王艷華，于慕剛

(遼寧省沈陽市兒童醫(yī)院,遼寧 沈陽 110032)

不同血清學(xué)檢測法診斷兒童梅毒的應(yīng)用研究

王艷華，于慕剛

(遼寧省沈陽市兒童醫(yī)院,遼寧 沈陽 110032)

目的 探討三種血清學(xué)檢測方法在臨床診斷兒童梅毒中的應(yīng)用情況。方法 選擇沈陽市兒童醫(yī)院2014年12月至2016年2月門診及住院患者4 230例，分別進(jìn)行了以下檢測：甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)、梅毒螺旋體抗體檢測膠體金法(SYP)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)，并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果 用三種方法對血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，經(jīng)任意一項(xiàng)檢測為陽性即視為陽性患者共28例。其中三項(xiàng)檢測均為陽性4例(14.3%)，有兩項(xiàng)檢測為陽性11例(39.3%)，只有一項(xiàng)檢測為陽性13例(46.4%)。確診陽性患者15例。在檢測中TRUST特異度(92.3%)高，但敏感度(40.0%)低；SYP敏感度(86.7%)高，但特異度(7.7%)低，均不適宜單獨(dú)作為初篩檢測試驗(yàn)。應(yīng)用TRUST和SYP聯(lián)合檢測作為初篩試驗(yàn)，其中任意一種為陽性結(jié)果，靈敏度為100.0%。結(jié)論 用TRUST、SYP聯(lián)合作為梅毒初篩檢測試驗(yàn)；TPPA可以用作梅毒確診實(shí)驗(yàn)；TRUST適宜療效觀察。

兒童梅毒；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)；梅毒螺旋體抗體檢測膠體金法；梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)

近年來,由于梅毒感染率逐漸增加[1-2]，兒童梅毒的發(fā)病率也隨之上升。梅毒是由蒼白螺旋體(treponema pallidum，TP)引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜[3]。兒童梅毒大多為宮內(nèi)感染所致[4]，獲得性梅毒較為少見[5]，但由于父母常常隱瞞病情，易延誤治療，從而給兒童身心健康及發(fā)育造成了嚴(yán)重影響。目前梅毒檢測方法主要分為病原體檢測、血清學(xué)篩選試驗(yàn)及血清學(xué)確證試驗(yàn)。臨床實(shí)驗(yàn)室多采用血清學(xué)試驗(yàn)，但單獨(dú)的試驗(yàn)往往存在一定的局限性。為尋找更為合理的檢測兒童梅毒的手段，本研究應(yīng)用三種檢測方法進(jìn)行比較，以獲得較為可行的聯(lián)合檢測手段。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年12月至2016年2月在沈陽市兒童醫(yī)院就診的0～8歲患兒4 230例。經(jīng)病史、臨床診斷及血清學(xué)檢驗(yàn)均為陽性確診梅毒感染患兒15例，梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)診斷至少1種方法陽性的患兒共28例。

1.2方法

對4 230例患兒分別進(jìn)行了甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)、梅毒螺旋體抗體檢測膠體金法(SYP)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)。所有血液標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、保存嚴(yán)格按照說明書要求，并由專門人員進(jìn)行檢測和陰陽結(jié)果判斷。

1.3試劑

TRUST、SYP和TPPA試劑分別采自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司、英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司和日本富士瑞必歐株式會(huì)社。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究采用描述性統(tǒng)計(jì)方法，通過對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的綜合分析找尋一個(gè)合理的檢測程序。

2結(jié)果

2.1不同血清學(xué)檢測方法的比較

結(jié)合臨床資料及血清學(xué)檢測結(jié)果，確診病例為15例。在檢測中TRUST特異度較高，但靈敏度較低；SYP靈敏度較高，但特異度較低；而TPPA的特異度和靈敏度均為100.0%。TRUST、SYP、TPPA三種血清學(xué)檢測結(jié)果見表1。

