張克傳

266041山東省青島市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法檢測弓形蟲IgG抗體的對比研究

張克傳

266041山東省青島市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

目的：探討金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法檢測弓形蟲IgG抗體的價(jià)值。方法：利用金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法平行檢測12只實(shí)驗(yàn)感染弓形蟲家兔的血清，作為觀察組；對12只正常的、未感染弓形蟲的家兔進(jìn)行血清平行檢測，作為對照組。結(jié)果：金標(biāo)法、間接血凝法的特異性、敏感性、檢測效率以及綜合評分均明顯高于酶聯(lián)免疫法(P＜0.05)。結(jié)論：金標(biāo)法、間接血凝法更加適用于實(shí)驗(yàn)動物家兔弓形蟲IgG抗體檢測，金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法3種方法在平行檢測中缺乏一致性。

金標(biāo)法；間接血凝法；酶聯(lián)免疫法；弓形蟲IgG抗體

弓形蟲是寄生于貓科動物腸道的一種寄生蟲，同時，人體腦、心臟、眼、肺、淋巴結(jié)等組織也是弓形蟲的寄生場所。弓形蟲是一種機(jī)會致病原蟲，寄生宿主免疫功能低下時，便可能導(dǎo)致嚴(yán)重后果。全世界范圍內(nèi)，弓形蟲廣泛分布，其中西方發(fā)達(dá)國家和地區(qū)弓形蟲的感染率比較高，國外相關(guān)報(bào)道稱，人群弓形蟲平均感染率25%～50%。近年來，我國人群感染弓形蟲病原體的比例越來越大，弓形蟲病原體感染會引起人畜共患病，因此，探究有效的檢測方式是十分有必要的。目前常用的檢測方法有金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法。本次調(diào)查研究旨在探究這些方法檢測弓形蟲IgG抗體的臨床價(jià)值，為防治工作提供一定的參考，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

陽性血清(家兔血清呈陽性)：12只實(shí)驗(yàn)感染弓形蟲病原體家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法對這已經(jīng)確診的12只感染家兔血清進(jìn)行陽性標(biāo)記。

陰性血清(家兔血清呈陰性)：12只正常健康家兔血清(由上海市疾控中心提供)，并且要用染色方法對這已經(jīng)確診的12只健康家兔血清進(jìn)行陰性標(biāo)記。

試劑的選用：本次調(diào)查研究所采用的所有試劑均由珠海海泰生物有限公司提供，其生產(chǎn)批號及主要成分為：①顯色液 A，720130867；②顯色液 B，730140847；③酶標(biāo)記物，20131007；④樣品稀釋液，72014064；⑤終止液，740131215； ⑥ 濃 縮 洗 滌 液 ，772540263；⑦陰性對照，20131108；陽性對照，20131108；臨界對照，20131108。

儀器：恒溫培養(yǎng)箱(Thermo815)、微型振蕩器、酶標(biāo)儀(SPECTRAmax340pc)、各種刻度的微量移液器有機(jī)玻璃板(12×8 孔1100V)等。

檢測方法：間接血凝法：①配置診斷液：嚴(yán)格按照標(biāo)示的毫升數(shù)在試劑中添加無菌蒸餾水，并且稀釋搖勻，離心10 min，將清液棄除，加上等量的稀釋液，放置在4℃下靜置24 h。②添加稀釋液：每個樣品都需要增加3孔稀釋液，均設(shè)置陰性血清、陽性血清、空白進(jìn)行對照，陽性和陰性血清添加8孔稀釋液。③加待測血清。④稀釋：已經(jīng)定性的檢測稀釋需要到達(dá)第3孔，對照組家兔血清需要到達(dá)第7孔。⑤添加診斷液：添加完成之后，要將反應(yīng)板放置于微量振蕩器，并且振蕩1～2 min。⑥判定檢測結(jié)果：陽性血清表示為“+”，陰性血清表示為“-”。金標(biāo)法的操作步驟與間接血凝法相似。

酶聯(lián)免疫法：①配制洗滌液：用去離子水對濃縮洗滌液進(jìn)行10倍稀釋。②稀釋樣品：稀釋比例1:100，并且液體要充分搖勻。③加樣反應(yīng)：將加板條固定在板架上，其他板條均密封安置在密封袋中保存。④加酶反應(yīng)：將孔中的液體甩凈，洗板3次。⑤顯色反應(yīng)。⑥反應(yīng)終止：酶標(biāo)儀結(jié)果顯示450 nm為終止反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)。⑦判斷檢測結(jié)果：陽性血清表示為“+”，陰性血清表示為“-”。

結(jié)果

金標(biāo)法、間接血凝法的特異性93.33%、敏感性47.58%、檢測效率100%以及綜合評分(總符合率86.75%)均明顯高于酶聯(lián)免疫法的血凝法的特異性81.25%、敏感性35.42%、檢測效率91.00%以及綜合評分(總符合率71.89%)。

