□ 吳鈺冰 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院

克倫特羅檢測(cè)方法的應(yīng)用

□ 吳鈺冰 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院

近年來(lái)，不良商家違法使用“瘦肉精”引起食品質(zhì)量安全問(wèn)題，克倫特羅是“瘦肉精”的其中一種。本文以檢測(cè)現(xiàn)象的不同為依據(jù)，討論各種檢測(cè)方法的特點(diǎn)，并展望檢測(cè)技術(shù)的研究前景，以期對(duì)肉類安全檢測(cè)有一定的參考作用。

克倫特羅；免疫分析法；檢測(cè)方法

鹽酸克倫特羅（Clenbuterol Hydroch loride，CL）是一種腎上腺類神經(jīng)興奮劑，能顯著提高胴體的瘦肉率?，F(xiàn)如今，我國(guó)明令禁止添加使用并不斷提高檢測(cè)技術(shù)。檢測(cè)CL的方法有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜－質(zhì)譜法（GC-MS）和免疫分析技術(shù)（IA）等。本文概述免疫分析技術(shù)在檢測(cè)肉類中CL的應(yīng)用，以期對(duì)實(shí)際檢測(cè)有一定的參考作用。

1 免疫分析法在肉類中克倫特羅檢測(cè)的應(yīng)用

1.1 放射免疫分析法（RIA）

RIA以標(biāo)記抗原與反應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特異性抗體，測(cè)定待檢樣品中抗原量。RIA雖然具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、樣品及試劑用量少、操作簡(jiǎn)便且易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，但也存在放射污染和危害，常用核素半衰期短、試劑盒穩(wěn)定期不長(zhǎng)等諸多不足。目前，國(guó)外已生產(chǎn)出測(cè)定CL的試劑盒產(chǎn)品，還用受體代替抗體結(jié)合CL，使檢測(cè)限高達(dá)到2.4 ng/g。

1.2 時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）

TRFIA是以具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合劑作為示蹤物，建立的一種新型的非放射性微量分析技術(shù)。

TRFIA有效地消除激發(fā)光、雜散熒光等背景光對(duì)檢測(cè)極限的限制，降低非特異性信號(hào)，達(dá)到極高的信噪比，大大超過(guò)放射性同位素所能達(dá)到的靈敏度，且具有標(biāo)記物制備方便、儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)、無(wú)放射性污染、檢測(cè)重復(fù)性好、操作流程短和不受樣品自然熒光干擾等優(yōu)點(diǎn)[1]。

TRFIA方法學(xué)研究和臨床應(yīng)用發(fā)展迅速，國(guó)內(nèi)外相繼研制了多種TRFIA儀和配套的商品化試劑盒。如果研制成檢測(cè)CL的時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)試紙條，將實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.3 酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）

ELISA基于酶免疫法（EIA），將試劑抗體或試劑抗原用酶進(jìn)行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗原或抗體反應(yīng)后，測(cè)定復(fù)合物中的酶。常見(jiàn)的類型有雙抗夾心法、間接法、雙抗夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法。ELISA法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、酶標(biāo)記物半衰期長(zhǎng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，適合對(duì)活體動(dòng)物作大批量樣品的快速分析；缺點(diǎn)是酶活性受環(huán)境影響大，且該法檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率較高[2]。ELISA法應(yīng)用廣泛，國(guó)內(nèi)外在這方面的研究也比較多，方法發(fā)展比較成熟。應(yīng)致力于研究靈敏度高、多殘留測(cè)定的酶聯(lián)免疫試劑盒，開(kāi)發(fā)親和力高、特異性強(qiáng)的抗體[3]。

1.4 化學(xué)發(fā)光酶免疫法（CLEIA）

CLEIA是基于RIA和ELISA發(fā)展的一種分析方法，以辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶作為標(biāo)記酶，以魯米諾等發(fā)光劑作為底物，利用過(guò)氧化氫與魯米諾構(gòu)成的化學(xué)發(fā)光體系進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)，以檢測(cè)CL濃度[4]。CLEIA靈敏度高、線性范圍寬、光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，分析方法簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化。結(jié)果穩(wěn)定、誤差小，樣品系直接自己發(fā)光，使分析結(jié)果靈敏、穩(wěn)定、可靠、安全性好，免除了使用放射性物質(zhì)。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測(cè)動(dòng)物性食品中的克倫特羅殘留前景可觀，但國(guó)內(nèi)外尚處于初步階段，有待加強(qiáng)研發(fā)。

1.5 膠體金免疫法（GICT）

GICT法利用了金顆粒具有高電子密度的特性與正負(fù)電荷相吸的原理，使標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集形成肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)。GICT法具有檢測(cè)快速、簡(jiǎn)單、抗基質(zhì)干擾強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適合基層現(xiàn)場(chǎng)篩查的快速檢測(cè)活動(dòng)，但特異性和靈敏度較差。因此，存在一定的誤判的可能性[5]。GICT法被認(rèn)為是檢測(cè)CL最有前途的技術(shù)之一，可以繼續(xù)研發(fā)定量或半定量檢測(cè)紙條及通用檢測(cè)紙條。

2 結(jié)語(yǔ)

ELISA、RIA由于自身限制不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，而且檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)費(fèi)用昂貴。GICT和TRFIA靈敏、檢測(cè)快速和方便，是今后研究和開(kāi)發(fā)檢測(cè)CL等殘留物的重要方向。目前，克倫特羅檢測(cè)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于常規(guī)檢測(cè)中，但是其假陽(yáng)性高、檢測(cè)設(shè)備不易攜帶等缺點(diǎn)仍然存在，當(dāng)下的研究方向應(yīng)把廉價(jià)、準(zhǔn)確、迅速融為一體。參考文獻(xiàn)

[1]雷紅濤,高秀潔,潘科,等.克倫特羅時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2006(1):6-10.

[2]肖紅玉,劉國(guó)艷,史賢明.克倫特羅的檢測(cè)方法[J].中國(guó)飼料,2005(12):31-33.

[3]韓春卉,江濤,李燕俊,等.黃曲霉毒素酶聯(lián)免疫試劑盒穩(wěn)定性研究[J].食品科學(xué),2013(14):315?318.

[4]李細(xì)芬.克倫特羅化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法的研究[D].天津科技大學(xué),2010.

[5]李超輝,陳雪嵐,郭亮,等.膠體金免疫層析法定量檢測(cè)豬肉中克倫特