羅鋁鏗，鄒浩元，姚海榮，鄧秋華

（嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，廣東梅州514015）

客家黃酒延緩皮膚衰老作用的研究

羅鋁鏗，鄒浩元，姚海榮，鄧秋華

（嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，廣東梅州514015）

研究客家黃酒對(duì)D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠皮膚衰老作用的影響。方法：采用腹腔注射D-半乳糖建立亞急性衰老小鼠模型，分別灌胃蒸餾水和不同濃度的黃酒，每天1次，連續(xù)灌胃45 d，測(cè)定小鼠皮膚中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，皮膚含水量，皮膚羥脯氨酸（hydroxyproline，hyp）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量。結(jié)果表明，客家黃酒能顯著提升衰老小鼠皮膚含水量、羥脯氨酸含量并降低MDA含量?？图尹S酒具有延緩皮膚衰老的作用。

客家黃酒；皮膚；羥脯氨酸；含水量

黃酒是我國(guó)特有的酒類品種，具有獨(dú)特的保健功能，目前研究較多的是紹興黃酒。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)紹興黃酒具有較強(qiáng)的抗氧化能力[1]，含有豐富的多酚、黃酮、多糖及小分子肽類，能夠拮抗注射D-半乳糖引起的衰老小鼠體內(nèi)抗氧化能力的降低，延緩衰老[2]，此外黃酒中還含有豐富的γ-氨基丁酸，對(duì)帕金森癥、老年癡呆癥等老年退行性疾病等癥狀具有顯著的改善效果[3]。

客家黃酒，又名月子酒，是我省客家地區(qū)傳統(tǒng)食品，歷史悠久，深受人們喜愛(ài)?？图尹S酒以紅曲、糯米為原料經(jīng)過(guò)發(fā)酵、火炙、陳釀等步驟制成，屬甜型半甜型黃酒，具有獨(dú)特的風(fēng)味和保健功能[4-5]?？图尹S酒與紹興黃酒在成分上既有相似又有不同之處。前期研究發(fā)現(xiàn)，客家黃酒中多酚、黃酮、酚酸含量均高于紹興黃酒，不同品牌客家黃酒對(duì)DPPH自由基、超氧自由基、羥自由基、ABTS自由基均具有清除能力，顯著優(yōu)于紹興黃酒[6]。民間認(rèn)為客家黃酒具有滋補(bǔ)的功效，日常服用則可美容養(yǎng)顏，使肌膚紅潤(rùn)光澤，尤其適合于女性飲用，對(duì)產(chǎn)后及月經(jīng)期后的婦女效果尤佳，但現(xiàn)階段這一說(shuō)法仍未有任何實(shí)驗(yàn)依據(jù)支持。本研究擬建立小鼠D-半乳糖急性衰老模型，研究飲用客家黃酒對(duì)皮膚衰老的影響，為客家黃酒的科學(xué)飲用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：18～20 g雌性昆明種小鼠48只，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。

樣品與試劑：客家黃酒：14%vol，以中國(guó)居民膳食指南中推薦每人每日最大酒精攝入量25 g/50 kg為1倍劑量折算相應(yīng)給藥量，制取相應(yīng)倍數(shù)的客家黃酒濃縮液。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD），試劑盒（批號(hào)：20160402）；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px），試劑盒（批號(hào)：20160402）；羥脯氨酸（hydroxyproline，hyp），試劑盒（批號(hào)：20160402）；丙二醛（malondialdehyde，MDA），試劑盒（批號(hào)：20160402）。以上試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

儀器設(shè)備：721型紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

小鼠隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、客家黃酒低劑量組、客家黃酒高劑量組。模型對(duì)照組及給藥組按500 mg/kg腹腔注射D-半乳糖，空白對(duì)照組注射等體積蒸餾水，連續(xù)注射45 d。同時(shí)客家黃酒低劑量組灌胃2.5倍客家黃酒，高劑量組灌胃5倍客家黃酒，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)灌胃45 d。

末次給藥后禁食12 h，處死小鼠，取頸部皮膚0.2 g，按1∶9加入生理鹽水，冰上勻漿，3000 r/min離心10 min，取上清液待用。試劑盒法測(cè)定皮膚勻漿液中的SOD、GSH-Px活性。取頸部皮膚適量，試劑盒法測(cè)定皮膚中Hyp、MDA含量，烘干法測(cè)定皮膚含水量。

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0進(jìn)行分析比較。表中參數(shù)用X±s表示，差異顯著水平為P＜0.05，差異極顯著水平為P＜0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 客家黃酒對(duì)皮膚含水量的影響

客家黃酒對(duì)皮膚含水量和Hyp含量的影響見(jiàn)表1。由表1可知，和空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組含水量顯著下降。和模型對(duì)照組相比，客家黃酒低劑量組、高劑量組含水量均呈上升趨勢(shì)，其中高劑量組極其顯著上升（p＜0.01）。和空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組Hyp含量顯著下降。和模型對(duì)照組相比，客家黃酒不同劑量組Hyp含量均有上升趨勢(shì)，高劑量組Hyp含量顯著上升。

2.2 客家黃酒對(duì)皮膚SOD和GSH-Px活性的影響

客家黃酒對(duì)皮膚SOD和GSH-Px的影響見(jiàn)表2。從表2可知，和空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組SOD活性呈上升趨勢(shì)。和模型對(duì)照組相比，客家黃酒給藥組各組均有下降趨勢(shì)，其中高劑量組顯著下降（p＜0.05），高、低劑量組呈量效關(guān)系。和空白對(duì)照相比，模型對(duì)照組GSH-Px顯著上升（p＜0.05）。和模型對(duì)照組相比，客家黃酒給藥組各組GSH-Px均顯著下降(p＜0.05)，客家黃酒高、低劑量組呈量效關(guān)系。

