應(yīng) 瑜，王銀雪，王愛嬌

(1.永康市婦幼保健院婦科；2.病理科，浙江 永康321300)

新輔助化療局部晚期宮頸癌前后Ki-67、P-gp表達(dá)水平及臨床意義

應(yīng) 瑜1，王銀雪1，王愛嬌2

(1.永康市婦幼保健院婦科；2.病理科，浙江 永康321300)

目的 探究Ki-67核抗原(Ki-67)、P-糖蛋白(P-gp)在宮頸癌新輔助化療前后的的變化，分析其與化療療效及敏感性之間的相關(guān)性，為新輔助化療的敏感性指標(biāo)的確定提供理論基礎(chǔ)。方法 隨機(jī)挑選來永康市婦幼保健院行宮頸癌新輔助化療的Ⅰb2～Ⅱb期宮頸癌患者50例，采用免疫組化的方法檢測(cè)化療前后宮頸組織中Ki-67、P-gp的表達(dá)，計(jì)算并分析其表達(dá)變化及與化療效果和敏感性之間的相關(guān)性。結(jié)果 宮頸癌新輔助化療的總體有效率為86%，穩(wěn)定的有7例，無患者表現(xiàn)為進(jìn)展；Ki-67化療前的陽性表達(dá)率為90.00%，顯著高于化療后的65.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.67，P<0.05)，P-gp化療前陽性表達(dá)率為56.00%，化療后為85.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.98，P<0.05)；化療前Ki-67陽性的患者化療有效率為91.11%，顯著高于Ki-67陰性的化療有效率(χ2=9.67，P<0.05)，而化療前P-gp陽性的患者化療有效率為39.29%，P-gp陰性的有效率100.00%，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.85，P<0.05)。Ki-67和P-gp的炎性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=0.5872，P<0.05)。結(jié)論 宮頸癌新輔助化療后與化療前相比Ki-67陽性表達(dá)率降低，P-gp陽性表達(dá)率升高，可為臨床治療提供依據(jù)。

局部晚期宮頸癌；宮頸癌新輔助化療；Ki-67；P-gp；相關(guān)性

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高，且呈上升趨勢(shì)，并且發(fā)病年齡逐漸年輕化，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量及生命時(shí)長(zhǎng)[1]。宮頸癌新輔助化療(neoadjuvant chemotherapy，NACT)是近幾年新提倡的一種治療方法，即在術(shù)前先行化療，使腫瘤部分消退[2]。以往臨床上都是通過影像學(xué)的方法來評(píng)估腫瘤的消退情況，但容易產(chǎn)生誤診和不精確，而分子生物學(xué)因其獨(dú)特的分子水平檢測(cè)手段，及檢查方法的精確性，故可顯提高診斷的精確性[3]。故本研究擬比較分析局部晚期宮頸癌患者化療前后的宮頸組織中Ki-67核抗原(Ki-67)、P-糖蛋白(P-gp)的表達(dá)，來探討其與化療效果和敏感性之間的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)挑選來永康市婦幼保健院婦科行宮頸癌新輔助化療的Ⅰb2～Ⅱb期宮頸癌患者50例，年齡在30～72歲之間，平均年齡為(46.28±12.67)歲，按照國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(The International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰb2期28例，Ⅱa期15例，Ⅱb期7例。其中病理類型鱗癌40例、腺癌10例；組織學(xué)分化高、中分化39例，低分化11例。在化療前及手術(shù)后分別取宮頸癌組織標(biāo)本共50對(duì)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合局部晚期宮頸癌的診斷；②未經(jīng)任何治療者；③知情并同意本研究的治療方法。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有身體其他婦科疾病者；②伴有其他器官不組織腫瘤者；③患有嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病或器質(zhì)性疾病者。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

所有患者在入院前均未經(jīng)任何治療，入院后行常規(guī)檢查，如血常規(guī)、B超、?？茩z查等，并向患者說明此次試驗(yàn)的治療目的和治療流程及優(yōu)勢(shì)等。排除化療禁忌癥后，根據(jù)患者個(gè)人情況行1～2個(gè)療程的化療(順鉑75至100mg/m2+紫杉醇135至175mg/m2)?；熃Y(jié)束后通過影像學(xué)手段查看患者病灶是否有縮小情況，及腫瘤浸潤(rùn)情況評(píng)估近期療效，并在此基礎(chǔ)上決定手術(shù)治療的時(shí)間及是否需放療等。

