陳申秒 ， 程小果 ， 王 慧 ， 何福慶

(山東濱州沃華生物工程有限公司 山東省動(dòng)物病原微生物工程實(shí)驗(yàn)室山東濱州博萊威生物技術(shù)研究所 ， 山東 濱州 256600)

新城疫病毒(NDV)的感染宿主范圍比較廣，因?yàn)轲B(yǎng)殖結(jié)構(gòu)和流行趨勢(shì)的變化，近些年來鴨群感染才開始引起重視。雞是NDV的主要宿主，水禽是天然儲(chǔ)存庫(kù)已是共識(shí)，然而鴨群對(duì)NDV強(qiáng)毒株是否具有堅(jiān)強(qiáng)的抵抗力，鴨群感染強(qiáng)毒發(fā)病和死亡的情況如何？研究各有不同觀點(diǎn)?？梢钥隙ǖ氖?，NDV出現(xiàn)了某些新的致病特點(diǎn)，在鴨等水禽表現(xiàn)出一定的致病性，鴨群NDV基因型出現(xiàn)新變化[1-2]，系統(tǒng)分析鴨NDV的生物學(xué)變化，研究感染宿主之間的關(guān)系，總結(jié)NDV在宿主范圍內(nèi)的流行和分布形式，對(duì)于整個(gè)家禽養(yǎng)殖業(yè)具有重要的意義。

1 鴨新城疫流行病學(xué)調(diào)查

有報(bào)道的鴨新城疫感染病例和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)很多，觀點(diǎn)不盡相同?？梢钥隙ǖ氖荖DV在感染宿主方面的確發(fā)生了很多新的變化，對(duì)鴨、鵝等水禽的致病性有明顯的增強(qiáng)[2]，水禽通過帶毒并經(jīng)呼吸道和泄殖腔不斷排毒，為NDV的不斷變異和防控帶來一系列的問題。中國(guó)又是世界上鴨養(yǎng)殖量最大的國(guó)家，占出欄量的70%以上，在國(guó)內(nèi)部分省份養(yǎng)鴨成為主要的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)之一。因此，系統(tǒng)研究水禽，特別是鴨感染NDV在流行病學(xué)上有重要的意義。

健康鴨帶毒監(jiān)測(cè)是NDV流行病學(xué)調(diào)查需要非常重視的一環(huán)，健康鴨帶毒是難以避免的，在應(yīng)激條件下發(fā)病的規(guī)律、發(fā)病機(jī)制、流行特點(diǎn)等需要深入研究。目前的監(jiān)測(cè)機(jī)制和數(shù)據(jù)很不完善，胡北俠等[3]報(bào)道了規(guī)?；】等庥梅N鴨場(chǎng)的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，其監(jiān)測(cè)的健康鴨攜帶的均屬于弱毒株；王玨等[4]對(duì)活禽市場(chǎng)和健康家鴨泄殖腔棉拭樣品進(jìn)行了檢測(cè)，獲得23株分離株均符合弱毒F蛋白裂解位點(diǎn)模式，與流行的強(qiáng)毒株和疫苗株遺傳距離較遠(yuǎn)。

然而從感染發(fā)病的鴨群中分離NDV并研究其致病性，卻是另外一種情況。有學(xué)者對(duì)我國(guó)NDV分子流行病學(xué)研究認(rèn)為，感染并導(dǎo)致水禽發(fā)病死亡的NDV主要是基因Ⅶ型和Ⅸ型，又以基因Ⅶ型NDV強(qiáng)毒株占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)[2，5]。問題可能比想象中的復(fù)雜，蔡麗麗等[6]從患病鴨分離NDV屬于基因Ⅵ型，與鴿源分離毒株親緣關(guān)系近，分析認(rèn)為由鴿源NDV變異所產(chǎn)生的可能性很大；還有些研究發(fā)現(xiàn)，有些基因Ⅶ型NDV毒株對(duì)家鴨的致病力并不強(qiáng)，但是人工感染鵝或雞后卻能造成嚴(yán)重的發(fā)病和死亡[7]，還有些研究結(jié)果顯示，基因Ⅶ型NDV強(qiáng)毒株對(duì)鴨群并沒有明顯的致病性。