2.3 客家黃酒對(duì)皮膚MDA含量的影響

客家黃酒對(duì)皮膚MDA的影響見(jiàn)表3。從表3可知，和空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組MDA含量上升極其顯著。和模型對(duì)照組相比，客家黃酒給藥低劑量組呈下降趨勢(shì)，高劑量組和模型對(duì)照組相比顯著下降（p＜0.05），高、低劑量組呈量效關(guān)系。

3 討論

D-半乳糖在機(jī)體內(nèi)代謝生成醛糖和過(guò)氧化氫，過(guò)量可損傷機(jī)體產(chǎn)生衰老現(xiàn)象[7]。和自然衰老模型相比，D-半乳糖急性衰老模型造模時(shí)間短，皮膚變化指標(biāo)與自然衰老模型相似度極高，是目前美容功效評(píng)價(jià)經(jīng)典的動(dòng)物模型[8]。皮膚含水量和羥脯氨酸含量是目前常用的皮膚衰老檢測(cè)指標(biāo)。

皮膚水分流失會(huì)導(dǎo)致皮膚干燥、萎蔫，缺乏彈性，出現(xiàn)皺紋[9]，表現(xiàn)為皮膚老化，因此皮膚衰老與含水量密切相關(guān)[10]。本研究中，模型對(duì)照組相比空白對(duì)照組含水量顯著下降，表明造模成功。和模型對(duì)照組相比，給藥組均有不同程度的上升，其中客家黃酒高劑量組上升極其顯著，表明飲用客家黃酒具有一定的保水功效。

年齡增長(zhǎng)導(dǎo)致的膠原蛋白流失是皮膚松弛的主要原因。羥脯氨酸是膠原蛋白特有的氨基酸之一，約占膠原蛋白的13%，隨著年齡的增高游離Hyp含量下降[11]。通過(guò)測(cè)定皮膚和血清中Hyp含量變化常作為動(dòng)物衰老的生化指標(biāo)之一[12]。和空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組Hyp含量顯著下降。和模型對(duì)照組相比，給藥組均有不同程度的上升，其中客家黃酒高劑量組含量上升極其顯著（p＜0.01），表明客家黃酒具有抑制衰老引起的Hyp含量下降的作用。

機(jī)體內(nèi)有不同的抗氧化保護(hù)系統(tǒng)，用以清除體內(nèi)的自由基[13]，最主要的有：清除自由基的酶類，如SOD、GSH-Px等，和主要來(lái)源于膳食的外源性抗氧化劑[14-15]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，m模型對(duì)照組MDA顯著上升，而客家黃酒組MDA含量顯著下降，表明客家黃酒具有清除皮膚內(nèi)自由基的作用。模型對(duì)照組SOD、GSH-Px活性相比空白對(duì)照組上升，其中GSH-Px活性上升具有顯著性（p＜0.05），而和模型對(duì)照組相比，給藥組SOD、GSH-Px活性均顯著下降。這可能是由于注射D-半乳糖后小鼠體內(nèi)自由基增多，為清除過(guò)量的自由基，模型對(duì)照組小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了氧化應(yīng)激作用，故SOD、GSH-Px較空白對(duì)照組上升。而客家黃酒中含有抗氧化活性物質(zhì)，屬于來(lái)源于膳食的外源性抗氧化劑，起到了一定的清除自由基的作用，減輕了機(jī)體清除自由基的壓力，故SOD、GSH-Px活性較模型對(duì)照組低,和空白對(duì)照組無(wú)差異。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，客家黃酒中既含有抗氧化活性物質(zhì)又能升高抗氧化酶類的活性，在不同情況下其作用不同。

綜上所述，客家黃酒具有清除皮膚自由基，升高雌激素水平，延緩皮膚衰老的作用，該研究成果將為客家黃酒的科學(xué)飲用和進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

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Anti-aging Effects of Hakka Yellow Rice Wine on Skin

LUO Lvkeng,ZOU Haoyuan,YAO Hairong and DENG Qiuhua
（Medical School,Jiaying College,Meizhou,Guangdong 514015,China）

The anti-aging effects of Hakka yellow rice wine on the skin of subacute aging mice induced by D-galactose were evaluated.Subacute aging mice models were constructed by intraperitoneal injection of D-galactose.Then intragastric administration of distilled water and Hakka yellow rice wine(different alcohol content)respectively once a day for 45 d was performed.Then SOD,GSH-Px,hydroxyproline, MDA,and skin moisture content in mice skin were measured.The results suggested that Hakka yellow rice wine could effectively increase skin moisture content and hydroxyproline content and reduce MDAcontent.Accordingly,Hakka yellow rice wine had anti-aging effects on skin.

Hakka yellow rice wine;skin;hydroxyproline;moisture content

TS262.4；TS261.4；TS261.7

A

1001-9286（2017）03-0121-03

10.13746/j.njkj.2017007

廣東省創(chuàng)新強(qiáng)校工程課題（CXQX055）；全國(guó)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（201510582020）；梅州市產(chǎn)業(yè)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)資金（201411）；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金（B2016062）。

2017-01-10

羅鋁鏗(1987-)，女，講師，碩士，主要研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)與健康產(chǎn)品研發(fā)，E-mail：aalkeng@126.com。