韓 偉，關(guān) 宏

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科(呼和浩特010050)

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冠狀動脈痙攣患者自主神經(jīng)功能相關(guān)基因多態(tài)性研究

韓 偉，關(guān) 宏

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科(呼和浩特010050)

目的：探討冠狀動脈痙攣(CAS)患者在雙重特異性A型激酶錨定蛋白2功能多態(tài)性[AKAP10 (A/G) I646V)]的基因型分布情況與自主神經(jīng)功能的關(guān)系。方法：研究組選擇冠脈造影證實的CAS患者58例，對照組選擇冠脈造影陰性患者58例，采用心率變異性時域指標(biāo)評價自主神經(jīng)功能，比較兩組患者AKAP10的基因分布情況及心率變異性指標(biāo)的異同。結(jié)果：CAS組患者平均心率高于對照組(P<0.05)；CAS組時域指標(biāo)SDNN、SDANN、RMSSD、PNN50均明顯低于對照組(P<0.05)；CAS組AA、AG、GG基因型頻率分別為31.0%、39.7%、29.3%，對照組則為53.4%、32.8%、13.8%。CAS組A、G等位基因的頻率分別為54%、46%，對照組A、G等位基因的頻率分別為70%、30%，兩組患者基因型及等位基因頻率分布均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論：AKAP10基因多態(tài)性可能通過影響自主神經(jīng)的功能而成為影響CAS的發(fā)生。

冠狀動脈痙攣(Coronary artery spasm，CAS)可引起變異性心絞痛，雙重特異性A型激酶錨定蛋白2功能多態(tài)性[A kinase-anchoring protein 2 functional polymorphism，AKAP10 (A/G) I646V]影響心臟的自主神經(jīng)功能[1]。本研究探討CAS患者在雙重特異性A型激酶錨定蛋白2功能多態(tài)性[AKAP10 (A/G) I646V)]的基因型分布情況與自主神經(jīng)功能的關(guān)系。

資料與方法

1 一般資料 選取2013年3月至2015年5月我院經(jīng)冠脈造影證實的CAS患者58例，對照組為冠脈造影陰性患者58例。所有患者均知情同意，并簽署書面知情同意書。其中CAS組男37例，占63.8%；平均年齡(58.5±19.5)歲，吸煙25例，占43.1%；高血壓21例，占36.2%；糖尿病13例，占22.4%。生化指標(biāo)檢查：總膽固醇膽固醇(5.15±0.98)mmol/L，低密度脂蛋白膽固醇(2.85±0.66)mmol/L，高密度脂蛋白膽固醇(1.01±0.51)mmol/L，甘油三酯(1.18±0.78)mmol/L，空腹血糖(5.32±0.88)mmol/L，血肌酐(96.6±27.7)μmol/L，同型半胱氨酸(11.5±1.55)μmol/L，高敏C反應(yīng)蛋白(0.94±0.43)mg/L；對照組男35例，占62.1%；平均年齡(56.6±17.7)歲，吸煙26例，占44.8%；高血壓20例，占34.5%；糖尿病13例，占22.4%。生化指標(biāo)檢查：總膽固醇膽固醇(4.99±0.94)mmol/L，低密度脂蛋白膽固醇(2.90±0.69)mmol/L，高密度脂蛋白膽固醇(0.95±0.48)mmol/L，甘油三酯(1.22±0.80)mmol/L，空腹血糖(5.19±1.04)mmol/L，血肌酐(100.3±30.2)μmol/L，同型半胱氨酸(12.3±1.26)μmol/L，高敏C反應(yīng)蛋白(0.99±0.51)mg/L。兩組患者基線情況經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

2 研究方法

2.1 24h動態(tài)心電圖檢查:指標(biāo)包括：正常竇性RR間期總體標(biāo)準(zhǔn)差(Standard deviation of normal-to-normal RR intervals，SDNN)，24h 每 5min竇性R-R間期平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(Standard deviation of average NN intervals，SDANN)；24 h正常相鄰竇性R-R間期差值的均方根(Root of mean squared differences，RMSSD)，正常連續(xù)竇性RR間期超過50ms的NN間期所占百分?jǐn)?shù)(Percentage of differences between adjacent NN intervals that are greater than 50 milliseconds , PNN50)[2]。

2.2 DNA提?。篍DTA試管收集治療前空腹12h外周靜脈血10ml，分離白細(xì)胞應(yīng)用改良的碘化鈉法提取基因組 DNA[3]，-20℃保存用于基因型分析。

2.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction)擴增及序列分：PCR擴增AKAP10單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)rs205462基因的相應(yīng)片段，正向引物: 5′-TATTTTCTTTAGGCCCAGGAAG-3′，反向引物:5′-GTAATCCCCACAGCAGTTAATC-3′。每個25 L的PCR反應(yīng)均包括5ng模板DNA，10×buffer，1 mmol/L dNTPs, Taq plus酶和12.5 μmol/L正向和反向引物各0.5μ L。PCR反應(yīng)條件為初始變性94℃3min；變性94℃30 s，退火30 s，延伸68℃ 1 min，30個循環(huán)；72℃，延伸7 min，雙向測序。

結(jié) 果

1 兩組患者心率變異性(Heart rate viability，HRV)指標(biāo)比較 見表1。CAS組患者平均心率高于對照組(P<0.05)。CAS組時域指標(biāo)SDNN、SDANN、RMSSD、PNN50均明顯低于對照組P<0.05)，說明CAS組患者HRV降低。

