黃夢(mèng)穎，范新榮，李妙玲，馬開(kāi)龍，陳琳琳，曾曉榮

(西南醫(yī)科大學(xué)心血管醫(yī)學(xué)研究所，四川 瀘州 646000)

技術(shù)方法

提高犬交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型建模成功率的新方法

黃夢(mèng)穎，范新榮，李妙玲，馬開(kāi)龍，陳琳琳，曾曉榮

(西南醫(yī)科大學(xué)心血管醫(yī)學(xué)研究所，四川 瀘州 646000)

目的對(duì)傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中犬的星狀神經(jīng)節(jié)暴露的方法進(jìn)行改良，建立一種新的暴露犬星狀神經(jīng)節(jié)方法，提高交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型建模的成功率。方法成年犬28只，隨機(jī)分為傳統(tǒng)組和改良組，每組14只，分別使用傳統(tǒng)和改良后的方法分離暴露星狀神經(jīng)節(jié)。28只犬均建立交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型。術(shù)中記錄犬生命體征變化和術(shù)中生存率，記錄刺激星狀神經(jīng)節(jié)所需電壓，記錄刺激前、后心臟電生理的變化。免疫組化檢測(cè)神經(jīng)遞質(zhì)釋放情況。結(jié)果改良組術(shù)中存活率較傳統(tǒng)組術(shù)中存活率顯著升高，P＜0.05。改良組手術(shù)時(shí)間較傳統(tǒng)組明顯縮短，P＜0.05。刺激改良組神經(jīng)達(dá)到閾值所需電壓較傳統(tǒng)組更小，P＜0.05。結(jié)論改良后的手術(shù)方法能夠有效的降低犬在手術(shù)過(guò)程中的死亡率，明顯縮短手術(shù)時(shí)間，減少術(shù)中出血量，星狀神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)更完整，持續(xù)刺激過(guò)程中所需電壓更穩(wěn)定，更適合用于建立交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型。

犬;交感神經(jīng);房顫模型;星狀神經(jīng)節(jié);刺激方法

心房顫動(dòng)是臨床最常見(jiàn)的心律失常之一，在發(fā)達(dá)國(guó)家的一般人群中，房顫的發(fā)病率達(dá)到了2%，老年人心律失常的發(fā)生更為常見(jiàn)，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，有多種因素參與了它的發(fā)病機(jī)制［1］。近年研究表明交感神經(jīng)興奮放電對(duì)房顫的發(fā)生和影響有直接關(guān)系［2］，但交感神經(jīng)對(duì)房顫的誘發(fā)機(jī)制和治療仍有許多需要證實(shí)的方面［3］。星狀神經(jīng)節(jié)由第六七頸部神經(jīng)節(jié)構(gòu)成的頸節(jié)部和第一胸神經(jīng)節(jié)構(gòu)成的，在功能上屬于交感神經(jīng)。目前在動(dòng)物的房顫模型中，最常見(jiàn)的房顫模型的建立方法之一是直接快速心房刺激+星狀神經(jīng)節(jié)刺激［4］。因此，如何建立良好的犬交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型至關(guān)重要，從而需要研究一種安全且簡(jiǎn)便的星狀神經(jīng)節(jié)刺激法用于模擬交感神經(jīng)相關(guān)房顫。既往常見(jiàn)的暴露星狀神經(jīng)節(jié)方法為經(jīng)犬鎖骨上窩行橫切口或旁正中切口暴露星狀神經(jīng)節(jié)并進(jìn)行電刺激，但此種方法術(shù)中滲血過(guò)多，且容易損傷大血管，星狀神經(jīng)節(jié)暴露不夠充分。本文通過(guò)研究探討星狀神經(jīng)節(jié)的解剖位置，建立一種更簡(jiǎn)單有效安全的新型星狀神經(jīng)節(jié)暴露法，該方法對(duì)比傳統(tǒng)分離暴露法，手術(shù)過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，手術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的損傷明顯降低，手術(shù)中動(dòng)物的死亡率也降低，為臨床研究房顫的誘發(fā)因素和治療建立一種更為安全有效的交感神經(jīng)房顫模型。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康家犬28只，雌雄不限，體質(zhì)量10～15 kg，來(lái)源于西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心【SCXK(川)2013-17】，手術(shù)操作在西南醫(yī)科大學(xué)心血管研究所【SYXK(川)2013-181】中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。常規(guī)飲食，光照保持晝夜節(jié)奏各12 h，溫度控制在24～26℃，相對(duì)濕度控制在50% ～70%，并按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的3R原則給予人道關(guān)懷。

