黃金燕

(建始縣動物疫病預(yù)防控制中心,湖北建始 445300)

高致病性禽流感實驗室檢測的風(fēng)險分析及預(yù)防

黃金燕

(建始縣動物疫病預(yù)防控制中心,湖北建始 445300)

禽流感病毒的實驗室分析對于禽流感的科學(xué)防控具有極為重要的作用和意義。但是，基于這項工作的特殊性，為了生物安全，一定要做好實驗操作風(fēng)險分析，通過科學(xué)預(yù)防可以將風(fēng)險降到最低，以保證各項工作的順利進(jìn)行，以保證實驗人員的安全。作者分析了高致病性禽流感實驗室檢測的風(fēng)險，并就實驗室禽流感檢測風(fēng)險預(yù)防做了深入、細(xì)致的研究與分析，供讀者參考。

高致病禽流感 實驗室監(jiān)測風(fēng)險 分析 預(yù)防

高致病性禽流感，簡稱HPAI，是一種以禽類感染為主的急性傳染病，其主要的病原就是正粘病毒科A型流感病毒，傳播迅速、危害嚴(yán)重、死亡率高，世界衛(wèi)生組織將其列為一類動物疫病。近些年來，在家禽分離出了H7N9亞型高致病性禽流感病毒，各地的獸醫(yī)實驗室也加快了對高致病性禽流感的血清學(xué)及病原學(xué)的檢測工作?；谶@項工作的特殊性，從事檢測工作的實驗室人員一定要做好自身的防護(hù)，保證自身不被感染。

1 安全級別以及檢驗活動的具體要求

通常情況下，實驗室生物安全防護(hù)水平是根據(jù)執(zhí)行操作生物因子的潛在危害程度以及能夠采取的防護(hù)措施而進(jìn)行等級劃分的，根據(jù)相關(guān)的條例和準(zhǔn)則來看，從事高致病性禽流感實驗室檢測工作必須要嚴(yán)格執(zhí)行生物安全I(xiàn)I級的要求，尤其是在進(jìn)行核酸檢測工作時，所有的樣本必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，任何超出實驗室安全等級的操作活動都不可以進(jìn)行。

2 風(fēng)險分析和預(yù)防措施

目前，高致病性禽流感的主要檢測項目就是血凝實驗和血凝抑制試驗，而圍繞著上述兩項檢測，可能涉及的感染風(fēng)險包括個人的防護(hù)、實驗過程中實驗人員和實驗樣本、實驗樣本和實驗環(huán)境以及實驗樣本之間的污染風(fēng)險等。

2.1 個人防護(hù)

生物安全是實驗室安全的核心，而檢測人員自身的安全自然是居于首要位置。對于高致病性禽流感而言，呼吸道傳染是最為主要的傳染途徑，這就意味著在實際進(jìn)行實驗操作的過程中，一旦出現(xiàn)帶有病毒液體的飛濺或有氣溶膠形成的話，很容易讓操作人員居于感染的風(fēng)險之下，因此，在進(jìn)行檢測的時候一定要佩戴好防護(hù)性能良好的手套、口罩以及帽子和眼睛瞪，如果條件允許的話，最好是能夠佩戴上防化學(xué)飛濺面罩。等到實驗完成之后，要將上述用品及時摘掉同時放入到垃圾袋中，進(jìn)行集中的高壓滅菌處理，所穿的工作服要在紫光燈下進(jìn)行嚴(yán)格消毒。另外需要注意的是，在實驗內(nèi)要長期準(zhǔn)備有濃度適當(dāng)?shù)木凭约凹本认涞?，并且定期進(jìn)行檢查，看其是否保存良好，是否在保存期內(nèi)。

2.2 樣本的接收、處理和保存

樣本需要進(jìn)行接收和轉(zhuǎn)運，這樣就對包裝提出了嚴(yán)格的要求，一旦出現(xiàn)密封不好或者是包裝不嚴(yán)的現(xiàn)象，就很容易造成液體的泄露，導(dǎo)致一些感染性材料等具有危險性的因子進(jìn)入到實驗室中去。因此，我們在對樣本進(jìn)行處理的時候，一定要嚴(yán)格按照相關(guān)的操作規(guī)程來執(zhí)行，通過專門的傳遞窗口做好樣本的轉(zhuǎn)運處理。還有一點特別需要注意的是，轉(zhuǎn)運的專用窗口需要定期進(jìn)行殺菌消毒，一般是采用紫外線的消毒方式。

另外，在進(jìn)行樣本制作的時候，必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，不僅僅要做好詳細(xì)的記錄，同時要將其置于4℃的冰箱進(jìn)行保存，如果需要留樣的話，一定要保證盛放樣本的容器蓋擰緊，將其置于-20℃的冰箱中保存。等到操作完成以后，需要用含有適量氯的消毒劑對地面和臺面進(jìn)行消毒。

2.3 血凝試驗和血凝抑制試驗

在實驗的過程中，如果樣本呈現(xiàn)陽性，操作不當(dāng)?shù)脑挘苋菀讓?dǎo)致血清的外溢，進(jìn)而造成某種程度的污染。因此，在操作的過程中，對血清樣本進(jìn)行稀釋的話，要嚴(yán)格控制好力度，盡量避免氣溶膠的產(chǎn)生。等到實驗結(jié)束之后，就要進(jìn)行必要的消毒處理。

2.4 核酸檢測

主要方法就是PCR檢測儀檢測，主要的步驟包括提取核酸、PCR反應(yīng)體系的配置、運行以及對結(jié)果的分析等。操作人員除了要嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)定，還要做好工作服分區(qū)，在不同的實驗區(qū)域內(nèi)穿特定的工作服，避免交叉感染。

在進(jìn)行核酸提取的時候，檢測之間要進(jìn)行旋渦震蕩，時間大約為2分鐘到3分鐘，至于組織樣本需要實驗之前進(jìn)行研磨，必須在生物安全柜內(nèi)完成操作，以免導(dǎo)致不必要的污染。

在配置PCR體系的時候，一定要嚴(yán)格按照相關(guān)的規(guī)程進(jìn)行操作，否則，很容易導(dǎo)致實驗室環(huán)境受到嚴(yán)重的污染，導(dǎo)致嚴(yán)重的不良影響。

此外，如果PCR管的密封不好，那么很容易造成液體的泄露，進(jìn)而造成儀器污染，因此，在選用PCR管的時候，一定要選擇質(zhì)量好的產(chǎn)品，在上機(jī)操作之前，務(wù)必要保證其實密封完好的。

2.5 做好廢棄物質(zhì)的處理和實驗室的消毒工作

對于廢棄物質(zhì)，一定要集中進(jìn)行規(guī)范處理，對于儀器建議采用噴霧消毒劑消毒，地面消毒首先從外向內(nèi)進(jìn)行噴灑，之后再從內(nèi)向外重復(fù)進(jìn)行一次噴灑。

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