莊金秋，梅建國，張 穎，姚春陽，李 峰，沈志強

（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

豬戊型肝炎的病原學(xué)特征及檢測技術(shù)研究進展

莊金秋，梅建國，張 穎，姚春陽，李 峰，沈志強

（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

豬戊型肝炎病毒（HEV）感染為國內(nèi)近年來的新發(fā)人畜共患傳染病，在豬群中普遍存在，豬是重要的儲存宿主和傳染源，嚴重危害著人類健康和畜牧業(yè)健康發(fā)展。文章概述了豬戊型肝炎病毒的病原學(xué)特征及檢測技術(shù)研究進展，以期為預(yù)防和控制疾病提供參考。

戊型肝炎病毒；病原學(xué)；檢測；研究進展

戊型肝炎（Hepatitis E,HE）是由肝炎病毒科戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）引起的一種重要的經(jīng)消化道傳播的人畜共患病，臨床上主要表現(xiàn)為急性肝炎。近年來，人感染HEV呈上升趨勢，嚴重危害著人類健康。豬是公認的HEV重要儲存宿主和傳染源，我國作為生豬養(yǎng)殖大國和以豬肉消費為主的國家，為了控制HE的傳播和流行，同時也為了減少HEV對人類的危害和食品公共衛(wèi)生安全，必須從源頭上控制該病原。本文簡要概述了豬HEV的病原學(xué)特征及檢測技術(shù)研究進展，以期為防治該病提供參考。

1 病毒的由來和發(fā)現(xiàn)

Meng等（1997）[1]首次從美國的豬體內(nèi)鑒定出HEV。我國孫中鋒等（2006）[2]將分離到的5個豬源HEV病毒株和3個人源病毒株進行檢測并測序，證實分離到的病毒株均為基因4型，而且同源關(guān)系較高，揭示了HEV存在種群交叉感染的可能。寧海強等（2007）[3]檢測了上海近郊收集的36份樣品，檢測得到5份陽性樣品，陽性率達到13.9%。通過序列分析發(fā)現(xiàn)，上海豬HEV同樣屬于基因4型。陸一涵等（2007）[4]首次在上海豬群中檢測到基因3型HEV。我國研究人員近年來分離到的豬HEV多數(shù)為基因4型，表明我國HEV感染占主導(dǎo)地位的是基因4型。

2 病毒的形態(tài)及分類地位

HEV是單股正鏈RNA病毒，呈球形，直徑32～34 nm，無囊膜，核衣殼呈二十面體立體對稱，基因組長約7.2 kb。HEV只有一個血清型，但具有高度的遺傳多樣性。目前戊型肝炎主要分為4類，分別為A類肝炎（人、豬、野豬、鹿、兔子、駱駝等）、B類肝炎（禽類）、C類肝炎（鼠、大袋貍、亞洲麝香鼩、雪貂）和D類肝炎（蝙蝠）。其中A類戊型肝炎又可以分為7個型：基因1型和2型僅發(fā)現(xiàn)于人類，具有一定的地域性，主要存在于發(fā)展中國家如亞洲、非洲以及美國中部地區(qū)；基因3型和4型宿主范圍廣，人畜均可感染，基因3型分布在美國、日本、法國、荷蘭、澳大利亞、加拿大、阿根廷等發(fā)達國家；基因4型分布在中國、日本、印度和越南；基因5型和6型主要感染野豬；基因7型感染駱駝。在我國HEV感染以基因1型和4型為主，4型多見。豬HEV感染均為基因3型和4型。

3 病毒的流行病學(xué)特點

豬是HEV重要的自然宿主及傳染源。HEV在豬群中普遍存在，以水源性暴發(fā)和急性散發(fā)為特點，主要通過被感染的水和食物經(jīng)糞-口途徑傳播，也可經(jīng)血液、母嬰等途徑傳播，具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義，主要流行于發(fā)展中國家，在發(fā)達國家呈散發(fā)狀態(tài)。HEV可在肝臟和膽汁中蓄積，同時也可以在小腸及大腸內(nèi)增生。豬HEV經(jīng)口侵入機體，從腸道經(jīng)門靜脈感染肝細胞，在肝細胞質(zhì)內(nèi)增生，增生的子代病毒可進入血液出現(xiàn)短暫的病毒血癥，并可分泌進入膽汁中。病毒主要隨膽汁一起經(jīng)糞便排出體外，帶病毒的糞便可再次經(jīng)口引發(fā)新的感染。

