□ 羅長琴 重慶市萬州食品藥品檢驗(yàn)所

固相萃取-液相色譜法在食品中羅丹明B檢測中的運(yùn)用

□ 羅長琴 重慶市萬州食品藥品檢驗(yàn)所

隨著人們對食品安全的關(guān)注越來越高，發(fā)展出了多種檢測食品添加劑、農(nóng)殘、激素殘留、蘇丹紅以及三聚氰胺等毒害物質(zhì)的檢查技術(shù)，固相萃取-液相色譜（SPE-LC）技術(shù)就是其中的一種。本文首先介紹了固相萃取-液相色譜法的應(yīng)用優(yōu)勢，并分析了固相萃取-液相色譜法的應(yīng)用原理，最后以食品中羅丹明B的檢測為例，探討了固相萃取-液相色譜法的運(yùn)用。

固相萃取-液相色譜法；食品檢測；羅丹明B檢測

1 固相萃取-液相色譜法的應(yīng)用優(yōu)勢及原理分析

隨著人們對生活品質(zhì)的關(guān)注，對食品安全的要求也越來越高。不少食品安全機(jī)構(gòu)都對食品中的有害物質(zhì)作出了殘留量上限規(guī)定，并隨著時(shí)間推移，這些規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)越來越低，使得對監(jiān)測技術(shù)的要求也有所提高。目前，食品安全檢測工作中的常見技術(shù)有液相色譜（LC）和液相色譜-質(zhì)譜（LCMS），以及氣相色譜（GC）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）等多種方式，但這些方式檢測時(shí)間長、耗費(fèi)資源大且樣品制備十分復(fù)雜[1]。因此，應(yīng)用效益有待提高。而固相萃取-液相色譜法的出現(xiàn)，則有效解決了這一問題。固相萃取技術(shù)有人工操作方便、萃取徹底、易于收集被測物以及節(jié)約有機(jī)溶劑等優(yōu)勢，對實(shí)現(xiàn)簡單、快速、經(jīng)濟(jì)、有效的食品分析，起到了良好的作用。

固相萃取-液相色譜法，是一個包含有液相和固相的物理萃取過程，其通過利用選擇性吸附與選擇性洗脫分離原理進(jìn)行相應(yīng)的檢測。在具體的固相萃取中，由于固相吸附較溶解分離物的吸附力更大，當(dāng)樣品通過檢測活動經(jīng)過吸附劑床時(shí)，分離物會吸附于固相物體表面，而其他樣品成本則不被吸附，這樣就能確保在檢測過程中獲得高純度的、濃縮的分離物[2]?；蛘叻催^來說，可以選擇吸附干擾雜質(zhì)的物質(zhì)，從而得到被測物質(zhì)溶液。另外，固相萃取-液相色譜法還可以選擇吸附被測物質(zhì)及雜質(zhì)，再通過相應(yīng)的溶劑選擇性洗脫測定物質(zhì)。

2 固相萃取-液相色譜法在食品中羅丹明B檢測中的運(yùn)用

運(yùn)用固相萃取-液相色譜法檢測食品中的羅丹明B，可利用高效液相色譜熒光檢測器（HPLC-FLD）測定和提取凈化食品中的羅丹明B，其主要包括以下幾個步驟。

2.1 準(zhǔn)備好試劑及儀器設(shè)備

固相萃取-液相色譜法，所需試劑包括甲醇（色譜純）、正己烷（分析純）、甲醇飽和的正己烷（每100 mL正己烷＋5 mL甲醇，靜止分層后取上層使用），以及去離子水等。所需要的設(shè)備包括電子天平、固相萃取儀、高效液相色譜儀及熒光檢測器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀、OASISHLB小柱（200 mg，6 mL）、0.45 μm針式過濾器和超聲波清洗機(jī)等。

2.2 準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

首先，選擇高純度的羅丹明B，其純度以99%為佳。其次，通過電子天平，精準(zhǔn)選取適量的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品，利用甲醇制作出濃度100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液需在避光條件下保存，且溫度需要控制在-18 ℃以下。最后，選取適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行配置。按照工作曲線溶液的要求，分別配置成1、5、10、20、50 ng/mL以及100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注意避光保存。

2.3 進(jìn)行樣品處理

首先，要初步提取。樣品可分為油脂類產(chǎn)品（主要為食用油）、含油脂類產(chǎn)品（如辣椒醬、辣椒粉、臘魚、臘肉、香腸以及餅干薯片等）和低含油脂產(chǎn)品（包括果醬、果汁、蜜餞、糖果等）。油脂類產(chǎn)品取1 g，含油脂類產(chǎn)品取2～5 g，低油脂類產(chǎn)品取5 g，將樣品放入50 mL的具塞離心管內(nèi)。適量添加少量純凈水潤濕樣品，再加入0.1%甲酸含量的甲醇溶液10 mL。之后通過超聲波提取4 000 r/min離心，15min后，用滴管（一次性）吸取上層澄清甲醇，并通過另一離心管內(nèi)提取液過濾到新的離心管內(nèi)。對樣品需重復(fù)提取兩次，并合并提取液。其次，對上述的提取液進(jìn)行混合10 mL容量甲醇飽和過的正己烷，經(jīng)30 s旋渦混合后，可在60 ℃的水浴中加快分層。等到界面清晰后，通過吸出正己烷的方式，達(dá)到去除脂溶性色素的目的。之后加入5 mL正己烷進(jìn)行重復(fù)操作。對丟棄的正己烷可加入10 mL甲醇（0.1%甲酸的甲醇），就能進(jìn)行反提取操作。注意合并甲醇，之后在85 ℃的水浴中揮干，待到剩余2～3 mL時(shí)，再加入5 mL容量的5%甲醇水溶液。最后，運(yùn)用5 mL水和5 mL甲醇對固相萃取柱進(jìn)行平衡與活化，再將所有分配的液體，分?jǐn)?shù)次分步驟地加入到小柱中。用5 mL純凈水清洗離心管，之后準(zhǔn)入小柱之中，再以60%甲醇的水溶液10 mL淋洗小柱，并用85%甲醇的水溶液10 mL進(jìn)行洗脫羅丹明B的操作。之后，收集洗脫液放置在60℃水浴中，經(jīng)氮?dú)饬鞔蹈伞Ｔ儆眉状级ㄈ? mL后，經(jīng)過0.45 μm濾膜，就能進(jìn)行HPLC分析操作。

3 結(jié)語

經(jīng)過固相萃取-液相色譜法在食品中羅丹明B檢測中的具體運(yùn)用，能有效按照色譜條件及結(jié)果檢測食品中的羅丹明B，其方法不僅靈敏度高，且回收率好，大大降低了檢測成本，有很好的推廣效益。

[1]曹鵬,喬旭光,婁喜山,等.固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測食品中的6種工業(yè)染料[J].分析化學(xué),2011(11):1670-1675.

[2]阮成旭,陳梅蘭,王曉麗,等.食品中羅丹明B快速檢測方法的建立與實(shí)現(xiàn)[J].中國食品學(xué)報(bào),2015(6):167-172.