陳青

(貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院化學(xué)系，貴州 貴陽(yáng)550025)

刺梨、金櫻子、紅子種子油抗氧化活性研究

陳青

(貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院化學(xué)系，貴州 貴陽(yáng)550025)

目的 對(duì)刺梨、金櫻子及紅子種子油進(jìn)行抗氧化活性研究。方法 利用索氏提取器及超聲提取法，以石油醚(60～90 ℃)為提取溶劑對(duì)刺梨、金櫻子及紅子種子油進(jìn)行提取，采用DPPH法對(duì)種子油的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 刺梨、金櫻子及紅子種子油對(duì)DPPH自由基的清除率具有量效關(guān)系，均對(duì)DPPH有顯著清除作用；采用兩種提取方法獲得的種子油清除率大小順序均為紅子<刺梨<金櫻子；超聲提取獲得的種子油清除率小于索氏提取獲得的種子油。結(jié)論 索氏提取獲得的金櫻子種子油抗氧化活性最高。

刺梨； 金櫻子； 紅子； 抗氧化活性

刺梨、金櫻子及紅子果、葉和花都有一定藥效。刺梨果實(shí)味酸、澀，性平，用于治療消化不良，腸炎，痢疾、胃痛、胃潰瘍等疾病[1]；紅子果實(shí)入藥可健脾消積、活血止血，葉、根入藥可清熱解毒、收斂止瀉、治瘡瘍[2]；金櫻子果實(shí)味酸、甘，性平，用于治療腎虛尿頻，帶下，脾虛泄瀉、子宮脫落等疾病[3]。據(jù)文獻(xiàn)[4-6]報(bào)道，刺梨、金櫻子及紅子的果實(shí)富含維生素(特別是維生素C)以及氨基酸、 微量元素等幾十種營(yíng)養(yǎng)成分；它們的種子油富含亞油酸等不飽和脂肪酸，具有較高的食用和藥用保健作用。此外，還從三種植物中分離出鞣質(zhì)、黃酮、皂苷、多糖和萜類等多種化合物，具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和預(yù)防腫瘤等作用[7]。目前對(duì)刺梨、金櫻子及紅子種子油的研究主在化學(xué)成分和提取工藝的優(yōu)化基礎(chǔ)上，種子油的抗氧化活性報(bào)道很少。鑒于此，筆者采用DPPH法對(duì)刺梨、金櫻子及紅子種子油的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定，以期為三種資源開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 儀器：SL-202型電子天平(上海長(zhǎng)橋精密科學(xué)儀器有限公司)數(shù)控超聲波清洗器(浙江托普儀器有限公司)，DZF型真空干燥器 (北京科偉永興儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，800離心機(jī)(上海浦東物理光學(xué)儀器廠)，UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海尤尼柯儀器有限公司)。二苯代苦味?；杂苫?1,1-pheny-2-picrylhydrazyl，DPPH，上海阿拉丁試劑有限公司，分析純)、95%乙醇、甲醇、石油醚(沸點(diǎn)60～90 ℃)、正己烷、乙醚、丙酮、苯、氫氧化鈉均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 (1)種子油的提?。簻?zhǔn)確稱取刺梨、金櫻子及紅子種子各10 g于索氏提取器中，加入石油醚(60～90 ℃)100 mL,液料比為1∶10(W∶V)，提取時(shí)間為3 h，80～85 ℃進(jìn)行提取，結(jié)束后真空抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑。將提取物放入干燥箱，真空干燥至恒重，得到種子油。按下列公式：提取率=提取籽油質(zhì)量/種子質(zhì)量×100%，計(jì)算種子得油率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，刺梨、金櫻子及紅子種子平均得油率分別為：5.3%、4.9%及6.1%。準(zhǔn)確稱取10 g種子于圓底燒瓶中，加入石油醚(60～90 ℃)50 mL，液料比為1∶10(W∶V)，超聲溫度為35 ℃，超聲時(shí)間為60 min，超聲功率為120 w，進(jìn)行超聲提取。超聲結(jié)束后減壓抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑至較小體積。將提取物放入真空干燥箱，真空干燥至恒重，得到種子油。按下列公式：提取率=提取籽油質(zhì)量/種子質(zhì)量×100%，計(jì)算種子得油率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，刺梨、金櫻子、紅子種子平均得油率分別為：6.3%、4.5%、6.1%。(2)種子油抗氧化活性測(cè)定： DPPH是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，其溶液具有特征的紫紅色團(tuán)吸收峰，當(dāng)存在自由基清除劑時(shí)，由于與其單電子配對(duì)而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其所接受的電子數(shù)成定量關(guān)系，因而可用分光法進(jìn)行定量分析。準(zhǔn)確稱取0.0025 g DPPH，用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，DPPH濃度為0.25 mg/mL，避光保存(0～4 ℃)。 參考文獻(xiàn)[8-9]方法，將質(zhì)量濃度為114 mg/mL的索氏提取器提取的刺梨種子油用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇溶劑溶解，然后將溶液稀釋成不同濃度梯度，作為待測(cè)樣品溶液。在試管中依次加入0.25 mg/mL DPPH的乙醇溶液2 mL，種子油溶劑2 mL，混勻后反應(yīng)20 min，3 500 r/min 離心5 min后取上清液，于515 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，記為Ai；0.25 mg/mL DPPH的乙醇溶液2 mL和2 mL無(wú)水乙醇混合測(cè)定吸光度， 記為Aj；2 mL刺梨種子油和2 mL計(jì)算無(wú)水乙醇溶劑混合測(cè)定吸光度，記為A0；注意測(cè)定時(shí)都要選無(wú)水乙醇溶劑作為參比液。利用下面公式計(jì)算清除率(也叫抑制率)：清除率Y%= [1- ( Ai-Aj/ A0)]×100。公式中引入Aj是為了消除添加物的顏色干擾。再將此濃度溶液稀釋成一系列濃度，同上操作，得出各個(gè)濃度下的抑制率，利用系列溶液的抑制率繪制曲線，由曲線讀取DPPH自由基清除率為50%時(shí)所需刺梨種子油溶液濃度，計(jì)為IC50，以IC50值表示種子油清除DPPH自由基能力，IC50值越小，表示清除能力越強(qiáng)。其它種子油樣品(包括超聲法提取的種子油)實(shí)驗(yàn)操作與刺梨種子油一樣。

