楊移斌 艾曉輝 董 靖 胥 寧 劉永濤 楊秋紅

一例加州鱸諾卡氏菌病診斷及其防控

楊移斌 艾曉輝 董 靖 胥 寧 劉永濤 楊秋紅

近年來在加州鱸的養(yǎng)殖過程中常出現(xiàn)一種以體表和內(nèi)臟出現(xiàn)大量白色結(jié)節(jié)為主要癥狀的傳染性疾病，該病病情持續(xù)時(shí)間長，死亡率高，嚴(yán)重威脅著加州鱸養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本文將對筆者診斷的一例該病做詳細(xì)的介紹，并對患病的加州鱸進(jìn)行了病原的分離鑒定、16S rDNA 分析、動(dòng)物回歸感染試驗(yàn)及藥物敏感性等方面的研究，以期為加州鱸諾卡菌病的有效防治提供理論參考，并供同行參考交流。

2015 年11月中旬，廣東順德某養(yǎng)殖戶反映，其養(yǎng)殖的加州鱸魚不吃食，并伴有少量死亡的現(xiàn)象。養(yǎng)殖戶也采取了一些措施進(jìn)行試探性治療，如使用聚維酮碘消毒等，連續(xù)用藥數(shù)天后，未見明顯效果，而鱸魚的死亡量卻在攀升。筆者接到求助電話后，趕赴現(xiàn)場，實(shí)地查看養(yǎng)殖環(huán)境條件、水質(zhì)情況，并將瀕死加州鱸取樣帶回實(shí)驗(yàn)室。

1 診斷

患病魚游動(dòng)緩慢，反應(yīng)遲鈍，上浮于水面，攝食量減少，每天大量死亡，持續(xù)周期長。隨病情加重，病魚體表開始充血發(fā)炎，逐漸潰爛，胸腹鰭和尾鰭均有潰爛出血癥狀，部分病魚肛門紅腫。鰓上黏液增多，部分魚鰓絲出現(xiàn)小出血點(diǎn)，邊緣缺損。肝常有白色或淡黃色結(jié)節(jié)，肝臟受損、出血，膽變色、萎縮，部分魚脾、腎也可觀察到結(jié)節(jié)，腹腔肌肉上有白色或淡黃色結(jié)節(jié)。

2 病原菌分離純化

從具有典型發(fā)病癥狀瀕死的病魚取肝臟、腎臟及脾臟等部位少許以及少量血水劃線于BHI和血平板上，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～8d后經(jīng)純化獲得一株優(yōu)勢細(xì)菌。

3 生理生化鑒定和16S rDNA 序列測定與系統(tǒng)發(fā)育分析

病原菌過氧化氫酶陽性，氧化酶陰性，產(chǎn)生脲酶、還原硝酸鹽、不水解酪蛋白、黃嘌呤、酪氨酸、淀粉和明膠，水解七葉苷，能以檸檬酸鹽為唯一碳源生長，具備了諾卡菌屬細(xì)菌的基本生理生化特征。在生化鑒定的基礎(chǔ)上，對該菌的16S rDNA 基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到1430bp 的擴(kuò)增片段，測序后在國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)進(jìn)行比對，結(jié)果分離菌株與諾卡氏菌Nocardia seriolae同源性最高，為99%。因此，結(jié)合分離菌株形態(tài)、生化特性及16SrDNA鑒定結(jié)果將其鑒定為諾卡氏菌。

4 人工感染

將分離到的菌株注射到健康的加州鱸體內(nèi)，加州鱸在腹腔注射諾卡菌6d 時(shí)即出現(xiàn)死亡，10d內(nèi)感染用魚全部死亡，而對照組無任何癥狀。解剖發(fā)現(xiàn)病魚肝臟腫大，變白灰色，未見明顯白色結(jié)節(jié)，但從肝、脾、腎、肌肉組織中均能分離得到純度一致的細(xì)菌，菌落形態(tài)、菌體形態(tài)及基本生理生化特征與從自然發(fā)病魚體分離的菌株完全一致，說明所分離細(xì)菌即為加州鱸傳染性結(jié)節(jié)病的病原菌。

5 防控

對29種抗菌藥物采用常規(guī)紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，置于28℃培養(yǎng)7d后觀察。結(jié)果表明諾卡氏菌對卡那霉素、四環(huán)素及氟苯尼考高度敏感。根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照說明書用量使用氟苯尼考拌餌投喂，一星期后魚停止死亡，10天后開始吃食，后逐漸恢復(fù)正常。

6 建議

據(jù)以往相關(guān)報(bào)道，諾卡氏菌病對加州鱸的危害較大，導(dǎo)致的死亡率很高。流行季節(jié)恰好在魚類養(yǎng)殖的高峰期，即每年的4-11月份，其中以溫度最高的6-9月份為發(fā)病高峰期，水溫14～30℃時(shí)均可能暴發(fā)，但以25～30℃水溫時(shí)發(fā)病最為嚴(yán)重。另外該病多表現(xiàn)為慢性疾病，起初幾乎沒有明顯的特征，或不易發(fā)現(xiàn)，具備很長的潛伏期，加州鱸從一開始感染到最后出現(xiàn)死亡往往需半個(gè)多月的時(shí)間，而此時(shí)整個(gè)群體感染的數(shù)量已經(jīng)占大多數(shù)。為了更好地防控該疾病，筆者建議從以下幾個(gè)方面采取措施：

①嚴(yán)格控制苗種。選擇好的苗種是養(yǎng)殖成功的關(guān)鍵，所以其來源一定要有保障。首先選擇的應(yīng)該是規(guī)?；⒁?guī)范化及有資質(zhì)的苗種場，購買優(yōu)質(zhì)健壯的苗種用于養(yǎng)殖。

②定期調(diào)節(jié)水質(zhì)。隨著養(yǎng)殖戶對高產(chǎn)量的日益追求，集約化高密度養(yǎng)殖是必然的養(yǎng)殖模式，高密度投餌，淤泥常年的不清理，水體環(huán)境惡化是已經(jīng)普遍的問題，加上水資源短缺，換水已經(jīng)不能解決水質(zhì)問題了。定期使用微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)水質(zhì)就顯得尤為必要了。

③內(nèi)服保肝護(hù)膽藥物。為了提高養(yǎng)殖魚類的生長速度，高強(qiáng)度投餌，魚類肝膽長期滿負(fù)荷運(yùn)轉(zhuǎn)，故內(nèi)服保肝護(hù)膽藥物，保障肝膽健康是必須的。

做到以上三條對防控諾卡氏菌病有積極的作用，同時(shí)也有利于更好地養(yǎng)殖加州鱸，提高經(jīng)濟(jì)效益。

（通聯(lián)：430223，湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)武大園1路8號中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所 電話：17771809619）