1.4療效觀察指標(biāo)

根據(jù)婦科檢查及B超觀察和測(cè)量子宮頸病灶大小的變化來判斷臨床療效，依照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(information regarding response evaluation criteria in solid tumors，RECIST)分為[4]：①完全緩解(complete remission，CR)：肉眼可見癌灶完全消失；②部分緩解(part remission，PR)：腫瘤基線病灶最長(zhǎng)徑總和縮小≥30%；③穩(wěn)定(stable disease，SD)：腫瘤基線病灶長(zhǎng)徑總和有縮小但未達(dá)PR或有增加但未達(dá)PD；④進(jìn)展(progressive disease，PD)：腫瘤基線病灶最長(zhǎng)徑總和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶。臨床有效=CR+PR；臨床無效=SD+PD。

1.5標(biāo)本的免疫染色步驟及判斷標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)本取出后立即用福爾馬林浸泡后行石蠟包埋，并切片、烤片、風(fēng)干待行染色。嚴(yán)格按照民免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)行染色，所有試劑均購(gòu)于福州邁新生物科技開發(fā)有限公司。將染色好的切片置于高倍鏡下觀察，隨機(jī)取10個(gè)視野，計(jì)算Ki-67、P-gp的陽性率。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞<10%視為陰性，10%～25%為(+)，25%～75%為(++)，>75%為(+++)，(+～+++)均視為陽性。免疫組化染色結(jié)果均由主治以上級(jí)別的醫(yī)師進(jìn)行分析判斷得出。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1行輔助化療后的臨床療效及Ki-67、P-糖蛋白的表達(dá)

50例患者在接受1～2個(gè)療程的輔助化療后，共有43例患者治療有效，化療總有效率為86.00%(43/50)，其中8例患者完全緩解(16.00%)，35例患者部分緩解(70.00%)。同時(shí)臨床表現(xiàn)為穩(wěn)定的有7例(14.00%)，無患者表現(xiàn)為進(jìn)展，故50例患者全都可以進(jìn)行后續(xù)的宮頸癌根治術(shù)。

患者行新輔助化療前后Ki-67、P-糖蛋白的陽性表達(dá)見圖1、圖2、圖3、圖4。

圖1 Ki-67化療前在宮頸癌中的表達(dá)(40×10)

Fig.1 Ki-67 expression in cervical cancer before chemotherapy(40×10)

圖2 Ki-67化療后在宮頸癌中的表達(dá)(40×10)

Fig.2 Ki-67 expression in cervical cancer after chemotherapy(40×10)

圖3 P-gp化療前在宮頸癌中的表達(dá)(40×10)

Fig.3 P-gp expression in cervical cancer before chemotherapy(40×10)

圖4 P-gp化療后在宮頸癌中的表達(dá)(40×10)

Fig.4 P-gp expression in cervical cancer after chemotherapy(40×10)

2.2行新輔助化療前后Ki-67核抗原、P-糖蛋白的陽性表達(dá)率變化

Ki-67化療前在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為90.00%，化療后顯著降低到65.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.67，P<0.05)，而P-gp在化療前的陽性表達(dá)率為56.00%，化療后升高至85.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.98，P<0.05)，見表1。

表1 行新輔助化療前后Ki-67、P-gp的陽性表達(dá)率比較

Table 1 Comparison of positive expression rate of Ki-67 and P-gp before and after neoadjuvant chemotherapy

項(xiàng)目例數(shù)(n)Ki?67(%)P?gp(%)化療前5090．0056．00化療后5065．0085．00χ223．6721．98P<0．05<0．05

2.3 Ki-67核抗原、P-糖蛋白的表達(dá)與新輔助化療療效的關(guān)系

化療前Ki-67陽性的患者化療有效率為91.11%，Ki-67陰性的患者化療有效率為40.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.67，P<0.05)；而化療前P-gp陽性的患者化療有效率為39.29%，而陰性的為100.00%，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.85，P<0.05)，見表2。