表1 兩組患者心率變異性指標(biāo)結(jié)果對比±s)

注：CAS，冠狀動脈痙攣，SDNN，正常竇性RR間期總體標(biāo)準(zhǔn)差；SDANN，24h 每 5min竇性R-R間期平均值的標(biāo)準(zhǔn)差；RMSSD ，24h正常相鄰竇性R-R間期差值的均方根；PNN50，正常連續(xù)竇性RR間期超過50ms的NN間期所占百分?jǐn)?shù)

2 CAS組及對照組基因型及等位基因頻率分布 CAS組AA、AG、GG基因型頻率分別為31.0%、39.7%、29.3%，對照組則為53.4%、32.8%、13.8%。CAS組A、G等位基因的頻率分別為54%、46%，對照組A、G等位基因的頻率分別為70%、30%，兩組患者基因型及等位基因頻率分布均存在差異(P<0.01)。

3 基因多態(tài)性及心血管危險因素與冠狀動脈痙攣關(guān)系的回歸分析 見表2。經(jīng)多變量模型的二元Logistic 回歸分析，年齡、性別、低密度脂蛋白膽固醇水平、高血壓、糖尿病等心血管危險因素及自主神經(jīng)相關(guān)基因多態(tài)性位點AA、AG、GG基因型與冠狀動脈痙攣間無關(guān)聯(lián)，而吸煙與體重指數(shù)為冠狀動脈痙攣的獨立危險因素(P<0.01)。

表2 基因多態(tài)性及心血管危險因素與冠狀動脈 痙攣關(guān)系的回歸分析

討 論

CAS的發(fā)病機制仍不清楚。目前認(rèn)為CAS的發(fā)生與自主神經(jīng)張力失衡有關(guān)。研究表明：副交感神經(jīng)和交感神經(jīng)張力的增高均可引起CAS[2]。CAS夜間多發(fā)與迷走神經(jīng)張力增高有關(guān)。另外，乙酰膽堿可以誘發(fā)CAS，說明迷走活動是CAS的促發(fā)機制之一。然而，CAS發(fā)生自發(fā)心肌缺血前常伴有迷走活動的減退而非增強，冠狀動脈內(nèi)兒茶酚胺水平增高。β受體阻斷劑的心血管效應(yīng)及對CAS的影響會因為藥理活動方式的不同而有所差異。

SDNN主要反映交感及迷走神經(jīng)張力大小，是臨床上常用來評價自主神經(jīng)功能受損與恢復(fù)的總體指標(biāo)；RMSSD及PNN50則是反映HRV的快變化即副交感神經(jīng)張力敏感指標(biāo)；SDANN則反映HRV的慢變化即交感神經(jīng)張力大小。既往研究表明：各型冠心病患者的HRV均下降。冠心病患者的HRV下降可能是因為心肌缺血缺氧對心室壁機械化學(xué)感受器的刺激作用，改變了心臟自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的均衡性，導(dǎo)致自主神經(jīng)對心臟的調(diào)節(jié)作用減弱[3]。本研究發(fā)現(xiàn)CAS患者自主神經(jīng)調(diào)節(jié)功能失衡。

AKAP10基因的I646V變異可能改變了人類竇房結(jié)心臟起搏細(xì)胞對交感-迷走神經(jīng)相互調(diào)節(jié)的敏感性，從而導(dǎo)致心律失常發(fā)生甚至心源性猝死[4]。本研究發(fā)現(xiàn)：CAS患者攜帶AKAP10基因G等位基因的比例明顯高于對照組，因此AKAP10基因多態(tài)性可能通過影響自主神經(jīng)的功能成為CAS發(fā)生的基礎(chǔ)，CAS組患者心率明顯高于對照組，HRV時域指標(biāo)均低于對照組，因此自主神經(jīng)功能失調(diào)與CAS之間存在聯(lián)系。回歸分析結(jié)果顯示：環(huán)境因素如吸煙和體重指數(shù)是影響冠狀動脈痙攣發(fā)病的獨立危險因素，而基因多態(tài)性則未被證實與冠狀動脈痙攣有密切關(guān)聯(lián)。這一研究結(jié)果可能與該基因的遺傳易感作用被環(huán)境因素的影響削弱所致。故而，積極干預(yù)各種環(huán)境危險因素是防治冠狀動脈痙攣的關(guān)鍵。

[1] Neumann SA,Tingley WG, Conklin BR,etal. AKAP10 (I646V) functional polymorphism predicts heart rate and heart rate variability in apparently healthy, middle-aged European-Americans[J]. Psychophysiology, 2009, 46(3): 466-472.

[2] Poddar MG, Kumar V, Sharma YP. Automated diagnosis of coronary artery diseased patients by heart rate variability analysis using linear and non-linear methods [J]. J Med Eng Technol, 2015, 39(6):331-341.

[3] 王聰霞，張 巖，張春艷，等. D-二聚體和纖維蛋白原在冠心病早期病情評估中的臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2016, 45(3): 287-290.

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(收稿：2016-05-09)

冠狀血管痙攣/病因?qū)W 自主神經(jīng)系統(tǒng) @基因多態(tài)性

R543.3

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10.3969/j.issn.1000-7377.2017.01.019