□ 徐 晶 哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心 蒲國鋒 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大豆所李環(huán)宇 張立群 哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心

快速檢測試劑盒在糧谷轉(zhuǎn)基因檢測中應(yīng)用

□ 徐 晶 哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心 蒲國鋒 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大豆所
李環(huán)宇 張立群 哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心

隨著轉(zhuǎn)基因作物的快速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品已迅速進(jìn)入到人們的生活中。為了維護(hù)人民群眾的食品安全，很多國家都要求轉(zhuǎn)基因食品中的轉(zhuǎn)基因成分能夠有效被檢測出來，進(jìn)一步對檢測機(jī)構(gòu)提出了嚴(yán)格的要求，完善檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)十分迫切。本文表明，不同品牌的轉(zhuǎn)基因快速檢測試劑盒能夠?qū)D(zhuǎn)基因產(chǎn)品準(zhǔn)確定性，檢測時(shí)間短，工作效率高，能夠滿足檢測工作的需要。

轉(zhuǎn)基因食品；快速檢測試劑盒；快速檢測法

哈爾濱市作為黑龍江省重要的稻谷、玉米、大豆的生產(chǎn)基地，開展糧食作物種子轉(zhuǎn)基因監(jiān)測，對依法禁止種植轉(zhuǎn)基因糧食作物，從源頭上保證食品安全具有重大意義。

目前，國內(nèi)外檢測生物技術(shù)產(chǎn)品最常用的方法是熒光定量檢測方法，方法具有準(zhǔn)確性高、檢出限低、適用范圍廣等特點(diǎn)，但是檢測設(shè)備昂貴，檢測周期長[1]?？焖贆z測試劑盒具有成本低、特異性強(qiáng)、靈敏度高、通用性廣和反應(yīng)速度快的優(yōu)點(diǎn)[2]。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所研制的“Cry1Ab/Cry1Ac快速檢測試紙”在14 min內(nèi)從40份不同水稻和玉米樣品中準(zhǔn)確檢測出全部陽性盲樣樣品，成為第一個(gè)提交檢測結(jié)果并全部正確的參試檢測試紙[3]。

為保證轉(zhuǎn)基因試劑盒檢測準(zhǔn)確率，2017年4月，以中心2016年規(guī)定的“轉(zhuǎn)基因試紙條快速檢測技術(shù)操作規(guī)程”為依據(jù)[4]，進(jìn)行了不同品牌轉(zhuǎn)基因快速檢測試劑盒比對試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 材料及試劑

試驗(yàn)材料分別來自本地不同地區(qū)農(nóng)民種植品種，試紙盒分別為兩個(gè)不同公司產(chǎn)品，分為A組和B組（如下），純凈水、一次性樣品管（2 mL）、一次性膠頭滴管和振蕩培養(yǎng)箱。

A組

BT Cry1Ab/Ac *（檢測植物樣本中是否含有特異性抗蟲轉(zhuǎn)基因BT產(chǎn)物BT Cry1Ab/Ac蛋白）。

CP4 EPSPS *（檢測植物樣本中是否含有特異性抗除草劑轉(zhuǎn)基因CP4 EPSPS蛋白）。

B組

BT Cry1Ab/Ac * Test(檢測植物樣本中是否含有特異性抗蟲轉(zhuǎn)基因BT產(chǎn)物BT Cry1Ab/Ac蛋白）。

CP4 EPSPS * Test（檢測植物樣本中是否含有特異性抗除草劑轉(zhuǎn)基因CP4 EPSPS蛋白）。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)選取含有BT轉(zhuǎn)基因玉米樣品3份（經(jīng)確證），普通玉米樣品28份，大豆樣品10份，水稻樣品8份，打亂順序編號，隨機(jī)檢測，每個(gè)樣品重復(fù)5次。用實(shí)驗(yàn)?zāi)悠贩鬯椋∵m當(dāng)數(shù)量分別裝入2 mL離心管中，加入提取劑（不同品牌提取劑不同），樣品量與提取劑比例為1︰3，振蕩2 min，靜止30 s，將試紙條分別插入離心管中觀察記錄。