4 病毒檢測技術(shù)研究進展

4.1 免疫電鏡（immunoelectron microscopy,IEM）觀察

Balayan等（1983）[5]首次運用免疫電鏡技術(shù)在急性肝炎患者及志愿者的糞便中發(fā)現(xiàn)并證實了HEV的存在。HEV感染潛伏期和急性期患者的糞便和膽汁中存在大量的HEV病毒顆粒，可用IEM進行檢測。但是該方法在實際應(yīng)用中受到一定的限制，原因是HEV通過糞便排毒持續(xù)時間短，加之在消化道時大部分病毒顆粒易被降解，完整的HEV少，所以臨床檢測比較困難。而且免疫電鏡靈敏性較差、重復(fù)性差，又需要特殊的設(shè)備條件和專門的技術(shù)人員，這就使其應(yīng)用受到了較大的限制。

4.2 血清學(xué)檢測技術(shù)

4.2.1 免疫熒光試驗（immunofluorescence assay,IFA）免疫熒光試驗可用于檢測HEV抗原或抗體，臨床常用的有直接法和間接法。Purdy等（1994）[6]應(yīng)用熒光素標(biāo)記的HEV患者的血清，直接法檢測標(biāo)本中HEV抗原。Zhu等（2013）[7]運用IFA對肝臟組織中的HEV抗原進行檢測。李丹丹等（2008）[8]利用抗HEV ORF2蛋白單克隆抗體能阻斷熒光標(biāo)記的抗HEV的抗體與標(biāo)本中的HEV抗原反應(yīng)，建立間接免疫熒光檢測HEV抗體。IFA敏感性高、特異性強，但需取急性期肝組織檢查，且需要熒光顯微鏡，因此不適合HEV的常規(guī)檢測。

4.2.2 血清中和試驗（serum neutralization test,SNT）血清中和試驗不僅可以對病毒的種型鑒定還可以測定血清抗體效價。Meng等（1998）[9]用不同毒株的陽性血清對不同地域的HEV毒株進行中和試驗發(fā)現(xiàn)，HEV只有一個血清型。

4.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunos orbentassay,ELISA） ELISA是目前用于檢測血清中HEV抗體最常用的方法。ELISA方法主要分為固相ELISA法、夾心ELISA法和間接ELISA法等。ELISA包被抗原包括全病毒抗原、合成肽抗原、表達抗原以及重組蛋白抗原。Meng等（1997）[1]利用從SF9細胞中表達出的人HEV（Sar55）ORF2重組蛋白作為ELISA包被抗原使用阻斷ELISA來檢測HEV抗體，檢測出美國中西部豬群的HEV抗體陽性率。Yoo等（2001）[10]利用大腸桿菌表達的重組HEV ORF3蛋白作為包被抗原檢測豬HEV抗體亦獲成功。張可心等（2006）[11]采用巢式RT-PCR技術(shù)擴增HEV結(jié)構(gòu)蛋白基因ORF2部分片段AG02并進行重組表達，以分子量為33 kDa重組蛋白建立了初步的間接ELISA方法。曲娟娟等（2007）[12]采用大腸桿菌表達的HEV ORF2部分蛋白作為包被抗原，建立了間接ELISA方法，并對黑龍江省、吉林省豬場480份豬血清樣品進行檢測，陽性率分別為62%、75%，與商品化試劑盒符合率為98.6%。劉濤等（2009）[13]建立了基因4型HEV重組ORF3蛋白抗原間接ELISA方法，檢測190份豬血清樣品，陽性率為84.7%，為進一步開發(fā)4型HEV抗體檢測試劑盒奠定了基礎(chǔ)。劉啟文等（2010）[14]通過豬HEV ORF3篩選出來的一段序列合成肽建立了間接ELISA方法。聞曉波等（2010）[15]應(yīng)用原核表達的重組蛋白ORF2-C和ORF2-N作為檢測抗原建立ELISA方法。劉艷玲等（2012）[16]用雙抗原夾心ELISA檢測廣西14個市豬群HEV抗體，陽性率高達77.3%。曲立春（2014）[17]采用雙抗原夾心法對黑龍江雞西地區(qū)采集的600份豬血清樣本進行檢測，HEV陽性率為19.33%。唐建華等（2015）[18]利用雙抗原夾心ELISA方法對西藏自治區(qū)拉薩市、墨竹工卡、工布江達及林芝縣等地12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)藏豬1 440份血清進行HEV抗體檢測，結(jié)果12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)藏豬均有HEV抗體，HEV抗體平均陽性率為41.32%，表明HEV普遍存在于拉薩-林芝公路沿線。杜寧（2016）[19]應(yīng)用雙抗原夾心ELISA對采集自攀西地區(qū)豬血清樣品245份進行HEV感染情況調(diào)查，結(jié)果表明該地區(qū)豬群中HEV感染很嚴重。陳宜陽（2016）[20]通過原核表達制備的基因4型豬HEV的ORF2蛋白sORF2-C作為包被抗原，制備和HRP標(biāo)記的抗sORF2-C蛋白的單抗HRP-1E4作為阻斷抗體，建立了豬HEV特異性抗體的阻斷ELISA方法，具有較好的敏感性、特異性和重復(fù)性。我國已利用大腸桿菌表達出HEV結(jié)構(gòu)蛋白作為抗原成功研制了抗HEV IgM和IgG抗體診斷ELISA試劑盒，經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定后，已經(jīng)用于我國HE的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。但ELISA方法由于使用的包被抗原不同所以對恢復(fù)期HEV IgG的檢測結(jié)果不盡相同，從而限制了血清學(xué)檢測結(jié)果的可信性。