問題的關(guān)鍵是，我們對(duì)于鴨NDV的流行病學(xué)調(diào)查還太少，報(bào)道的健康帶毒監(jiān)測(cè)和感染發(fā)病的NDV血清型研究還不足以說明鴨NDV的主要問題。我們需要更多的系統(tǒng)數(shù)據(jù)，特別是規(guī)?；B(yǎng)殖區(qū)域內(nèi)的NDV病毒持續(xù)監(jiān)測(cè)，從固定的區(qū)域、鴨群、系統(tǒng)的養(yǎng)殖周期匯集數(shù)據(jù)，這樣對(duì)于系統(tǒng)分析NDV在鴨群的流行病學(xué)調(diào)查是有意義的，我們應(yīng)該通過水禽產(chǎn)業(yè)體系，建立NDV在水禽育種、養(yǎng)殖、屠宰等環(huán)節(jié)流行病學(xué)監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)庫(kù)，這也是我們開展鴨NDV系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)。

2 鴨新城疫病毒致病性

NDV 是單股負(fù)鏈、不分節(jié)段的RNA 病毒，基因組全長(zhǎng)有15 186、15 192 bp和15 198 bp 3種，組編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白，分別為核衣殼蛋白(NP)、膜蛋白(M)、磷酸化蛋白(P)、血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白(HN)、融合蛋白(F)和大分子蛋白(L)，排列方式為3'-NP-P-M-F-HN-L-5′[8]。目前，關(guān)于鴨NDV 的研究主要集中在F、NP 蛋白新型疫苗的開發(fā)等方面，而關(guān)于其他蛋白在致病性和免疫原性中的作用研究尚不多見。

2.1 鴨新城疫病毒致病性與基因型 NDV只有1個(gè)血清型，根據(jù)其F基因差異和基因組長(zhǎng)度，分為Class I和ClassⅡ兩大譜系，ClassI基因組長(zhǎng)度為15 198 bp，目前發(fā)現(xiàn)共10個(gè)基因亞型，主要為低毒力或無毒力毒株，一般由野生和家養(yǎng)水禽攜帶，沒有表現(xiàn)臨床感染發(fā)病的癥狀；ClassⅡ基因組長(zhǎng)度有15 186 bp和15 192 bp兩種，分別包括基因Ⅰ—Ⅳ型和基因Ⅴ—Ⅸ型，包含了低毒、中等毒和強(qiáng)毒株[9]。

目前對(duì)NDV分離株的致病性研究集中于MDT、ICPI、IVPI指標(biāo)和F基因裂解位點(diǎn)氨基酸序列，大部分從發(fā)病鴨腦組織中分離的NDV屬于強(qiáng)毒株，具有強(qiáng)毒株F基因裂解位點(diǎn)特征的氨基酸序列為112R-R-Q-K-R-F117，且多屬于基因VIId亞型，羅宇宏、翟文棟等[10-12]分別從貴州、河北、山東的不同品種鴨分離的NDV證實(shí)了同樣的結(jié)論。這方面的研究結(jié)果并非完全一致，路振香等[13]從鴨腦組織分離的NDV為中等毒力毒株，其1日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)和13日齡鴨胚EID50分別為0.84、10-6.5/0.1 mL；張?zhí)璧萚14]在連續(xù)多批發(fā)病的鴨場(chǎng)分離的NDV分離株具有強(qiáng)毒株特征的F基因裂解位點(diǎn)氨基酸序列，根據(jù)高變區(qū)氨基酸推導(dǎo)疑似為基因II型。

用強(qiáng)毒特征的NDV分離株接種感染動(dòng)物驗(yàn)證對(duì)鴨的致病性，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果也存在很多爭(zhēng)議。伊惠等[15]用2株鴨源基因Ⅶ強(qiáng)毒株感染鴨和SPF雞，SPF雞感染后3～6 d 100%發(fā)病死亡，而鴨沒有明顯的臨床癥狀，國(guó)外也有類似報(bào)道[16]，Y.Dai[17]等用JSD0812以5×108ELD50劑量通過腿部肌肉注射感染15日齡野鴨(Mallard)后4～6 d試驗(yàn)鴨全部發(fā)病死亡，這可能是因毒株的不同特性而導(dǎo)致。