表1 三種血清學(xué)檢測方法的比較結(jié)果

2.2甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗體檢測膠體金法聯(lián)合檢測的比較

應(yīng)用TRUST和SYP聯(lián)合檢測作為初篩試驗(yàn)，其中任意一種為陽性結(jié)果，靈敏度為100.0%，無漏診，見表2。

表2 兩種血清學(xué)檢測方法聯(lián)合應(yīng)用比較結(jié)果

Table 2 Comparison of combined application of two serological tests

注：單陽為兩種方法中只有一種陽性，單陰為兩種方法中只有一種陰性；雙陽為兩種方法均為陽性，雙陰為兩種方法均為陰性。

2.3甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)滴度與其他試驗(yàn)比較

TRUST滴度檢測可作為梅毒患者療效觀察以及復(fù)發(fā)或再感染的指標(biāo)。本研究中有7例TRUST陽性患者,當(dāng)?shù)味取?:64時(shí)，其他兩項(xiàng)試驗(yàn)均為陽性，見表3。

表3 TRUST滴度與其他試驗(yàn)比較結(jié)果

Table 3 Comparison of TRUST titer and results of other tests

方法 滴度 1：11：81：321：641：2561：2561：256SYP陰性陰性陰性陽性陽性陽性陽性TPPA陰性陽性陽性陽性陽性陽性陽性

3討論

3.1兒童梅毒的研究現(xiàn)狀

梅毒主要是通過性接觸和血液傳播，發(fā)病率在中國呈不斷上升的趨勢[6]。梅毒螺旋體易通過胎盤感染胎兒，導(dǎo)致先天性梅毒(congenital syphilis，CS)，可于新生兒期、嬰兒期和兒童期發(fā)病。目前認(rèn)為妊娠任何時(shí)期均可發(fā)生CS[7]。隨著孕婦梅毒發(fā)病率的升高，CS發(fā)病率也明顯上升。兒童梅毒主要是由于在宮內(nèi)感染所致，少數(shù)可通過哺乳、輸血等接觸而傳染。小兒梅毒主要從流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查等幾方面進(jìn)行診斷。超過50%的早期CS患兒在出生時(shí)表現(xiàn)正常，2/3在出生3～8周內(nèi)出現(xiàn)癥狀[7]，導(dǎo)致新生兒期時(shí)CS缺乏典型的臨床表現(xiàn)。診斷梅毒要有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室檢測是臨床診斷的主要依據(jù)，也是監(jiān)測和防止醫(yī)院感染的重要手段[4]。孕期梅毒篩查及治療可有效地預(yù)防CS[8]。

3.2梅毒檢測方法的綜合分析

人體感染梅毒螺旋體后，體內(nèi)產(chǎn)生兩種抗體：特異性抗梅毒螺旋體抗體和非特異性抗心磷脂(Cardiolipin)抗體。非特異性抗心磷脂抗體又稱反應(yīng)素，是由梅毒螺旋體破壞的組織細(xì)胞所釋放的類脂樣物質(zhì)以及梅毒螺旋體自身的類脂和脂蛋白刺激機(jī)體產(chǎn)生的IgM和IgG體，臨床常使用TRUST方法檢測。TRUST法檢測的是一種非特異性抗體，約感染6周后可檢出，因此在梅毒感染初期及潛伏期患者，極易因漏診出現(xiàn)假陰性結(jié)果，但其滴度變化與梅毒治療情況呈正相關(guān)，因此適合用于梅毒治療的療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷，對病情的評估有著重要的作用[9]。該法操作較為簡便，結(jié)果容易判讀，其半定量試驗(yàn)可作為療效觀察的指標(biāo)。以往通常單獨(dú)作為梅毒初篩的指標(biāo)。但本研究顯示該法靈敏度較低，容易出現(xiàn)假陰性而漏診，不適于單獨(dú)篩查使用。其原因?yàn)門RUST法所用抗原多可與其他非特異性抗體有交叉反應(yīng)，如風(fēng)疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡以及健康老年人均可造成假陽性結(jié)果。本研究中該種方法的假陽性率較低(7.7%)，與其他對成人的研究不符[10]，可能是因?yàn)閮和逯懈蓴_因素較少所致。

SYP是新近發(fā)展起來的快速體外診斷技術(shù)，利用現(xiàn)代生物工程技術(shù)純化重組基因的梅毒抗原，以膠體金作為指示標(biāo)記。該法操作簡捷、用血量少、靈敏、結(jié)果容易觀察和保存。但本研究顯示，SYP的靈敏度(86.7%)和假陽性率(92.3%)均較高，可作為篩檢方法，但需要確證試驗(yàn)來排除假陽性。該方法仍存在一定的假陰性率(13.3%)，如果單用該方法進(jìn)行篩查，會(huì)存在漏診的風(fēng)險(xiǎn)，因此也不適宜用于單獨(dú)篩查。由于試驗(yàn)方法的局限性，雖然有較高的假陽性率，但也存在一定的假陰性率。這也正需要聯(lián)合試驗(yàn)補(bǔ)充修正。

