寧雪
摘 要:自從anderson[1]等人首次測(cè)定人類線粒體基因組(mtDNA)以來,以及高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,已經(jīng)有越來越多的物種的線粒體基因組序列被測(cè)得。線粒體基因組的發(fā)現(xiàn)為細(xì)胞信息結(jié)構(gòu)的研究開啟了新的篇章。隨著人們生活水平的提高,越來越多的家庭開始飼養(yǎng)寵物貓,家貓已經(jīng)與我們的生活密切相關(guān)。家貓的線粒體DNA是細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì),蘊(yùn)含了大量的生物信息。本文將對(duì)家貓的線粒體DNA進(jìn)行初步的概述。
關(guān)鍵詞:寵物貓;線粒體DNA;法醫(yī)物證學(xué)
1 家貓的線粒體基因組
1.1 家貓線粒體基因
家貓線粒體全基因組序列長17009bp,GeneBank的序列號(hào)是NC-001700。其線粒體基因組包含13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因、22個(gè)tRNA基因、2個(gè)rRNA基因以及一個(gè)輕鏈復(fù)制起始點(diǎn)和一個(gè)非編碼的控制區(qū)構(gòu)成。并且各個(gè)基因的排列順序以被證實(shí)與已經(jīng)報(bào)道的其他哺乳類動(dòng)物的基因排列順序是一樣的。編碼蛋白質(zhì)的基因開放閱讀框沒有基因重排的現(xiàn)象,也與報(bào)道的相一致。
家貓線粒體基因組的全序列堿基組成中,A、C、T、G分別占了32.5%、26.2%、27.1%以及14.2%。并且A+T約占59.6%,C+G約占40.4%。
1.2 蛋白質(zhì)及密碼子
家貓mtDNA有13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因,總共長11408個(gè)堿基對(duì),占總數(shù)的66.9%,編碼氨基酸3783個(gè)。在這些基因中,只有ND6是由輕鏈編碼的,剩下的都是由重鏈編碼的。但是存在少許重疊現(xiàn)象。
在起始密碼子中,只有ND3是由ATA作為起始密碼子的,剩下的都是由ATG作為起始密碼子。終止密碼子有AGA、TA、單個(gè)堿基T,他們分別作用于Cyt b基因、ND1和ND3基因、ND2、COIII、ND4,剩下的都是以TAA作為終止密碼子的。
1.3 tRNA
家貓線粒體中共有22個(gè)tRNA基因,與其他的典型無脊椎動(dòng)物一樣,基因長度大約為59-73。其二級(jí)結(jié)構(gòu)除缺失DHU以外的二葉草結(jié)構(gòu)以外,剩下的都是典型的三葉草結(jié)構(gòu)。
1.4 控制區(qū)
家貓mtDNA控制區(qū)長度為1560bp,堿基組成中A、C、T、G分別占32.1%、26.8% 、26.3% 、14.7 %。位置位于tRNAPro和tRNAPhe基因之間。家貓mtDNA的控制區(qū)共有294bp的(CA)重復(fù)單元,短片段的重復(fù)序列重復(fù)37次,如5'-ACACACGT-3';重復(fù)序列5-TTGCTAGTCCCCATGAATATTAAGCATGTACAG-3重復(fù)三次;重復(fù)序列5-CACACGTACACACGTACACACGTACACACG -3重復(fù)六次。
2 線粒體基因組特點(diǎn)
線粒體基因組是真核細(xì)胞中較小而又較易純化的復(fù)制單位,基因排列緊密,多種動(dòng)物進(jìn)行廣泛的比較方便可行,是研究DNA結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄的非常好的模型,而且線粒體基因組的分離、重組、復(fù)制和轉(zhuǎn)錄都可應(yīng)用分子生物學(xué)的許多手段和方法進(jìn)行分析。
線粒體基因的表達(dá)與核基因的表達(dá)之間有著密不可分的關(guān)系。線粒體本身具有獨(dú)特的DNA、tRNA、rRNA以及核糖體,但是參與線粒體基因表達(dá)的許多酶卻離不開核基因的參與,其數(shù)量可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過線粒體的數(shù)量,這就意味著線粒體基因的表達(dá)具有其自身獨(dú)特的意義。此外,線粒體基因編碼的產(chǎn)物能與核基因編碼的產(chǎn)物相互作用,這也為互作因子的研究提供了方向[2]。線粒體基因也可以用于多個(gè)層次如法醫(yī)物證學(xué),種群結(jié)構(gòu)以及系統(tǒng)發(fā)生等多方面的研究。線粒體基因組與核基因組的對(duì)比也應(yīng)用于核基因與核外基因的對(duì)比研究中。[3]