1.1.2 主要儀器及試劑:動(dòng)物手術(shù)臺(tái);KL01L型單孔冷光手術(shù)燈(上?？屏栳t(yī)療器械有限公司);HX-300S動(dòng)物呼吸機(jī)(泰盟);動(dòng)物用心電監(jiān)護(hù)儀(成都煒燁進(jìn)出口貿(mào)易有限公司);科德士寵物用電推剪;手術(shù)器械:手術(shù)刀、止血鉗、神經(jīng)拉鉤等;LEAD-7000多道電生理儀(四川錦江電子科技有限公司);JGD-300A高頻電刀(張家港市航天醫(yī)療電器有限公司);YC-2型程控刺激器(成都儀器廠制造);XH-2鉑金保護(hù)電極、刺激電級(jí)(北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司);戊巴比妥鈉;生理鹽水;動(dòng)靜脈鞘管6F。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 術(shù)前準(zhǔn)備:禁食12 h，禁飲3 h，術(shù)前稱重，3%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔麻醉，術(shù)中以3%戊巴比妥鈉2 mL/h維持麻醉。待動(dòng)物無(wú)意識(shí)后固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，氣管插管，接動(dòng)物呼吸機(jī)輔助呼吸，雙側(cè)頸部、前胸部及右側(cè)腹股溝做手術(shù)備皮準(zhǔn)備，常規(guī)消毒，鋪巾，連接心電監(jiān)護(hù)儀及心電圖機(jī)，以體表II、aVF、aVR、V1導(dǎo)聯(lián)檢測(cè)心電。右側(cè)股靜脈給與0.9%氯化鈉溶液維持補(bǔ)液，右側(cè)股動(dòng)脈插管持續(xù)監(jiān)測(cè)血壓。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型設(shè)計(jì):將28只家犬隨機(jī)分為改良和傳統(tǒng)兩組，傳統(tǒng)組進(jìn)行傳統(tǒng)的暴露星狀神經(jīng)節(jié)方法［1］，改良組進(jìn)行改良后的暴露星狀神經(jīng)節(jié)方法。每組14只，刺激左右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)各7只。具體分組方法為:傳統(tǒng)組14只隨機(jī)分為L(zhǎng)和R組，每組7只，L組進(jìn)行左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)+快速左心房刺激，R組進(jìn)行右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)+快速右心房刺激。改良組14只隨機(jī)分為L(zhǎng)和R組，每組7只，L組進(jìn)行左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)+快速左心房刺激，R組進(jìn)行右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)+快速右心房刺激。

1.2.3 暴露星狀神經(jīng)節(jié)手術(shù)方法:傳統(tǒng)組參照傳統(tǒng)分離暴露星狀神經(jīng)節(jié)方法［4］:在犬鎖骨上窩行橫切口或旁正中切口，探尋頸動(dòng)脈及頸動(dòng)脈鞘。分離可見(jiàn)頸動(dòng)脈的分支鎖骨下動(dòng)脈，沿鎖骨下動(dòng)脈內(nèi)側(cè)向脊柱側(cè)分離肌肉和脂肪組織，在鎖骨下動(dòng)脈與頸動(dòng)脈、椎動(dòng)脈后方，第7頸椎前方脂肪組織內(nèi)可見(jiàn)呈星形分叉的星狀神經(jīng)節(jié)，用玻璃分針仔細(xì)分離星狀神經(jīng)節(jié)周圍的脂肪組織，并向下分離其分支，暴露臂叢及心交感神經(jīng)。