基因型分析對(duì)系統(tǒng)掌握鴨NDV流行的諸多方面具有重要意義，由于對(duì)NDV的致病性和基因型的研究不夠系統(tǒng)，研究結(jié)果有很大差異，因此NDV對(duì)鴨的致病性存在爭(zhēng)議，系統(tǒng)性的研究尚需深入[17]，掌握全球范圍內(nèi)不同宿主NDV流行的總體趨勢(shì)和演化規(guī)律需要更多的NDV基因型的研究信息。然而目前的基因型分析方法受毒株的區(qū)域、數(shù)量、宿主范圍影響很大，不同學(xué)者針對(duì)所掌握的信息數(shù)據(jù)進(jìn)行分型，缺乏系統(tǒng)的、可以全球范圍內(nèi)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道的借鑒性大打折扣。因此，筆者認(rèn)為應(yīng)該從多個(gè)方面開展工作：第一，NDV研究組織應(yīng)該建立公共的信息平臺(tái)，將現(xiàn)有的NDV全基因組信息共享；第二，要建立一套以“分值”作為參考標(biāo)準(zhǔn)的分型方法，對(duì)影響病毒分型的不同基因、非編碼區(qū)、關(guān)鍵變異位點(diǎn)等，按照所起的作用權(quán)重程度確立“分值”，以分值確立NDV的基因型，并體現(xiàn)NDV演化的可能性來源；此外，對(duì)于不同來源NDV的致病性要有相應(yīng)的參數(shù)信息，除了MDT、ICPI、IVPI指標(biāo)以外，應(yīng)有將NDV回歸感染動(dòng)物后的信息數(shù)據(jù)。

2.2 鴨NDV F基因 研究認(rèn)為，F(xiàn)蛋白對(duì)鴨NDV致病性起主要作用[18]，其負(fù)責(zé)病毒與宿主細(xì)胞的融合，其融合能力的強(qiáng)弱，決定了病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞復(fù)制的能力的強(qiáng)弱，從而決定NDV的毒力。因此，F(xiàn)蛋白裂解位點(diǎn)的氨基酸殘基序列作為毒力強(qiáng)弱的判斷標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)F基因序列進(jìn)行基因型分析用于NDV毒力和基因型的研究。

F蛋白以惰性前體Fo形式存在，當(dāng)轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體表面時(shí)，位于F蛋白112～117位氨基酸的裂解位點(diǎn)被宿主細(xì)胞內(nèi)的蛋白裂解酶識(shí)別，裂解成由二硫鍵橋聯(lián)的兩個(gè)亞單位F1、F2，從而轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘娜诤系鞍?。因此?12～117位氨基酸順序與F蛋白的裂解能力與致病力直接相關(guān)[2]，有致病性的NDV在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，F(xiàn)蛋白就能被細(xì)胞內(nèi)蛋白裂解酶裂解。研究發(fā)現(xiàn)強(qiáng)毒株FO裂解位點(diǎn)為多個(gè)堿性氨基酸的連續(xù)排列，而弱毒株為中性氨基酸，這種排列導(dǎo)致了強(qiáng)毒株F蛋白可以被宿主多種組織細(xì)胞識(shí)別裂解，引發(fā)多組織感染，而弱毒株FO被裂解的能力大大降低，感染性很差或者不具有感染力。還有研究認(rèn)為，強(qiáng)毒株NDV的F1蛋白C端有一對(duì)弱毒株沒有的二元堿性氨基酸，可以被宿主細(xì)胞內(nèi)普遍存在的蛋白酶識(shí)別，比如furin和pc6，無毒力的NDV因?yàn)樵摱獕A性氨基酸的缺失而只能被胰蛋白酶樣蛋白酶裂解，引起局部感染[18]。

研究發(fā)現(xiàn)F蛋白胞質(zhì)區(qū)位于FO第523～553位氨基酸，第540～550位氨基酸與合胞體的形成十分相關(guān)，其位點(diǎn)的改變對(duì)病毒形成合胞體的能力起著重要作用；疏水跨膜區(qū)位于第500～553位氨基酸殘基，主要作用是終止蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和膜錨定。孫杰等[12]分析了10株鴨NDV基因Ⅶd強(qiáng)毒株F基因序列，發(fā)現(xiàn)流行毒株在52、71、176、272、314、402位和489位出現(xiàn)了比較一致的氨基酸替代，而且具有鵝源NDV所特有的973位和1 249位Rsa I位點(diǎn)，這是需要重視和更多分離株分析驗(yàn)證的問題，在后面的NDV與感染宿主的關(guān)系中再詳細(xì)闡述。張?zhí)璧萚14]在連續(xù)多批發(fā)病的鴨場(chǎng)分離的NDV具有強(qiáng)毒株特征的F基因裂解位點(diǎn)氨基酸序列，然而推導(dǎo)疑似為基因II型， 而在F基因高變區(qū)4～121位氨基酸又與基因Ⅱ型不同， 其17位點(diǎn)氨基酸為I，而基因Ⅱ型為V。