TPPA采用雙抗體夾心法，具有特異強(qiáng)、靈敏高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，較多用在潛伏期及難以診斷梅毒的檢測，是目前國內(nèi)推薦的梅毒確證試驗(yàn)方法。但是，該方法需要運(yùn)用手工操作和主觀判斷，并且具有極為繁瑣的步驟和較高的操作水平要求及較昂貴的價(jià)格，因此在檢測大樣本的過程中極為不利，其僅適用在確證TRUST、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)等檢測后的陽性標(biāo)本中。除此之外，該方法的檢測原理類似于ELISA，能夠?qū)gG型和lgM型抗體進(jìn)行同時(shí)檢測，因此也不適用在觀察患者的療效和對患者復(fù)發(fā)及再感染情況進(jìn)行判斷。

3.3檢測方法的聯(lián)合應(yīng)用情況

以往的經(jīng)驗(yàn)通常是先采用TRUST或SYP篩查梅毒血液標(biāo)本，如果得到陽性結(jié)果再進(jìn)行確診試驗(yàn)。本研究顯示，不管采用哪種方法單獨(dú)篩查，都會(huì)存在較大的漏診風(fēng)險(xiǎn)；然而采用兩種或兩種以上方法聯(lián)合篩查，會(huì)使這種風(fēng)險(xiǎn)大大降低。但也不是越多方法聯(lián)合檢測越好，還應(yīng)從患者的經(jīng)濟(jì)承受能力以及臨床具體工作等方面進(jìn)行綜合分析，采用一套性價(jià)比最高的檢測方案。

總之，基于三種血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)，建議采取如下程序?qū)σ伤苾和范净純哼M(jìn)行血清學(xué)檢測：首先用TRUST、SYP進(jìn)行初篩，如果其中有一項(xiàng)陽性再用TPPA進(jìn)行確認(rèn)，這樣就可以實(shí)現(xiàn)在降低檢測成本的同時(shí)又降低了漏診、誤診的發(fā)生率；同時(shí)用TRUST法觀察患者的臨床療效及對其復(fù)發(fā)和再感染情況進(jìn)行判斷。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：帖利軍]

Application of different serological tests in diagnos is of pediatric syphilis

WANG Yan-hua, YU Mu-gang

(Children’s Hospital of Shenyang City, Liaoning Shenyang 110032, China)

Objective To explore the application of three serological tests in clinical diagnosis of pediatric syphilis. Methods Totally 4 230 outpatients and inpatients during December 2014 to February 2016 in Children’s Hospital of Shenyang City were selected. Their blood samples were tested and analyzed by Toluidine Red Unheated Serum Test (TRUST), syphilis antibody colloidal gold method (SYP) and treponema pallidum particle assay (TPPA). Results The blood samples were tested by above three tests. Totally 28 patients were considered as syphilis positive because at least one of tests was positive. There were 4 patients positive in all three tests (14.3%), 11 patients positive in two tests (39.3%), 13 patients positive in one test (46.4%). And totally 15 patients were confirmed as positive. In the test, the specificity of TRUST (92.3%) was high, while its sensitivity (40.0%) was low. Sensitivity of SYP (86.7%) was high, while specificity (7.7%) was low. Both of them should not be used singly for primary screening test. In the primary screening test, combination of TRUST and SYP should be used. And the positive result was confirmed by either of them. The sensitivity was 100.0%. Conclusion Combination of TRUST and SYP should be used for primary syphilis screening test. TPPA can be used for diagnosis test of syphilis, and TRUST can be used for observation of clinical effect.

pediatric syphilis; toluidine red unheated serum test (TRUST); syphilis antibody colloidal gold method (SYP); treponema pallidum particle assay (TPPA)

2016-03-19

王艷華(1977-)，女，副主任檢驗(yàn)師，碩士，主要從事生化免疫工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.11.022

R759.1

A

1673-5293(2016)11-1362-03