表2 患者Ki-67、P-gp的表達(dá)與新輔助化療療效的關(guān)系

Table 2 Correlation of Ki-67 and P-gp expressions with neoadjuvant chemotherapy efficacy

2.4 Ki-67核抗原和 P-糖蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

Ki-67在化療前的陽性表達(dá)率為90.00%，P-gp的陽性表達(dá)率為56.00%，而在化療后，Ki-67的陽性表達(dá)率為65.00%，P-gp的陽性表達(dá)率為85.00%，經(jīng)計(jì)算得出，Ki-67和P-gp的炎性表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.5872，P<0.05)。

3討論

3.1宮頸癌新輔助化療的應(yīng)用

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率都居于前位，對(duì)于惡性程度較低及中晚期的患者早期行根治性子宮切除術(shù)及放射治療一般能取得較好的療效，可延長(zhǎng)患者生命及提高生活質(zhì)量，但對(duì)于體積巨大或局部晚期患者的最佳治療一直還處于探索階段。近年來新發(fā)現(xiàn)的新輔助化療技術(shù)取得了較好的療效，即在術(shù)前給予合適的化療，使得腫瘤體積減小，分期降低，再行手術(shù)切除，可顯著提高手術(shù)質(zhì)量和術(shù)后療效。

3.2 Ki-67核抗原及P-糖蛋白在宮頸癌新輔助化療中的表達(dá)及意義

Ki-67核抗原(Ki-67 nuclear antigen，Ki-67)是一種非蛋白性核蛋白，常存在于增殖細(xì)胞內(nèi)，參與了細(xì)胞周期的調(diào)控以及血管的生成，與細(xì)胞有絲分裂中具有重要作用，在細(xì)胞分裂的G2和M期表達(dá)最強(qiáng)，通過對(duì)Ki-67表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，可用于反應(yīng)腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)。而P-gp是由耐藥基因所表達(dá)的糖蛋白，它具有將藥物或其他化學(xué)物質(zhì)泵出細(xì)胞的功能，從其生理功能上來講，它具有較強(qiáng)的機(jī)體保護(hù)作用，但是在耐藥基因(muhidrug resistance，MDR)1表型的腫瘤細(xì)胞中，該糖蛋白則可以將化療藥物通過能量泵出細(xì)胞，使得細(xì)胞具有耐藥性。在本研究中，Ki-67在化療前的陽性表達(dá)率高達(dá)90.00%，而在化療后降至65.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明在行宮頸癌新輔助化療后，患者腫瘤細(xì)胞的增殖和分化受到了顯著的抑制作用。研究顯示Ki-67自1992年報(bào)道以來，常被用作為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，對(duì)惡性腫瘤的增殖和分化、遷徙等有一定的指導(dǎo)意義。主要是因?yàn)镵i-67雖然在細(xì)胞的有絲分裂中均有表達(dá)，但在G2期和M期表達(dá)最強(qiáng)，而在G0期幾乎無表達(dá)，故Ki-67可全面的反應(yīng)細(xì)胞增殖的情況及細(xì)胞增殖的數(shù)量，當(dāng)其表達(dá)過度時(shí)常表示細(xì)胞過度增殖，對(duì)惡性腫瘤的識(shí)別和評(píng)估具有重要意義。