4.2.4 蛋白質(zhì)印跡法（western blotting,WB） 蛋白質(zhì)印跡法又稱免疫印跡法，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。李凡等（1995）[21]建立了免疫印跡法檢測抗HEV IgG，結(jié)果表明HEV暴發(fā)點急性肝炎病人血清抗HEV IgG的陽性率高于ELISA，具有良好的靈敏度和特異性。Thiry等（2014）[22]用免疫印跡法對ELISA方法進行評價，發(fā)現(xiàn)免疫印跡法檢測雖然特異性高，但操作過程相對復(fù)雜，耗時較長。

4.2.5 免疫過氧化物酶單層細胞試驗（immunoper oxidase monolayer assay,IPMA） Liang等（2014）[23]用構(gòu)建的pcDNA3.1-ORF3轉(zhuǎn)染真核細胞系HepG2，建立了一種檢測HEV的免疫過氧化物酶單層細胞試驗用于檢測HEV抗體。

4.3 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

4.3.1 RT-PCR技術(shù) PCR可較靈敏地檢出病毒RNA，是最常用的分子生物學(xué)檢測方法。Meng等（1997）[1]率先應(yīng)用套式RT-nPCR檢測到豬HEV。張維誼等（2009）[24]用建立的RT-nPCR方法對127份豬膽汁樣品進行HEV檢測，陽性率為7.09%。Huang等（2002）[25]用RT-PCR方法對美國96份豬糞便進行HEV檢測，陽性率為35%。張瀟等（2005）[26]在132份豬糞便標(biāo)本中檢出13份為HEV陽性，陽性率為9.85%，在160份豬膽汁標(biāo)本中有11份為陽性，陽性率為6.88%。宋騰飛等（2011）[27]建立RT-nPCR方法并對從山東省泰安某屠宰場收集的106份豬膽汁樣品進行了檢測，陽性率為30.2%。張序等（2011）[28]也建立了HEV的RT-nPCR方法，并對江西省部分豬場采集的膽汁及腸容物進行檢測，結(jié)果膽汁中的陽性率為10%，腸容物的陽性率為4%。郝寶成等（2011）[29]也應(yīng)用建立的RT-nPCR對在甘肅省部分地區(qū)采集的255份豬糞便或豬膽汁血清樣品進行了檢測，陽性率為4.71%。許鋒（2011）[30]通過RT-PCR對從河南省鄭州、中牟、新鄭、濟源和濮陽等5個地區(qū)采集的200份糞便樣品進行HEV檢測，HEV陽性率為7.5%。Qiu等（2014）[31]建立了一步法RT-nPCR用于同時檢測甲型肝炎病毒和戊型肝炎病毒。賀微等（2017）[32]應(yīng)用RT-nPCR對廣西南寧周邊豬場采集到的104份新鮮豬糞便進行HEV檢測，結(jié)果表明，廣西豬群中流行的HEV均為基因4型，且以4a亞型為優(yōu)勢流行毒株。