改良組進(jìn)行改良后的暴露星狀神經(jīng)節(jié)方法，將犬使用戊巴比妥鈉麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)，頸部及前胸部備皮，于犬前胸部觸摸到突起的胸骨柄，沿胸骨柄向下，確定第1肋骨及第2肋骨的體表位置。分離雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)時(shí)，沿胸骨柄向左右側(cè)第一肋間上緣做一橫切口，長(zhǎng)10 cm，切開(kāi)皮膚。見(jiàn)鎖骨頭肌，止血鉗沿鎖骨頭肌肌肉方向鈍性分離皮下組織和肌肉，用組織拉鉤拉開(kāi)肌肉，暴露頸總動(dòng)脈和頸外靜脈，用玻璃分針鈍性分離伴行頸總動(dòng)脈的迷走神經(jīng)，用絲線標(biāo)記迷走神經(jīng)，用拉鉤分別向兩邊分開(kāi)頸總動(dòng)脈和頸外靜脈，向深處分離，可見(jiàn)鎖骨下動(dòng)脈，沿鎖骨下動(dòng)脈內(nèi)側(cè)向脊柱側(cè)分離肌肉和脂肪組織，在鎖骨下動(dòng)脈與椎動(dòng)脈后方，第一肋間背端的內(nèi)側(cè)，頸長(zhǎng)肌的外側(cè)，第7頸椎前方脂肪組織內(nèi)可見(jiàn)一不規(guī)則的膨大處，呈星形分叉，即為星狀神經(jīng)節(jié)。以止血鉗插入組織間鈍性分離組織和神經(jīng)，以這種方式分離組織會(huì)拉斷結(jié)締組織的筋膜，但神經(jīng)有彈性，不易被拉斷，再以玻璃分針?lè)蛛x神經(jīng)節(jié)周圍脂肪組織，徹底暴露星狀神經(jīng)節(jié)，用溫液體石蠟滴注在神經(jīng)上，保護(hù)暴露的神經(jīng)。如圖1。

1.2.4 房顫模型建立:兩組犬均進(jìn)行快速心房起搏+星狀神經(jīng)節(jié)刺激。兩組犬星狀神經(jīng)節(jié)暴露后，待犬生命體征平穩(wěn)，分別暴露右股動(dòng)靜脈，右側(cè)動(dòng)脈接血壓換能器監(jiān)測(cè)血壓，體表心電圖監(jiān)測(cè)心率，麻醉呼吸機(jī)監(jiān)測(cè)血氧飽和度。右股靜脈插入一根10級(jí)電極導(dǎo)管置于右心房，電極尾端連接電生理儀，于左側(cè)第二肋間開(kāi)胸，切開(kāi)心包暴露左心房，左心耳，將4級(jí)電極導(dǎo)管放入左心房位置，并固定心外膜處，電極尾端連接電生理儀，電圖顯示大A波而無(wú)V波時(shí)，提示置管成功。研究將SG刺激閾值定義為收縮壓或心率較基礎(chǔ)值增加20%的電壓水平。先記錄刺激前心率及血壓。由1V開(kāi)始逐漸增加神經(jīng)刺激電壓，最高為20 V，記錄心率及血壓變化，測(cè)定刺 激閾值。以閾值刺激星狀神經(jīng)節(jié)6 h，每一個(gè)小時(shí)重新測(cè)量閾值，如有改變，則以新的閾值進(jìn)行刺激。刺激星狀神經(jīng)節(jié)同時(shí)給予心房快速刺激:脈寬0.5 ms，測(cè)定起搏閾值，S1S1周長(zhǎng)100 ms，2倍閾值的刺激電壓刺激心房建立房顫模型。

圖1 新方法分離星狀神經(jīng)節(jié)。Note.A:The location of Stellate ganglion exposwre;B:Separating the left stellate ganglion;C:Separating the right stellate ganglion.Fig.1 Separation of the stellate ganglion

1.3 數(shù)據(jù)收集

1.3.1 術(shù)前記錄兩組實(shí)驗(yàn)犬體重，心率、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、血氧飽和度，術(shù)中記錄手術(shù)時(shí)間，觀察心率、血壓、血氧飽和度變化，測(cè)量刺激前、刺激后1 h、2 h、4 h、6 h達(dá)到神經(jīng)刺激閾值所需電壓。實(shí)驗(yàn)完成后計(jì)算犬術(shù)中存活率，存活率=每組存活的犬?dāng)?shù)/每組犬的總數(shù)量 ×100%。