3 貓科動(dòng)物mtDNA研究現(xiàn)狀
現(xiàn)存貓科動(dòng)物多起源于晚新生代,廣泛分布于各個(gè)大洲。早期對(duì)于貓科動(dòng)物的研究僅限于形態(tài)學(xué)等方面的研究,如比較形態(tài)學(xué)、比較細(xì)胞學(xué)、性染色體基因等。近期的研究主要集中于線粒體基因的研究。線粒體基因是細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì),具有無重組、穩(wěn)定性高、母系遺傳等優(yōu)點(diǎn)。1996年,Lopez等人首次測(cè)出了家貓的線粒體基因組全序列。家貓線粒體基因組是一個(gè)長約17009bp的環(huán)狀雙鏈DNA分子,包含37個(gè)基因。他們對(duì)線粒體基因的基因組結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)和密碼子、蛋白質(zhì)編碼基因的堿基組成偏向性、蛋白質(zhì)編碼基因的氨基酸組成分析、tRNA和rRNA進(jìn)行了詳細(xì)的描述。家貓線粒體基因組圖譜的構(gòu)建為研究貓科動(dòng)物的物種進(jìn)化和遺傳等開辟了新的研究放向。線粒體DNA的研究方法序列特異寡核苷酸、限制片段長度多態(tài)性、直接測(cè)序等方法。[4]
4 家貓與法庭科學(xué)
任何一個(gè)養(yǎng)寵物的人都會(huì)告訴你,幾乎可以在每一個(gè)日常生活用品表面找到寵物毛發(fā),它們可以在自己每日活動(dòng)中,如梳洗打扮自己、主人愛撫的觸摸或者在簡(jiǎn)單的和衣服或者家具摩擦中都可以掉毛并且毛發(fā)很容易被帶走。一項(xiàng)模擬獸毛轉(zhuǎn)移的犯罪現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查得出結(jié)論,進(jìn)入一個(gè)養(yǎng)家畜的家庭幾乎不可能不被他們的毛發(fā)污染[5]。另一項(xiàng)研究表明織物類型的衣服可以持續(xù)的黏吸大量的毛發(fā)[6]。一般而言,毛發(fā)在粗糙面料的衣物上存留更久,也可以在一個(gè)給定的衣著類商品保持幾小時(shí)或者幾天。這也就意味著,對(duì)于有家貓存在的犯罪現(xiàn)場(chǎng),脫落的貓毛是有極大可能轉(zhuǎn)移到被害人或者犯罪嫌疑人身上的,這就為我們利用動(dòng)物脫落的毛發(fā)進(jìn)行偵查提供了可能。
盡管毛發(fā)是犯罪現(xiàn)場(chǎng)最常見的生物物證之一[7], 寵物毛發(fā)證據(jù),特別是寵物貓的毛發(fā),在法醫(yī)調(diào)查中很少使用。由于在法律上和法醫(yī)學(xué)上缺少足夠的關(guān)于寵物貓毛發(fā)的資料,所以在現(xiàn)場(chǎng)的執(zhí)法人員以此為由無視這一證據(jù)[8]。傳統(tǒng)上的關(guān)于動(dòng)物毛發(fā)的法醫(yī)檢驗(yàn)還局限在形態(tài)學(xué)研究,包括在顯微鏡下肉眼檢驗(yàn)。然而,關(guān)于動(dòng)物個(gè)體的陽性鑒定從來不會(huì)通過形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)來獲得,僅僅極少數(shù)寵物貓或者狗可以通過此種方法達(dá)到絕對(duì)的排除[9]。與定量測(cè)定一樣,由于有效的差異化,來自同一個(gè)體的不同毛發(fā)存在太多的變化,更不必說不同的個(gè)體間?;贒NA測(cè)試的進(jìn)步,收集到的與犯罪現(xiàn)場(chǎng)有關(guān)系的動(dòng)物毛發(fā)的證據(jù)價(jià)值越來越重要。利用線粒體基因的分析對(duì)其進(jìn)行種屬鑒定甚至是個(gè)體識(shí)別也成為可能,這也將為以后案件的偵查提供新的思路和方向。
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