4.3.2 實時熒光定量RT-PCR技術(shù) 熒光定量RT-PCR具有良好的擴增效率、特異性和穩(wěn)定性，且檢測靈敏度比普通RT-PCR高10～100倍。邱蜜蜜等（2010）[33]根據(jù)HEV ORF2保守區(qū)設(shè)計引物及探針，建立了TaqMan探針法熒光定量RT-PCR。張亮權(quán)等（2011）[34]根據(jù)HEV的ORF2保守區(qū)域設(shè)計引物，建立了SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR。張曉峰等（2011）[35]利用所建立的熒光定量PCR對浙江及其周邊的上海、江蘇等地區(qū)的豬場環(huán)境進行了檢測發(fā)現(xiàn)，幾乎所調(diào)查的豬場均存在HEV，感染陽性率高達20.5%。陳小金等（2016）[36]建立了基因3型HEV熒光定量RT-PCR方法。閆蕾等（2016）[37]根據(jù)HEV基因ORF2保守區(qū)設(shè)計引物及探針，建立HEV的TaqMan熒光定量RT-PCR方法。對黑龍江省臨床收集的131份樣品（肝臟45份、糞便86份）進行檢測，總陽性率為11.45%，其中肝臟陽性率為22.22%，糞便陽性率為5.81%。熒光定量PCR為HEV的快速檢出及絕對定量奠定了良好的基礎(chǔ)。

4.3.3 基因芯片技術(shù) 王治偉等（2010）[38]制備HEV檢測基因芯片并進行雜交驗證，結(jié)果表明，HEV檢測基因芯片雜交后得到的探針熒光強度好，信噪比高，RT-PCR驗證后得到的電泳結(jié)果與芯片試驗一致，為實驗室檢測HEV提供了一種快速平行的檢測方法。Wutz等（2013）[39]以固定化的基因1型和3型HEV重組抗原建立了化學(xué)發(fā)光免疫芯片。紀方曉（2016）[40]在建立用于檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV）Nsp7抗體、豬流感病毒（Swine Influenza virus,SIV）HA抗體及HEV ORF2抗體3個液相蛋白芯片單一檢測方法的基礎(chǔ)上，同時建立了檢測 HEV、PRRSV、SIV 3種抗體的多液相蛋白多重檢測方法，為HEV、PRRSV、SIV抗體監(jiān)測提供了一種高通量、重復(fù)性好、特異性高的抗體檢測體系。

4.3.4 高效液相色譜（Size-exclusion HPLC,SEHPLC）技術(shù) 王寧等（2011）[41]采用分子尺寸排阻高效液相色譜（Size-exclusion HPLC,SE-HPLC）法檢測HEV病毒樣顆粒VLP，可對HEV VLP進行定性、定量分析。

4.3.5 RT-PCR-ELISA Seo 等（2012）[42]以 RT-PCR和ELISA為基礎(chǔ)建立了敏感性高、特異性好的RTPCR-ELISA方法用于HEV的檢測。

5 小結(jié)

HEV是新發(fā)的重要人畜共患傳染病之一，分布范圍廣，嚴重危害人類身體健康和畜牧業(yè)健康發(fā)展，在發(fā)達國家的發(fā)病率呈上升趨勢，是發(fā)展中國家的主要公共衛(wèi)生問題之一，HEV準確快速的檢測對該病的防控具有重要意義。豬感染HEV后，很少有明顯的臨床癥狀，這對HE的臨床診斷帶來很大的不便，需要進行實驗室診斷。從首次發(fā)現(xiàn)HEV以來，研究者建立了多種HEV的檢測方法，為HEV的相關(guān)研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)，但這些方法各自存在一定的局限性，而且疾病有效疫苗尚未研制成功，因此HEV的防控還需要研究者的深入研究。相信隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，更加靈敏高效特異的檢測方法很快會被研制出來，使得HEV的檢測手段更加先進，檢驗結(jié)果更加可靠。

[1] Meng X J,Purcell R H,Halbur P G,et al.A novel virus in swine is closely related to the human hepatitis E virus[J] .Proc Natl Acad Sci USA,1997,94(18):9860-9865.

[2] 孫中鋒，金寧一，朱光澤，等.長春地區(qū)人與豬戊型肝炎病毒分子流行病學(xué)及部分基因序列分析 [J] .中國人獸共患病學(xué)報，2006，22（10）：941-945.