同時(shí)新輔助化療在Ki-67陽性表達(dá)的患者中的療效顯著高于Ki-67陰性表達(dá)的患者，說明Ki-67陽性表達(dá)的患者對(duì)化療可能更具有敏感性。同時(shí)在P-gp在化療后的陽性率顯著高于化療前，根據(jù)以往的文獻(xiàn)及研究顯示這可能是化療藥物的使用刺激誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生P-gp，而使得細(xì)胞具有耐藥性[5]。P-gp在正常組織中的表達(dá)極低，是一種能量依賴性藥物外排泵，可通過腺苷三磷酸(adenosine triphosphate，ATP)水解后的能量將近入細(xì)胞的化療藥物排出細(xì)胞，使得細(xì)胞內(nèi)的有效化療藥物濃度顯著降低，從而使得腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，降低藥物的抗腫瘤作用。P-gp在不同個(gè)體中的表達(dá)具有差異性，同時(shí)也會(huì)受以往治療藥物和時(shí)間的影響。在P-gp陽性表達(dá)的患者中，其化療有效率為39.29%，而在P-gp陰性表達(dá)的患者中，化療有效率高達(dá)100.00%，這更加證明了P-gp具有耐藥性，且和以往的國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果具有一致性[6]。但以往的研究中P-gp陰性表達(dá)的患者其化療有效率一般不及100.00%，這可能是因?yàn)楸狙芯恐谢颊呔鶠閺奈唇邮苓^任何治療有關(guān)，機(jī)體對(duì)藥物仍具有較高的敏感性[7]。根據(jù)以上結(jié)果也可將P-gp作為預(yù)測(cè)宮頸癌新輔助化療敏感性的指標(biāo)之一，可根據(jù)患者的P-gp表達(dá)來調(diào)整化療方案和藥物，如若在化療前患者的P-gp就有高表達(dá)，則可選擇烷化劑或順鉑類藥物以增強(qiáng)患者機(jī)體對(duì)藥物的敏感性，同時(shí)在本研究中還發(fā)現(xiàn)P-gp和Ki-67具有明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系，與以往研究報(bào)道基本相符[8]。

綜上所述，P-gp和Ki-67具有明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系，且和化療有效率具有相關(guān)性，故在術(shù)前我們可以聯(lián)合檢測(cè)Ki-67和P-gp，以預(yù)測(cè)不同化療方法的敏感性和有效性，提高臨床療效。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Difference of Ki-67 and P-gp expression level before and after neoadjuvant chemotherapy for locally advanced cervical cancer and its clinical significance

YING Yu1, WANG Yin-xue2, WANG Ai-jiao2

(1.Department of Gynecology; 2.Department of Pathology, Maternal and Child Health Care Hospital of Yongkang City,ZhejiangYongkang321300,China)

Objective To explore the changes of Ki-67 nuclear antigens (Ki-67) and P-glycoprotein (P-gp) before and after cervical cancer neoadjuvant chemotherapy and analyze their correlation with efficacy and sensitivity of chemotherapy, so as to provide theoretical basis for determination of sensitivity indicators of new adjuvant chemotherapy. Methods Fifty cases of cervical cancer in Ⅰb2～Ⅱb stage treated with neoadjuvant chemotherapy in Maternal and Child Health Care Hospital of Yongkang City were randomly selected. Expression levels of Ki-67 and P-gp in cervical tissue were determined by immunohistochemical method before and after chemotherapy. Correlation of the changes of expression with chemotherapy efficacy and sensitivity was calculated and analyzed. Results Overall effective rate of cervical cancer neoadjuvant chemotherapy was 86%, and 7 cases were stable. No patients showed progression. Positive expression rate of Ki-67 before chemotherapy was 90.00%, which was higher than that after chemotherapy (65.00%) with statistical significance (χ2=23.67,P<0.05). Positive expression rate of P-gp before chemotherapy was 56.00%, which was 85.00% after chemotherapy. Difference had statistical significance (χ2=21.98,P<0.05). Chemotherapy effective rate of Ki-67 positive patients was 91.11%, which was significantly higher than that of Ki-67 negative patients (χ2=9.67,P<0.05). Chemotherapy effective rate of P-gp positive patients was 39.29%, and that of P-gp negative patients was 100.00%. The difference was statistically significant (χ2=10.85,P<0.05). Inflammatory expression of Ki-67 and P-gp presented negative correlation (r=0.5872,P<0.05). Conclusion Positive expression rate of Ki-67 decreases after neoadjuvant chemotherapy for cervical cancer, while positive expression rate of P-gp increases, which can provide basis for clinical treatment.

locally advanced cervical cancer; neoadjuvant chemotherapy for cervical cancer; Ki-67; P-gp; correlation

2016-09-29

應(yīng) 瑜(1963-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事婦科微創(chuàng)手術(shù)研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.11.033

R711.7

A

1673-5293(2016)11-1393-04