NDV毒力的決定因素絕不僅僅限于F基因的差距，這需要更加深入的研究。有研究表明，病毒F蛋白的細(xì)胞融合作用需要HN蛋白的輔助作用，且對(duì)于HN蛋白有很強(qiáng)的特異性要求，只有F蛋白與同源性HN蛋白共表達(dá)，才能夠引起細(xì)胞融合反應(yīng)?？傮w而言，目前對(duì)F基因結(jié)構(gòu)功能的研究還太少，對(duì)于NDV基因型和致病性的很多研究基于F基因序列的變化，所以對(duì)于F基因序列氨基酸的變化、不同宿主NDV的F基因的比較、其他功能蛋白與F蛋白的協(xié)同作用機(jī)理研究十分關(guān)鍵，這方面無疑需要更為充分的數(shù)據(jù)。

2.3 HN基因 HN蛋白是一種四聚體寡聚糖蛋白，位于NDV囊膜外表面，具有血球凝集(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)活性，也就是兼具識(shí)別并結(jié)合細(xì)胞膜上的唾液酸受體以及破壞這種結(jié)合的活性[19]。HN基因開放閱讀框長(zhǎng)度為1 716 bp，編碼571個(gè)氨基酸；HN和F基因是NDV基因組中變異最大的，這種改變被認(rèn)為是造成免疫失敗的主要原因，也是目前研究HN基因的重要方面。

HN蛋白只有4個(gè)位點(diǎn)能被糖基化(119、341、433位和481位)，這些位點(diǎn)在所有NDV株中是保守的，而HN蛋白上的5個(gè)抗原區(qū)(191～201、345～353、513～521、494位和569位)及其鄰近氨基酸位點(diǎn)(203、342、494～495、508～509、514位和570位) 的變異是最為關(guān)鍵，特別是新近分離株與疫苗株的差異，這種差異會(huì)導(dǎo)致NDV與單抗反應(yīng)性下降，從而出現(xiàn)免疫逃避[20]。羅宇宏等[10]比較其分離株HN蛋白的變化發(fā)現(xiàn)，其分離株與基因Ⅶd亞型毒株一致而與疫苗株在抗原區(qū)494位和569位以及鄰近氨基酸位點(diǎn)發(fā)生變異。

HN蛋白第347位氨基酸E-K的變異是近年來NDV毒株的一個(gè)新特點(diǎn)，345～353位氨基酸是HN蛋白上的線性表位區(qū)，是重要的受體結(jié)合區(qū)域[21]，段志強(qiáng)等[22]對(duì)5株鴨源NDV強(qiáng)毒株的研究發(fā)現(xiàn)，HN蛋白功能性氨基酸位點(diǎn)均高度保守，其中3株出現(xiàn)線性表位區(qū)E347K的突變。還有其他研究引起鴨群發(fā)病的NDV毒株HN蛋白發(fā)生了V9M、N323D、E331K和V514I的氨基酸突變，這些突變位點(diǎn)與細(xì)胞膜融作用的影響以至于對(duì)鴨的致病性的變化需要進(jìn)一步的研究證實(shí)；此外還有研究表明，F(xiàn)-HN和HN-L間隔區(qū)序列的長(zhǎng)度與病毒致病力有相關(guān)性。

目前國(guó)內(nèi)已有構(gòu)建攜帶HN基因穩(wěn)定遺傳和表達(dá)的重組鴨腸炎病毒，然而這方面的報(bào)道還太少。對(duì)于HN蛋白的功能研究需要進(jìn)一步驗(yàn)證，在功能區(qū)作用驗(yàn)證的基礎(chǔ)上研究這種變化帶來的影響，以及驗(yàn)證與其他蛋白的協(xié)同作用，是對(duì)NDV防控的重要基礎(chǔ)研究。

2.4 NP蛋白 NP蛋白是由489個(gè)氨基酸殘基組成的單股多肽，是鴨NDV核衣殼結(jié)構(gòu)蛋白的主要成分，是病毒粒子中含量最豐富的蛋白，其N端結(jié)合RNA，高度保守，C端含有磷酸化位點(diǎn)和抗原決定簇位點(diǎn)。由于毒株間NP基因高度保守，且具有很好的免疫原性，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，用于新城疫的臨床診斷和疫苗免疫監(jiān)測(cè)。

研究認(rèn)為，NP基因的tuRNA的合成對(duì)NDV的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制是必要的，但是對(duì)NP蛋白的研究并不深入。有報(bào)道以NP蛋白為免疫原，獲得2株雜交瘤細(xì)胞株，均可以識(shí)別NP蛋白的線性表位，MAb為IgG1型抗體的雜交瘤細(xì)胞株能與NP蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，而分泌MAb為IgM型抗體的雜交瘤細(xì)胞株卻不能[23]。因此，針對(duì)NP蛋白制備的單克隆抗體(MAb)特點(diǎn)的需要更多的研究，用MAb建立ELISA方法的應(yīng)用需要更多的數(shù)據(jù)驗(yàn)證；同時(shí)NP蛋白不具有免疫保護(hù)作用，這對(duì)于我們從多個(gè)方面更為有效評(píng)價(jià)NDV的免疫效果提出要求。

