Mon Intern Med J Exper Clin Res, 2015, 21:625-629.

[3] 張帆, 邵培, 黃萍. C-反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與相關(guān)疾病的研究進(jìn)展[J]. 廣東牙病防治, 2007, 15(7):330-332.

[4] 張帆, 徐國(guó)超, 黃萍,等. C-反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與慢性牙周炎伴Ⅱ型糖尿病易感性相關(guān)研究[J]. 實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2009, (6):889-892.

[5] 陸晶晶, 梁永杰, 尹琦,等. 白細(xì)胞介素-6基因多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病及吸煙因素的相關(guān)性研究[J]. 臨床內(nèi)科雜志, 2013, 30(10):669-672.

[6] 孫麗蓉, 王海龍, 高揚(yáng),等. IL-1、IL-6基因多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病肺動(dòng)脈高壓相關(guān)性研究[J]. 醫(yī)學(xué)研究雜志, 2013, 42(11):80-84.

[7] 張嘉琳, 陳虹, 胡良平,等. 白細(xì)胞介素4和10基因多態(tài)性與兒童哮喘的相關(guān)性及對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2002, 82(2):114-118.

[8] Niederman M S, Mandell L A, Anzueto A, et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention[J]. Am J Respir Crit Care Med, 2001, 163(7):1730-1754.

[9] Marc Andre P, Timothy T, Thomas W, et al. Short-term mortality of adult inpatients with community-acquired pneumonia: external validation of a modified CURB-65 score[J]. Postgr Med J, 2015, 91(1072).

[10] Gonzalez C, Johnson T, Rolston K, et al. Predicting pneumonia mortality using CURB-65, PSI, and patient characteristics in patients presenting to the emergency department of a comprehensive cancer center[J]. Canc Med, 2014, 3(4):962-970.

[11] Cao H, Hegele R A. Human C-reactive protein (CRP) 1059G/C polymorphism.[J]. J Hum Gen, 2000, 45(2):100-101.

[12] Patwari P P, Cain P O, Goodman D M, et al. Interleukin-1 receptor antagonist intron 2 variable number of tandem repeats polymorphism and respiratory failure in children with community-acquired pneumonia[J]. Ped Crit Car Med, 2008,9(6):553-559.

[13] Mandell L A, Wunderink R G, Anzueto A, et al. Niederman. Infectious Diseases Society of America/American Thoracic Society Consensus Guidelines on the Management of Community-Acquired Pneumonia in Adults[J]. Clin Inf Dis, 2007,44(Suppl 2):s27-s72.

[14] Zidan H E, Elbehedy R M, Azab. S F. IL6-174 G/C gene polymorphism and its relation to serum IL6 in Egyptian children with community-acquired pneumonia[J]. Cytokine, 2014,67(2):60-64.

[15] Gallagher P M, Lowe G, Fitzgerald T,et al. Association of IL-10 Polymorphism with severity of illness in community acquired pneumonia[J]. Thorax, 2003,58(2):154-156.

[16] Wattanathum A. Interleukin-10 haplotype associated with increased mortality in critically ill patients with sepsis from pneumonia but not in patients with extrapulmonary sepsis[J]. Chest, 2005,128(3):1690-1698.

[17] Paats M S,Bergen I M, Hanselaar W E,et al. Local and systemic cytokine profiles in nonsevere and severe community-acquired pneumonia[J]. Eur Respir J, 2013,41(6):1378-1385.

[18] 王艾麗, 嚴(yán)孝嶺, 羅冰, 等. 兒童肺炎支原體感染檢測(cè)MBL和CRP的意義[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 2009，16(1)： 1-3.

[19] 王利建. CRP對(duì)流感合并急性肺炎早期診斷的臨床價(jià)值[J]. 放射免疫學(xué)雜志,2010，23(2)： 237-238.

[20] 簡(jiǎn)亞梅, 張少興, 胡路華, 等. CRP動(dòng)態(tài)檢測(cè)在老年社區(qū)獲得性肺炎的臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志,2010，27(6):681-682.

[21] Rizzello V, Liuzzo G, Giannuario G D,et al. 1059G/C polymorphism within the exon 2 of the C-reactive protein gene: relationship to C-reactive protein levels and prognosis in unstable angina[J]. Coronary Artery Disease, 2007,18(7):533-538.

[22] C.R. Balistreri C R, Vasto S,Listi F,et al. Association between +1059G/C CRP polymorphism and acute myocardial infarction in a cohort of patients from Sicily: a pilot study[J]. Ann N Y Acad Sc, 2006,1067(1)：276-281.

[23] K. S, E. S, M. R, et al. Group, Procalcitonin predicts patients at low risk of death from community-acquired pneumonia across all CRB-65 classes[J]. Eur Respir J, 2008,31(2):349-355.

[24] Menéndez R, J.M. Sahuquillo-Arce J M, Reyes S,et al. Torres Cytokine activation patterns and biomarkers are influenced by microorganisms in community-acquired pneumonia[J]. Retour Au Numéro, 2012,141(6):1537-1545.

[25] Boutten A, Dehoux M S, Seta N,et al. Compartmentalized IL-8 and elastase release within the human lung in unilateral pneumonia[J]. Am J Respir Crit Care Med, 1996,153(1):336-342.

Correlation of IL-6/CRP/IL-10 polymorphisms with the susceptibility and severity of community-acquired pneumonia

ZHANGYuan,HAOLu

DepartmentofRespiratoryMedicine,theAffiliatedHospitalofInnerMongoliaMedicalUniversity,Huhhot,InnerMongolia010050,China

Objective To explore the correlation of IL-6/CRP/IL-10 polymorphisms with the susceptibility and severity of community-acquired pneumonia. Methods A total of 366 CAP patients were enrolled as the case group and 405 healthy individuals as control group. PCR-RFLP was performed to analyze CRP 1059G/C, IL-6-597G/A and IL-10-592C/A genotypes. CURB-65 score and PSI score were used to measure susceptibility, severity and prognosis of CAP. Results When compared with the control group, wild genotype (AA/AG) frequency of IL-6 597G/A and A allele frequency, IL-10-592C/A AA genotype and A allele were higher in the CAP group (allP<0.05). Comparing with the non-severe community-acquired pneumonia (NSCAP) group, the distribution frequency of IL-6 -597G/A A allele carrier was higher in the SCAP group (P<0.05). In terms of white blood cells count, neutrophil cells count and erythrocyte sedimentation rate (ESR), CAP patients who carried IL-6-597G/A mutant genotype were higher than wild genotype GG carriers, and all differences were statistically significant (allP<0.05). Besides, comparing with the survival group, the proportion of patients carrying IL-6 -597G/A mutant genotype (GA+AA) was far higher in the death group (P<0.05). When compared with wild genotype carriers (GG), CURB-65 score and PSI score were significantly higher in CAP patients carrying IL-6 -597G/A mutant genotype (GA+AA) (bothP<0.05). Furthermore, CURB-65 score and PSI score were significantly higher in CAP patients carrying IL-10 -592C/A mutant genotype (CA+AA) than that in wild genotype carrier (CC) (bothP<0.05). Conclusion IL-6 -597G/A and IL-10 -592C/A are associated with the occurrence and development of CAP and its severity of CAP, while there is no association of CRP 1059G/C with CAP and its severity.

inflammatory cytokines; IL-6; CRP; IL-10; severity; genetic polymorphism

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.02.021

010050 內(nèi)蒙古 呼和浩特，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科

郝璐，E-mail: haolu1231@163.com

2016-06-08]