1.3.2 心臟電生理監(jiān)測(cè):(1)有效不應(yīng)期(ERP):使用心臟電生理刺激儀進(jìn)行 S1S2程序刺激，S1S1為300 ms，S1S2程序刺激比例8:1，以5 ms為步長(zhǎng)，刺激延遲5 s，刺激脈寬為0.5 ms，電壓為2倍的舒張期閾值，直到不能奪獲心房的最長(zhǎng) S1S2間期為ERP，測(cè)量5次取平均值，分別于基礎(chǔ)狀態(tài)下，刺激后1 h、2 h、4 h、6 h測(cè)定左心房、右心房的 ERP。(2)房顫誘發(fā)率和房顫持續(xù)時(shí)間測(cè)定:分別于刺激前、刺激后1 h、2 h、4 h、6 h測(cè)定右心房、左心房的房顫誘發(fā)率和房顫刺激時(shí)間。房顫定義為心律不整齊，P波消失，出現(xiàn)大小不一、間隔不均的f波，頻率450～600次/min，RR間期不等，持續(xù)10 s以上。刺激后1 h、2 h、4 h、6 h在左心房、右心房部位進(jìn)行Burst刺激，刺激周長(zhǎng)S1S1為100 ms，電壓為兩倍的舒張期閾值，脈寬0.5 ms，每個(gè)部位重復(fù)5次，每次持續(xù)30 s，停止刺激后出現(xiàn)房顫且持續(xù)時(shí)間超過(guò)10s為誘發(fā)成功，記錄房顫誘發(fā)的情況。

1.3.3 神經(jīng)結(jié)構(gòu)觀察:術(shù)后處死所有存活實(shí)驗(yàn)犬，取出雙側(cè)交感及迷走神經(jīng)，用生理鹽水清洗，觀察犬星狀神經(jīng)節(jié)形態(tài)學(xué)變化。

1.3.4 免疫組化法觀察生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)、膽堿乙酸轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、酪氨酸羥化酶(TH)表達(dá)情況:石蠟切片脫蠟至水，高溫蒸汽抗原修復(fù)后滴加5%BSA封閉液，棄去封閉液后，滴加兔抗生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)、膽堿乙酸轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、酪氨酸羥化酶(TH)抗體各50 μL，充分覆蓋切片，4°冰箱孵育過(guò)夜，次日 PBS漂洗后，加抗兔抗體 50 μL。37°濕盒孵育1 h，DAB染色，蘇木素復(fù)染、脫水透明封片，于光學(xué)顯微鏡(×400)下觀察，GAP-43、ChAT、TH陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)均采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以±s表示，計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，2組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，xˉ檢驗(yàn)和隨機(jī)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。生存率比較使用Fisher法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 心率隨時(shí)間變化曲線Note.Compared with the tradition group，P＜0.05.Fig.2 The curves of variation of heart rate with time

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 兩組犬術(shù)中相關(guān)指標(biāo)比較

2組犬心率均隨手術(shù)時(shí)間推移而下降，但傳統(tǒng)組心率下降更明顯，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，圖2。傳統(tǒng)組體質(zhì)量(12.07±1.77)kg，改良組體質(zhì)量(12.21±1.71)kg，傳統(tǒng)組氧飽和度97.71±0.19%，改良組氧飽和度97.50±0.23%，比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 兩組犬手術(shù)時(shí)間

傳統(tǒng)組手術(shù)時(shí)間(269.44±8.79)min，改良組手術(shù)時(shí)間(122.71±3.62)min。改良組犬的手術(shù)所需時(shí)間較傳統(tǒng)組明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組犬手術(shù)時(shí)間如圖3。

2.3 2組犬所需電壓

兩組犬刺激神經(jīng)達(dá)到閾值所需的電壓隨時(shí)間推移均逐漸升高，但傳統(tǒng)組所需閾值電壓比改良組更大，改良組所需電壓值增長(zhǎng)較平穩(wěn)。兩組電壓比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4)。

2.4 兩組心臟電生理指標(biāo)情況

兩組犬6 h房顫誘發(fā)率分別為20%和26%，房顫持續(xù)時(shí)間分別為(225±116.2)s和(190±129.9) s，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。兩組犬的基礎(chǔ)有效不應(yīng)期(ERP)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組犬給予刺激1、2、4、6 h后，心房有效不應(yīng)期(ERP)均較基礎(chǔ)值顯著縮短(P＜0.05)，圖5。但兩組間 ERP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.39，P＞0.05)。

圖3 兩組犬手術(shù)時(shí)間對(duì)比Note.Compared with the traditional group，*P＜0.05.Fig.3 Comparison of operation time between the two groups of dogs

圖4 兩組犬所需電壓對(duì)比Note.Compared with the traditional group，*P＜0.05.Fig.4 Comparison of the electric voltage used in the two groups of dogs

圖5 兩組犬心臟電生理指標(biāo)Fig.5 The cardiac electrophysiological indexes in the two groups of dogs