2.5 其他基因 P基因轉(zhuǎn)錄的病毒mRNA編碼P、V和W 3種蛋白，在NDV感染過程中分別占68%、29%和2%，V蛋白和W蛋白雖然表達(dá)量不高，但在病毒的復(fù)制中發(fā)揮著不可替代的作用。V蛋白和W蛋白通過P基因在編輯過程中非模版G的插入，產(chǎn)生閱讀框位移+1和+2的mRNA而編碼，因此3種蛋白具有共同的N端部分和不同的C端部分[24]，這種結(jié)構(gòu)使其需要3種抗體區(qū)分其表達(dá)，而且mRNA的表達(dá)不穩(wěn)定性使各種基因型NDV表達(dá)的V蛋白和W蛋白氨基酸同源性低，從而難以獲得適用的檢測(cè)抗體，為V蛋白和W蛋白功能的研究帶來很大難度。

已有研究證實(shí)，麻疹病毒等副黏病毒的V蛋白具有介導(dǎo)病毒免疫逃逸的功能，在IFN信號(hào)抑制、雙鏈RNA信號(hào)抑制、凋亡抑制等方面發(fā)揮作用[25]。對(duì)NDV蛋白的研究證實(shí)了V蛋白是一種毒力因子，通過干擾IFN信號(hào)通路，拮抗宿主的抗病毒反應(yīng)，對(duì)病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制和致病性發(fā)揮重要作用。研究認(rèn)為，V蛋白的C端結(jié)構(gòu)域(CTD)介導(dǎo)了抗IFN活性，該區(qū)域?yàn)楸Ｊ氐陌腚装彼岣患瘏^(qū)，通過近年來的研究發(fā)現(xiàn)，NDV不同毒株的CTD氨基酸同源性差異很大[26]。此外還有研究發(fā)現(xiàn)，V蛋白的不同與毒株的宿主嗜性有一定關(guān)系，傅強(qiáng)等[27]報(bào)道不同NDV毒株V蛋白多克隆抗體在不同宿主細(xì)胞中的表達(dá)差異很大，宿主細(xì)胞對(duì)V蛋白的抑制，與NDV對(duì)細(xì)胞的噬性和感染能力有很大關(guān)系。

M蛋白位于病毒囊膜內(nèi)側(cè)面，是構(gòu)成囊膜的支架的組成部分，在病毒的裝配中、調(diào)節(jié)RNA 合成、抑制宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)等發(fā)揮作用[28]；有研究發(fā)現(xiàn)，基因起始、終止、基因間隔區(qū)完全相同，NP、P、M、F高度相似的NDV強(qiáng)毒株和疫苗株，差異集中于HN和L蛋白上。Subrat等(2008)用反向遺傳技術(shù)將強(qiáng)毒株替換為疫苗株LaSota的L基因，獲得的重組NDV病毒繁殖速度及致病性顯著高于替換前的強(qiáng)毒株。

3 鴨NDV與感染宿主之間的關(guān)系

我們最為關(guān)注的應(yīng)當(dāng)是NDV的與宿主之間關(guān)系的變化，雖然流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示NDV在鴨群中的發(fā)病率上升，分子生物學(xué)顯示了基因VIId亞型在鴨群中的優(yōu)勢(shì)，我們還是要從更多的報(bào)道中梳理NDV與宿主之間的關(guān)系，并以此找到有效阻斷NDV流行的方法。普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，水禽陸禽的雙向傳播和混合飼養(yǎng)是NDV難以防控的關(guān)鍵，鴨等水禽是NDV產(chǎn)生高致病性的重要環(huán)節(jié)，其長(zhǎng)期帶毒、排毒為NDV提供了生存空間，病毒和宿主細(xì)胞之間的博弈改變著NDV的分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)，并通過改變獲得逃避免疫的能力。