[3] 寧海強，李震，于瑞嵩，等.上海地區(qū)豬戊型肝炎病毒部分序列的克隆與分析[J] .西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2007，20（5）：1105-1108.

[4] 陸一涵，鄭英杰，朱建福，等.中國發(fā)現(xiàn)基因3型戊型肝炎病毒[J] .疾病控制雜志，2007，11（1）：5-9.

[5] Balayan M S,Andjaparidze A G,Savinskaya S S,et al.Evi－dence for a virus in non-A,non-B hepatitis transmitted via the fecal-oral route[J] .Int Virol,1983,20(1):2331.

[6] Purdy M A,Cajrson D,Mc Caustland K A,et al.Viral specificity of hepatitis E virus antigens identified by fluorescent antibody assay using recombinant HEV proteins[J] .J Med Virol,1994,44(2):212-214.

[7] Zhu Y M,Yu X M,Zhang Y S,et al.Infectivity of a genotype 4 hepatitis E virus cDNA clone by intrahepatic inoculation of laboratory rats[J] .Vet Microbiol,2013,34:405-411.

[8] 李丹丹，張馨心，趙立平，等.應(yīng)用HEV ORF2蛋白McAb間接免疫熒光法檢測HEV的研究[J] .動物醫(yī)學(xué)進展，2008，29（7）：24-26.

[9] Meng X J,Halbur P G,Shapiro M S,et al.Genetic and experimental evidence for cross-species infection by swine hepatitis E virus[J] .J Virol,1998,72(12):9714-9721.

[10] Yoo D,Willson P,Pei Y,et al.Prevalence of Hepatitis E Virus Antibodies in Canadian Swine Herds and Identification of a Novel Variant of Swine Hepatitis E Virus[J] .Clin Diagn Lab Immunol,2001,8(2):12-13.

[11] 張可心，趙敏，郭巍，等.豬戊型肝炎病毒基因ORF2片段AG02的融合表達及間接ELISA方法的初步建立[J] .中國生物工程雜志，2006，26（8）：37-41.

[12] 曲娟娟，于婧，于敏，等.豬戊型肝炎病毒抗體間接ELISA診斷方法的建立[J] .中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2007，29（10）：802-805.

[13] 劉濤，杜麗，王鳳陽，等.基因Ⅳ型豬戊型肝炎病毒重組ORF3蛋白抗原間接ELISA診斷方法的建立[J] .中國獸醫(yī)科學(xué)，2009，39（4）：310-315.

[14] 劉啟文，李震，趙凱，等.豬戊型肝炎ELISA診斷試劑盒的研制及應(yīng)用[J] .畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2010，41（11）：1435-1441.

[15] 聞曉波，王密，冉旭華，等.豬戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位區(qū)間接ELISA方法的初步建立 [J] .中國畜牧獸醫(yī)，2010，37（5）：99-102.

[16] 劉艷玲，賴莉敏，廖鳳，等.廣西豬牛羊雞戊型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查分析[J] .南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，43（1）：103-106.

[17] 曲立春.雞西地區(qū)戊型肝炎流行病學(xué)研究[J] .畜牧獸醫(yī)科技信息，2014（8）：28-29.

[18] 唐建華，陳曉英，吳金措姆，等.拉林公路沿線藏豬戊型肝炎病毒的血清流行病學(xué)調(diào)查[J] .養(yǎng)豬，2015（5）：102-104.

[19] 杜寧.攀西地區(qū)豬戊型肝炎病毒感染調(diào)查分析 [J] .畜禽業(yè)，2016（7）：74-75.

[20] 陳宜陽.豬戊型肝炎病毒抗體阻斷ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用[D] .楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2016.

[21] 李凡，莊輝，朱永紅，等.抗-HEV免疫吸印法的建立及應(yīng)用[J] .中華肝病學(xué)會肝臟病雜志，1995，3（4）：216-218.

[22] Thiry D,Mauroy A,Saegerman C,et al.Estimation of hepatitis E virus(HEV)pig seroprevalence using ELISA and Western blot and parison between human and pig HEV sequences in Belgium[J] .Vet Microbiol,2014,172(34):407-414.

[23] Liang H,Wang H,Zhang L,et al.Development of a novel immunoperoxidase monolayer assay for detection of swine hepatitis E virus antibodies based on stable cell lines expressing the ORF3 protein[J] .Acta Vet Hung,2014,62(2):243-256.