2.5 雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)刺激對(duì)心率及血壓的不同影響

以閾值刺激右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)，心率及動(dòng)脈血壓均較基礎(chǔ)值顯著升高。以閾值刺激左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)，心率較基礎(chǔ)值稍升高，但上升無(wú)右側(cè)明顯，動(dòng)脈壓較基礎(chǔ)值顯著升高，雙側(cè)刺激前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖6、7)。

2.6 術(shù)中存活率

傳統(tǒng)組存活率為64.3%(9/14)，改良組存活率為100%(14/14)，改良組存活率明顯高于傳統(tǒng)組，兩者存活率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。

2.7 神經(jīng)結(jié)構(gòu)完整性

術(shù)后取出神經(jīng)干，可見(jiàn)新方法暴露的星狀神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，如圖8。

2.8 神經(jīng)組織學(xué)觀察

生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)、膽堿乙酸轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、酪氨酸羥化酶(TH)均在星狀神經(jīng)節(jié)上有表達(dá)，呈棕黃色，如圖9。

圖6 雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)刺激對(duì)心率及血壓的不同影響Left:The left stellate ganglion;Right:The right stellate ganglionFig.6 Effects of different bilateral stellate ganglion stimulation on the heart rate and blood pressure

圖7 雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)刺激對(duì)心率及血壓的不同影響LSBP:The systolic blood pressure after stimulating the left stellate ganglion;RSBP:The systolic blood pressure after stimulating the right stellate ganglion;LDBP:The diastolic blood pressure after stimulating the right stellate ganglion;RDBP:The diastolic blood pressure after stimulating the right stellate ganglion.*P＜0.05. BS:Before stimulation.AS:Afler stimulation.Fig.7 Effects of different bilateral stellate ganglion stimulation on the heart rate and blood pressure

3 討論

圖8 改良法分離后的星狀神經(jīng)節(jié)Note.A:Left stellate ganglion and left vagus nerve;B:Right stellate ganglion and right vagus nerve.Fig.8 The bilateral stellate ganglions separated by the optimized method

圖9 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白、膽堿乙酸轉(zhuǎn)移酶、酪氨酸羥化酶表達(dá)情況T Note.A:Blank group;B:Growth-associated protein-43;C:Choline acetate transferase;D:Tyrosine hydroxylase(Bar=10 μm.)Fig.9 Expression of GAP-43，ChAT，and TH proteins in the stellate ganglions

房顫是目前臨床上最常見(jiàn)的心律失常之一，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前越來(lái)越多臨床報(bào)道提示心臟自主神經(jīng)在介導(dǎo)房顫中起著重要作用［5］。20世紀(jì)60年代，Yanowitz［6］在犬體內(nèi)研究了對(duì)交感神經(jīng)進(jìn)行干預(yù)后對(duì)心臟不應(yīng)期和心電圖的影響。隨后，Priori［7］發(fā)現(xiàn)交感神經(jīng)刺激后與心律失常有密切關(guān)系。最近有研究發(fā)現(xiàn)刺激交感神經(jīng)可縮短心房有效不應(yīng)期(AERP)，與房顫的發(fā)生和維持有明確的相關(guān)性［8］。Zipes［9］利用相同的犬模型，發(fā)現(xiàn)左右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)對(duì)心臟早后除極有不同的效應(yīng)，說(shuō)明左右交感神經(jīng)對(duì)心臟的影響存在不對(duì)稱性。這些研究結(jié)果表明，交感神經(jīng)激動(dòng)可以觸發(fā)心電活動(dòng)，并和心律失常的發(fā)生有重要關(guān)系，探索交感神經(jīng)對(duì)房顫的影響機(jī)制成了一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。

在相關(guān)研究中，構(gòu)建交感神經(jīng)相關(guān)房顫模型是科學(xué)有效地進(jìn)行機(jī)制研究的重要環(huán)節(jié)。星狀神經(jīng)節(jié)屬于交感神經(jīng)分支，目前使用最多的動(dòng)物交感神經(jīng)激活房顫模型，都以刺激星狀神經(jīng)節(jié)為主。良好的神經(jīng)刺激房顫模型要求研究人員對(duì)雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)的位置有準(zhǔn)確的認(rèn)識(shí)，良好的動(dòng)物模型的建立要求簡(jiǎn)單有效，創(chuàng)傷小，成功率及動(dòng)物存活率高［10］。