目前對(duì)于不同NDV分離株在鴨、雞群中的致病性研究基本一致，NDV強(qiáng)毒株對(duì)雞具有很高的致病性并在雞體呼吸、消化系統(tǒng)等多種組織器官中增殖并引起各種組織損傷，而在鴨體內(nèi)只是局限在幾個(gè)內(nèi)臟組織內(nèi)復(fù)制并不具備致病性；來源于雞和鴨的強(qiáng)毒NDV分離株對(duì)雛雞的致病性都非常高，而雞源分離株對(duì)雛鴨的致病性顯著高于鴨源分離株，很多毒株對(duì)鴨感染性低或無癥狀感染[29-30]。對(duì)這種致病性差異，普遍認(rèn)為鴨源分離株是適應(yīng)了鴨體內(nèi)免疫系統(tǒng)而能在其體內(nèi)存活，當(dāng)傳播到雞體內(nèi)時(shí)，又具備了感染性。Otim等研究發(fā)現(xiàn)，從鴨體內(nèi)分離的NDV強(qiáng)毒株可以感染雞并使雞群產(chǎn)生高致死率；于圣青等[18]研究發(fā)現(xiàn)，野生水禽中無毒力的毒株在雞群中傳播時(shí)，變?yōu)楦咧虏⌒远局?，這種變化是隨著不斷地傳代逐漸發(fā)生的，至第9代時(shí)，380位和392位發(fā)生兩個(gè)G-A突變，第112位和115位裂解位點(diǎn)發(fā)生Gly-Lys的變異，產(chǎn)生二元堿性氨基酸，從而完成F基因裂解序列由E-R-Q-E-R/L變?yōu)镵-R-Q-K-R/F的變化。其他對(duì)雞源、鴨源病毒F蛋白氨基酸變異的研究也驗(yàn)證了這種致病性的變化。

對(duì)感染組織的研究認(rèn)為，腦組織是決定NDV致病性的最重要器官，通過腦內(nèi)傳代引起F基因核苷酸的第397位點(diǎn)G-T的變化，導(dǎo)致F蛋白第117位點(diǎn)Leu-Phe的變化，研究發(fā)現(xiàn)，這種Fl蛋白N端的氨基酸變化會(huì)阻斷細(xì)胞內(nèi)蛋白酶的裂解反應(yīng)，從而發(fā)生致病性的改變。對(duì)NDV連續(xù)傳代研究發(fā)現(xiàn)，弱毒株經(jīng)腦內(nèi)傳代后，變成高致病性病毒。總體而言，我們?nèi)匀狈哊DV在規(guī)?；B(yǎng)殖中自然感染的數(shù)據(jù)，缺乏在鴨、雞兩種主要宿主之間的遷移規(guī)律方面的信息，鴨源NDV對(duì)雞群的致病性和雞源NDV對(duì)鴨群的致病性之間的關(guān)系需要更多的驗(yàn)證，我們應(yīng)當(dāng)從NDV的感染機(jī)制與宿主細(xì)胞之間的關(guān)系上探索。

在宿主和NDV之間的關(guān)系研究任重道遠(yuǎn)，顯然鴨、鵝、雞具有先天性免疫基因的差異，鴨等水禽細(xì)胞具備抵抗NDV早期感染的能力，然而近年來發(fā)生的水禽感染率升高的原因亟待探索，有研究認(rèn)為，鳥類是這種宿主轉(zhuǎn)變的媒介，由鳥類傳染到水禽的NDV發(fā)生15 186-15 192 nt的轉(zhuǎn)變和F基因101位K和121位V的變異，從而導(dǎo)致宿主致病性的變化，這種可能性需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。水禽與雞群使用同類疫苗免疫是否導(dǎo)致健康帶毒鴨群NDV發(fā)生變化，從而出現(xiàn)致病性的變化，還是鳥類等宿主的媒介作用，都需要更多的數(shù)據(jù)和研究證實(shí)。

4 鴨NDV研究重點(diǎn)與防治前景

雖然沒有證據(jù)證實(shí)高致病性毒株源于活疫苗的使用，但是對(duì)于無致病性NDV毒株的傳代發(fā)生的基因?qū)用娴淖儺愐约爸虏×Φ淖兓?，必須高度重視。F裂解位點(diǎn)突變株導(dǎo)致致病性變化以外，經(jīng)腦組織傳代而F裂解位點(diǎn)并未發(fā)生改變的情況下，也可以出現(xiàn)致病性的增強(qiáng)；病毒在感染靶動(dòng)物體內(nèi)的增殖會(huì)不斷增加其致病力，甚至出現(xiàn)超強(qiáng)毒株，這對(duì)于副黏病毒來說并非難事。因此我們對(duì)于NDV的防治要重新考慮，特別是在水禽養(yǎng)殖中的免疫要系統(tǒng)考慮，一方面要保證鴨等水禽具有對(duì)NDV的抵抗力，選用適用于水禽的NDV毒株，使水禽不再成為儲(chǔ)存和改造病毒的基地；另一方面對(duì)于鴨群排毒的監(jiān)測(cè)要加強(qiáng)，特別是監(jiān)測(cè)鴨群排毒、雞群感染分離株、疫苗株的比較，對(duì)新城疫活疫苗的要特別加強(qiáng)標(biāo)記和監(jiān)測(cè)。