金標(biāo)法、間接血凝法的陽性檢出率分別為75%(9/12)和83.33%(10/12)，陰性檢出率分別為 25%(3/12)和16.67%(2/12)；酶聯(lián)免疫法陽性檢出率為 58.33%(7/12)，陰性檢出率為41.67%(5/12)。

討論

本次調(diào)查研究的結(jié)果顯示，金標(biāo)法、間接血凝法的特異性93.33%、敏感性47.58%、檢測效率100%以及綜合評分(總符合率86.75%)均明顯高于酶聯(lián)免疫法的血凝法的特異性81.25%、敏感性35.42%、檢測效率91.00%以及綜合評分(總符合率71.89%)。這充分地證實(shí)了金標(biāo)法、間接血凝法檢測的高效性、安全性。國外相關(guān)報(bào)道稱，人群弓形蟲平均感染率25%～50%，因此，應(yīng)積極推廣應(yīng)用金標(biāo)法、間接血凝法檢測弓形蟲IgG抗體，能夠有效防治危害的發(fā)生，從而降低感染率。

金標(biāo)法、間接血凝法檢測弓形蟲IgG抗體旨在控制血清性質(zhì)，提高陽性檢出率，通過配置診斷液、添加稀釋液、加待測血清、稀釋、添加診斷液、判定檢測結(jié)果這樣嚴(yán)格操作的步驟，來檢測血清陽性、血清陰性，達(dá)到判斷病情的目的。

綜上所述，金標(biāo)法、間接血凝法更加適用于實(shí)驗(yàn)動物家兔弓形蟲IgG抗體檢測，金標(biāo)法、間接血凝法與酶聯(lián)免疫法3種方法在平行檢測中，缺乏一致性。但是我們不能忽略酶聯(lián)免疫法檢測弓形蟲IgG抗體的臨床價(jià)值，3種方法的檢測價(jià)值還需要時間的檢驗(yàn)。

[1]辛連芳,宋任浩.金標(biāo)法與間接血凝法檢測獻(xiàn)血者弓形蟲IgG抗體符合性評價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,28(2):129-131.

[2]楊亞曉,陳玉昆,魏世錦,等.3種方法檢測弓形蟲IgG抗體的效能[J].中國血吸蟲病防治雜志,2014,17(1):109-110.

[3]Xu Xia,Xie Jin,Chen Baiming,et al.The establishment and application of IgG antibody in serum Toxoplasma gondii[J].Journal of Guangzhou Medical College,2001,29(1): 26-27.

[4]Xu Xia,Xie Jin,Chen Baiming,et al.Study on the detection of Toxoplasma gondii IgG antibody by[J].Journal of Guangzhou Medical College,2000,13(1):135-136.

[5]劉帥,崔麗麗,王貝貝,等.幾種弓形蟲IgG抗體檢測方法的比較分析[C].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會 2011學(xué)術(shù)年會論文集,2011(12): 432-433.

廣東二類疫苗全面集中采購

2017年1月10日，廣東省第二類疫苗集中采購系統(tǒng)上線運(yùn)行，共涉及71個品規(guī)，43家生產(chǎn)企業(yè)，標(biāo)志著廣東省已全面實(shí)施第二類疫苗省級平臺集中采購。據(jù)悉，廣東省衛(wèi)生計(jì)生委將聯(lián)合有關(guān)部門進(jìn)一步加強(qiáng)對第二類疫苗采購、儲運(yùn)、供應(yīng)和使用工作的監(jiān)督管理，規(guī)范冷鏈配送和溫度監(jiān)測，全面加強(qiáng)預(yù)防接種工作規(guī)范管理，確保第二類疫苗集中采購及接種工作安全有序。

(據(jù)www.news.cn)

Comparative study of gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody

Zhang Kechuan
Department of Clinical Laboratory,the Third people's Hospital of Qingdao City,Shandong Province 266041

Objective:To explore the value of gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody.Methods:We used the gold standard method,indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay to detect the serum of 12 experimental rabbits infected with toxoplasma gondii,as the observation group,and we detected the serum of 12 normal rabbits without infection of toxoplasma gondii, as the control group.Results:The specificity,sensitivity,detection efficiency and comprehensive score of the gold standard method, indirect blood coagulation method were significantly higher than those of the enzyme linked immunosorbent assay(P＜0.05). Conclusion:Gold standard method and indirect blood coagulation method were more suitable for the detection of toxoplasma gondii IgG antibody in experimental animals,and there have the lack of consistency among the 3 methods of gold standard method, indirect blood coagulation method and enzyme linked immunosorbent assay.

Gold standard method;Indirect blood coagulation method;Enzyme linked immunosorbent assay;Toxoplasma gondii IgG antibody

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.1.1