既往的手術(shù)方式在鎖骨上窩橫向切口易損傷鎖骨頭肌、胸骨頭肌，且損傷小血管較多，即使鈍性分離肌肉依然存在出血增加，操作復(fù)雜，創(chuàng)傷比較大，刺激達(dá)到閾值所需電壓也更大，長(zhǎng)時(shí)間刺激對(duì)神經(jīng)的影響也更大，且操作時(shí)容易損傷神經(jīng)節(jié)附近的大血管造成動(dòng)物失血甚至死亡，因此本實(shí)驗(yàn)在既往模型的基礎(chǔ)上對(duì)手術(shù)過(guò)程給予一定的改進(jìn)，觀察了星狀神經(jīng)節(jié)的解剖位置，在胸骨柄處沿肌肉方向向深處分離，頸總動(dòng)脈和頸靜脈的暴露更加充分，而上述血管是定位星狀神經(jīng)節(jié)的重要標(biāo)志。沿著肌肉方向分離肌肉，而不是橫向離斷肌肉，能夠減少因離斷肌肉而導(dǎo)致的滲血，能減少對(duì)刺激星狀神經(jīng)節(jié)以及記錄神經(jīng)放電活動(dòng)的不良影響，盡量不損傷血管及神經(jīng)的情況下，順利暴露星狀神經(jīng)節(jié)并進(jìn)行電刺激，不僅適合研究單側(cè)交感神經(jīng)對(duì)心律失常的影響，更適合同時(shí)對(duì)雙側(cè)交感神經(jīng)進(jìn)行研究。

［1］Camm AJ，SavelievaL，PotparaT，etal.Thechanging circumstance of atrial fibrillation— progress towards precision medicine［J］.J Intern Med，2016，279(5):412-427.

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［5］李睿.心房神經(jīng)節(jié)激活與心房顫動(dòng)易感性之間的關(guān)系:神經(jīng)活性記錄直接證據(jù)［D］.武漢:武漢大學(xué)，2014.

［6］Yanowitz F，Preston JB，Abildskov JA.Functional distribution of right and left stellate innervation to the ventricles.Production of neurogenic electrocardiographic changes by unilateral alteration of sympathetic tone［J］.Circ Res，1966，18(4):416-428.

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A new method to improve the success rate of establishing a canine model of atrial fibrillation induced by sympathetic stimulation

HUANG Meng-ying，F(xiàn)AN Xin-rong，LI Miao-lin，MA Kai-long，Chen Lin-lin，Zeng Xiao-rong
(Institute of Cardiovascular Medicine，Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan 646000，China)

ObjectiveTo develop a new method to expose the stellate ganglion to increase the success rate of establishing a dog model of atrial fibrillation indinced by sympathetic stimulation.MethodsA total of 28 adult dogs were randomly divided into traditional group and improvement group，14 dogs in each group.The stellate ganglions were separated by the two different methods，respectively，to establish a sympathetic stimulation induced atrial fibrillation model in all the dogs.Changes of vital signs，survival rate of the dogs and the voltage required to stimulate the stellate ganglion were recorded intraoperatively.Changes of cardiac electrophysiology were recorded before and after electric stimulation. The levels of released neurotransmitters were detected by immunohistochemistry.ResultsThe survival rate of the improvement group was 100%(14/14)，significantly higher than the 64.3%(9/14)of the traditional group(P＜0.05). The operation time of the improvement group was 122.71±3.62 min，significantly shorter than the 269.44±8.79 min of the traditional group(P＜0.05).The threshold voltage of the improvement group was significantly lower than that of the traditional group(P＜0.05).ConclusionsOur modified surgical procedure can effectively reduce the mortality of dogs，significantly shorten the operation time，and reduce the intraoperative blood loss，keeping a more intact stellate ganglion，and maintains a more stable voltage of electric stimulation，Therefore，it is a new method more suitable for establishment ofa sympathetic stimulation induced atrial fibrillation model in dogs.

Dog; Sympathetic nerve;Atrial fibrillation model; Stellate ganglion; Electric stimulation; Surgical procedure

R-33

A

1671-7856(2016)12-0059-07

10.3969.j.issn.1671-7856.2016.12.012

2016-06-13

國(guó)家自然科學(xué)基金(81500259)。

黃夢(mèng)穎(1989-)，女，碩士研究生，內(nèi)科學(xué)，E-mail:493087012@qq.com。

曾曉榮(1955-)，男，研究員，碩士生導(dǎo)師。E-mail:Zengxiaorong8818@163.com。