NDV免疫的減負(fù)勢(shì)在必行，為追求免疫效果，商品代雞場(chǎng)，特別是商品代蛋雞場(chǎng)頻繁、高劑量免疫ND疫苗。而目前ND疫苗株與流行株抗原性差異造成了諸多問題，大量雞群處于高ND抗體水平，但持續(xù)向環(huán)境排毒[31]，當(dāng)環(huán)境當(dāng)中的病毒量達(dá)到一定程度以后，又出現(xiàn)非典型癥狀，然后再通過免疫提升抗體維持穩(wěn)定，因此，必須篩選與流行株的抗原性一致的毒株，使雞群維持在合理的抗體水平，并有效降低排毒量。

前文已敘述基因型分析存在的問題，對(duì)于NDV的免疫評(píng)價(jià)，更多的應(yīng)當(dāng)回歸到傳染病和免疫學(xué)研究的基本原理，充分開展疫苗毒株的抗原性研究，應(yīng)當(dāng)改變單純特異性免疫產(chǎn)生抗體水平的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，轉(zhuǎn)變?yōu)榉翘禺愋悦庖叩谋O(jiān)測(cè)、排毒的監(jiān)測(cè)等多個(gè)方面的考慮，用大量的臨床數(shù)據(jù)證實(shí)，并歸入新獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的審批中。

既然鴨對(duì)于NDV具有天然的抗感染能力，在宿主細(xì)胞與NDV感染機(jī)制之間的研究需要更多的關(guān)注。從分子生物學(xué)的角度，研究水禽對(duì)于NDV先天性免疫基因的功能機(jī)制，利用基因標(biāo)記、反向遺傳技術(shù)揭示宿主細(xì)胞與NDV感染過程中關(guān)鍵基因的變化，以至于對(duì)于基因型的影響和宿主親嗜性的變化，綜合系統(tǒng)性的數(shù)據(jù)分析揭示不同宿主之間NDV的內(nèi)在關(guān)系，才能從根本上制定防控NDV的綜合措施。

[1] 吳艷濤，倪雪霞，萬洪全，等．我國(guó)部分地區(qū)不同動(dòng)物來源新城疫病毒的分子流行病學(xué)研究[J]．病毒學(xué)報(bào)，2202，18(3)：264-269．

[2] Liu X F，Wan H Q，Ni X X，eta1．Pathotypical and genotypical characterization of strains of Newcastle disease viruses isolated from outbreaks in chicken and goose flocks in some regions of China during 1985-2001[J]．Archives of Virology，2003，148：1 387-1 403．

[3] 胡北俠， 黃艷艷，路希山，等．規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)種鴨新城疫和A型流感病毒帶毒監(jiān)測(cè)研究[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(6)：205-206．

[4] 王玨， 仇旭升， 戴亞斌，等．華東地區(qū)健康水禽攜帶新城疫病毒情況調(diào)查[J]．中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2013，21(6)：19-25．

[5] 劉華雷，鄭東霞，孫承英，等．1997-2005年中國(guó)水禽新城疫分子流行病學(xué)特點(diǎn)分析[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，40(1)：145-148．

[6] 蔡麗麗，吳志新，王俊峰，等． 一株基因Ⅵ型鴨新城疫病毒F基因的克隆及序列分析[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)， 2010，37(5)：90-96．

[7] Kang Y，Xiang B，Yuan R，etal．Phylogenetic and Pathotypic Charactezation of Newcastle Disease Viruses Circulating in South China and Transmission in Different Birds[J/OL]．Front Microbiol[2016-06-06][J].http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Pmc/articles/PMC4746259/pdf/fmicb-07-00119.pdf，2016，7：119．

[8] Kattenbeh J A，Stevens M P，Gould A R．Sequence variation in the Newcastle disease virus genome[J]．Virus Res，2006，116(1-2)：168-184．

[9] Miller P J，Decanini E L，Afonso C L．Newcastle disease：evolution of genotypes and the related diagnostic challenges[J]．Infect Genet Evol，2010，10(1)：26-35．

[10] 羅宇宏，陳強(qiáng)，阮涌，等．鴨源新城疫病毒SS 1株全基因序列測(cè)定及遺傳進(jìn)化分析[J]．中國(guó)家禽，2016，38(12)：51-55．