2 結(jié)果與討論

按上述試驗(yàn)條件，隨著種子油濃度的增加，清除DPPH 自由基的能力均呈上升趨勢(shì)，清除率與種子油的濃度成量效關(guān)系。其中，采用超聲提取法提取得到的種子油，清除率在一定濃度下都能達(dá)到90 %以上；采用索氏提取得到的種子油，清除率在一定濃度下都能達(dá)到80 %左右。因此，三種種子油對(duì)DPPH自由基均具有較強(qiáng)的清除能力。對(duì)樣品進(jìn)行清除DPPH活性的測(cè)定，DPPH隨種子油的濃度變化關(guān)系圖。見(jiàn)圖1及圖2。

圖1 索氏提取刺梨、金櫻子、紅子種子油DPPH 清除率 圖2 超聲提取刺梨、金櫻子、紅子種子油DPPH 清除率

由以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可計(jì)算出刺梨、金櫻子、紅子種子油各自的IC50值，見(jiàn)表1。

表1 刺梨、金櫻子、紅子種子油的IC50值

由表1可以看出，種子油的不同提取方式對(duì)其IC50值有很大影響。無(wú)論是刺梨、金櫻子還是紅子種子，采用兩種提取方法獲得的同一種子油，它們的IC50數(shù)值不同，索式提取的種子油IC50值比超聲提取的種子油IC50值小。表現(xiàn)獲得的種子油，索式提取的種子油清除DPPH自由基能力更強(qiáng)。對(duì)于以上三種種子，采用同一提取方式得到的種子油，其IC50數(shù)值大小順序均為紅子>刺梨>金櫻子，因此，三種種子清除率大小順序?yàn)榧t子<刺梨<金櫻子。綜合提取方法和抗氧化測(cè)定結(jié)果，采用索式提取法提取的金櫻子種子油抗氧化活性最強(qiáng)。刺梨、金櫻子以及紅子種子油中都含有較高比例的不飽和脂肪酸如亞油酸、亞麻酸等，這可能是三種種子油具有較好抗氧化活性的主要原因。不同提取方法獲得的種子油在抗氧化方面表現(xiàn)出較大的差異，說(shuō)明提取方法與其生物學(xué)效能密切相關(guān)。在今后的研究工作中，有必要對(duì)不同提取方法得到的種子油化學(xué)組成以及其中含有的抗氧化物質(zhì)進(jìn)行深入研究。

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Study on the antioxidant activities in the seed oil of Rosa roxburghii Tratt and Rosa Laevigata and pyracantha fortuneana

ChenQing.

DepartmentofChemistry,SchoolofChemistryandChemicalEngineering,GuizhouUniversity,Guiyang550025,China

Objective To conduct the study the antioxidant activities of the seed oil from Rosa roxburghii Tratt, Rosa Laevigata and pyracantha fortuneana. Methods The seed oil was extracted by using Soxhlet & ultrasonic extraction, and petroleum ether (60 ～ 90℃) as solvent, antioxidant activity was determined by means of DPPH. Results Three seed oils showed obvious antioxidant effect and dose-effect relationship. The free radical scavenging abilities of three seed oils showed the range of pyracantha fortuneana < Rosa roxburghii Tratt < Rosa Laevigata and the antioxidant activity of oil extracted by Soxhlet was higher than that of ultrasonic. Conclusion The seed oil of pyracantha fortuneana extracted by Soxhlet extractor method showed the most outstanding antioxidant activity than the other two.

Rosa roxburghii Tratt； Rosa Laevigata Michx； Pyracantha fortuneana Maxim

社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目[黔科合SY字(2011)3086]

R914；TS225; TQ646

A

1000-744X(2016)06-0587-02

2016-04-25)