2 結(jié)果與討論

快速檢測法應(yīng)用了雙抗體夾心法，將CP4 EPSPS 蛋白特異的抗體，偶連于顯色試劑，并滲入試紙條[5]。當(dāng)試紙條被插入含有CP4 EPSPS 蛋白的植物組織的小量萃取物時(shí)，偶連抗體與蛋白之間就發(fā)生了結(jié)合，與偶連于顯色劑上的某些但不是全部抗體形成夾心物。膜片含有兩個(gè)捕獲區(qū)，一個(gè)捕獲區(qū)捕獲結(jié)合的CP4 EPSPS 蛋白，一個(gè)捕獲區(qū)可捕獲顯色試劑。當(dāng)夾心物和未反應(yīng)的顯色試劑被膜片上的特定區(qū)域捕獲時(shí)，這些捕獲區(qū)就顯現(xiàn)出紅色。若膜片上僅存在一條紅色對照線，便說明受檢樣品為陰性；若存在兩條線，說明受檢樣品為陽性。

2.1 質(zhì)控線和檢測線顯色時(shí)間比較

轉(zhuǎn)基因試劑盒結(jié)果通過質(zhì)控線和檢測線來判定。質(zhì)控線表示試紙條方法使用正確，結(jié)果可控，檢測線判定樣品結(jié)果。

結(jié)果表明，質(zhì)控線在上，檢測線在下。A組和B組兩類產(chǎn)品質(zhì)控線顯色時(shí)間分別為1 min、1.3 min，A組顏色清晰，達(dá)到穩(wěn)定時(shí)間短。檢測線A組和B組顯色時(shí)間分別為2.5 mim和3 min，A組時(shí)間短。

2.2 樣本檢測結(jié)果比較

試驗(yàn)選取49份樣品，結(jié)果表明：兩組產(chǎn)品檢測出2號、8號、23號樣品為陽性，表明含有特異性抗蟲轉(zhuǎn)基因BT產(chǎn)物BT Cry1Ab/Ac蛋白，其他為陰性。檢測結(jié)果與試驗(yàn)設(shè)計(jì)相同，結(jié)果準(zhǔn)確。

2.3 產(chǎn)品性能比較

兩組產(chǎn)品都可以檢測范圍相同，分別為玉米、水稻和大豆等糧食作物的種子和葉片，檢測靈敏度高，檢測過程中要求基本相同。

從產(chǎn)品使用說明書中比較，兩組產(chǎn)品檢測時(shí)對樣品要求相同，兩組產(chǎn)品振蕩提取時(shí)間相同，區(qū)別在于A組產(chǎn)品提取溶液為純凈水，B組產(chǎn)品按照操作說明配制提取溶液。

3 結(jié)論

以上比對結(jié)果表明：兩組產(chǎn)品檢測對環(huán)境要求低，操作步驟簡單，準(zhǔn)確度高，產(chǎn)品檢測速度快，操作簡單，靈敏度更高。比對試驗(yàn)結(jié)果為相關(guān)檢測機(jī)構(gòu)開展轉(zhuǎn)基因成分的快速檢測提供了更多選擇和技術(shù)支撐。

[1]丁耀魁,沈娟,馬黎黎.快速檢測試紙條法在大豆轉(zhuǎn)基因檢測中的應(yīng)用[J].糧油食品科技,2010(2):45-46.

[2]任春華,亢衛(wèi)民,羅惠明,等.測量方法確認(rèn)技術(shù)及其指標(biāo)評價(jià)[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊,2006(8):677-681.

[3]盧利軍,馬書民,李愛軍,等.檢測實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)技術(shù)理論和應(yīng)用[J].現(xiàn)代測量與實(shí)驗(yàn)室管理,2006(3):47-51.

[4]王緒卿.食品化學(xué)檢驗(yàn)方法的確認(rèn)[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2003(2):98-107.

[5]張廣遠(yuǎn),孫紅煒,李凡,等.轉(zhuǎn)基因玉米MIR162轉(zhuǎn)化事件特異性檢測方法及其標(biāo)準(zhǔn)化[J].作物學(xué)報(bào),2013(7):1141-1147.