[11] 翟文棟，陳立功，董兵，等．鴨新城疫病毒河北分離株融合蛋白基因的分子特性分析[J]．河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36(5)：94-99．

[12] 孫杰，刁有祥，李建俠，等 ．10株鴨源新城疫病毒的分離鑒定及F基因遺傳進(jìn)化分析[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，41(8)：1 054-1 060．

[13] 路振香，張訓(xùn)海，郭偉娜，等．雞鴨鵝新城疫病毒毒力及生物學(xué)特性的研究[J]．中圍獸醫(yī)雜志，2016，52(7)：6-8．

[14] 張?zhí)瑁醣?，王裕，等．鴨新城疫病毒山東株的分離鑒定[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)， 2009， 36(7)：148-151．

[15] 伊惠，胡北俠，楊少華，等．基因Ⅶ型新城疫病毒對(duì)鴨和SPF雞致病性比較研究[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，44(12)：1 982-1 988．

[16] Anis Z，Morlta T，Azuma K，etal．Comparative study on the pathogenesis of the generated 9a5b Newcastle disease virus mutant isolate between chickens and waterfowl[J]．Vet Pathol，2013，50(4)：638-647．

[17] Dai Y，Liu M，Cheng X，etal．Infectivity and pathogenicity of Newcastle disease virus sIrains of different avian origin and different virulence for Mallard ducklings[J]．Avian Dis，2013，57(1)：8-14．

[18] 于圣青，丁鏟， Noriko Kishida，等．新城疫病毒某水禽分離株經(jīng)雞體傳代后由非致病型轉(zhuǎn)變?yōu)樗侔l(fā)型的研究[J] ．中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，25(1)：59-64．

[19] Guo H，Liu X，Hart Z，eta1．Phylogenetic analysis and comparison of eight strains of pigeon paramyxo virus type 1(PPMV-1)isolated in China between 2010 and 2012[J]．Arch Viml，2013，158(6)：1 121-1 131．

[20] Hu S L，Wang T Y，Liu X F，etal．Identification of a variable epitope on the Newcastle disease virus hemagglutinin neuraminidase protein[J]．Vet Microbiol，2010，140(1-2)：92-97．

[21] Wu S，Huang W P，Wang W W，eta1．Geneticvariation analysis of subgenotypeⅦd Newcastle disease viruses isolated from Jiangsu Province in 2008[J]．Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2009，40(12)：1 782-1 787．

[22] 段志強(qiáng)，許厚強(qiáng)， 嵇辛勤，等． 貴州省鴨源新城疫病毒強(qiáng)毒株的遺傳變異分析及致病性研究[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2016， 47(8)：1 623-1 634．

[23] Rabu A，Tan W S，,Kho C L，etal．Chimeric Newcastle disease virus nucleocapsid with parts of viral hemagglutinin-neuraminidase and fusion protein[J]．Acta Virol，2001，46(4)：211-217．

[24] Kulkami S，Volchkova V，Basler C F，etal．Nipah virus edits its P gene at high frequency to express the V and W proteins[J]．J Virol，2009，83(8)：3 982-3 987．

[25] Horvath C M．Weapons of STAT destruction．Interferon evasion by paramyxovirus V protein[J]．Eur J Biochem，2004，271(23-24)：4 621-4 628．

[26] Shaw M L，Garcia-Sastre A，Palese P，etal．Nipah virus V and W proteins have a common STATl-binding domain yet inhibit STATl activation from the cytoplasmic and nuclear compartments，respectively[J]．J Virol，2004，78(11)：5 633-5 641．

[27] 傅強(qiáng)，仇旭升，陳素娟，等．不同NDV株V蛋白多克隆抗體的制備和初步應(yīng)用[J]．中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35(9)：702-706．

[28] Homer D P，Lori W M，Mark E P，etal．Requirements for the assembly and release of Newcastle disease virus-like particles[J]．Journal of Virology，2006，80 (22)：11 062-11 073．

[29] 劉開春，孟春春，陳素娟，等．兩株不同宿主來源的基因Vll型新城疫病毒的生物學(xué)特性比較及全基因組序列分析[J]．中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，37(2)：89-92．

[30] Njagi L W，Mbuthia P G，Nyaga P N，etal．Viral nucleoprotein localization and lesions of New castle disease in tissues of indigenous ducks[J]．Trop Ahim Health Prod，2012，44(4)：747-750．

[31] Ezema W S，Okoye J O，Nwanta J A．LaSota vaccination may not protect against the lesions of velogenic Newcastle disease in chickens[J]．Trop Anita Health Prod，2009，41(4)：477-484．