[24] 張維誼，劉健，鞠厚斌，等.RT-nPCR檢測屠宰場膽汁中豬戊型肝炎病毒[J] .中國獸醫(yī)雜志，2009，45（11）：29-31.

[25] Huang F F,Haqshenas G,Guenette D K,et al.Detection by Reverse Transcription PCR and Genetic Characterization of Field Isolates of Swine Hepatitis E Virus from Pigs in Different Geographic Regions of the United States[J] .Clin Microbiol,2002,40:1326-1332.

[26] 張瀟，鄭英杰，王法弟，等.浙江省某農(nóng)村地區(qū)豬糞便與膽汁中戊型肝炎病毒的檢測和部分序列分析[J] .復(fù)旦大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2005，32（5）：586-589.

[27] 宋騰飛，趙欽，姚永紅，等.山東泰安市豬戊型肝炎病毒的檢測及序列分析[J] .中國動物傳染病學(xué)報，2011，19（3）：23-27.

[28] 張序，羅火亮，張文波，等.豬戊型肝炎病毒RT-nPCR檢測方法的建立及應(yīng)用 [J] .江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，33（1）：107-111.

[29] 郝寶成，蘭喜，胡永浩，等.豬戊型肝炎病毒雙重RT-PCR檢測診斷方法的建立及其應(yīng)用[J] .中國獸醫(yī)雜志，2011，47（5）：35-36.

[30] 許鋒.河南省豬戊型肝炎病毒的分子檢測和全基因組序列分析[D] .保定：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[31] Qiu M M,Meng K Y,Ding Z,et al.Establishment and application of a real-time fluorescence PCR assay for detecting swine hepatitis E virus[J] .Chin J Vet Sci,2010,30(4):449-452.

[32] 賀微，姚靜，覃一峰，等.2015年-2016年度南寧部分地區(qū)豬戊型肝炎病毒基因型分析 [J] .動物醫(yī)學(xué)進展，2017，38（5）：5-10.

[33] 邱蜜蜜，孟軻音，丁壯，等.豬戊型肝炎病毒實時熒光定量PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用 [J] .中國獸醫(yī)學(xué)報，2010，30（4）：449-452.

[34] 張亮權(quán)，歐陽昀，劉志剛，等.檢測豬戊型肝炎病毒的熒光定量 PCR 方法的建立[J] .中國獸醫(yī)雜志，2011，47（10）：16-18.

[35] 張曉峰，帥江冰，李愛云，等.豬戊型肝炎病毒熒光定量PCR檢測方法的建立及其分子流行病學(xué) [J] .中國獸醫(yī)學(xué)報，2011，31（6）：822-827.

[36] 陳小金，董志珍，趙祥平.基因3型豬戊型肝炎病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立 [J] .中國動物檢疫，2016，33（7）：72-77.

[37] 閆蕾，涂亞斌，李海，等.豬戊型肝炎病毒TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立 [J] .中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2016，38（4）：322-325.

[38] 王治偉，馬文麗，夏薇，等.戊型肝炎病毒診斷基因芯片制備的初步研究[J] .廣東藥學(xué)院學(xué)報，2010，26（3）：315-318.

[39] Wutz K,Meyer V K,Wacheck S,et al.New route for fast detection of antibodies against zoonotic pathogens in sera of slaughtered pigs by means of flow-through chemiluminescence immunochips[J] .Anal Chem,2013,85(10):5279-5285.

[40] 紀方曉.PRRSV、SIV、HEV抗體多重液相蛋白芯片檢測方法的建立[D] .廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[41] 王寧，王青波，李靜，等.分子尺寸排阻高效液相色譜法檢測戊型肝炎類病毒顆粒[J] .中國生物制品學(xué)雜志，2011，24（10）：1220-1223.

[42] Seo D J,Tahk H,Lee K B,et al.Detecting hepatitis E virus with a reverse transcription polymerase chain reaction enzymelinked immunosorbent assay[J] .Food Environ Virol,2012,4(1):14-20.

（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)05-0117-04

2017-07-17

山東省重點研發(fā)計劃項目（2015GSF121027）；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊項目（SDAIT-08-17）

莊金秋（1978-），女，山東濰坊人，副研究員，碩士，主要從事細胞培養(yǎng)和動物用病毒疫苗研制.

E-mail：zhuangjinqiu2003@163.com