鄧瑞強(qiáng)

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院,山西太谷 030800)

復(fù)方中藥制劑對(duì)雞傳染性喉氣管炎的免疫增強(qiáng)作用

鄧瑞強(qiáng)

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院,山西太谷 030800)

通過(guò)對(duì)人工感染的蛋雛雞進(jìn)行藥物治療，來(lái)研究復(fù)方中藥制劑對(duì)其免疫影響。發(fā)現(xiàn)復(fù)方中藥制劑對(duì)人工感染蛋雛雞的免疫功能有增強(qiáng)作用，高劑量治療組和中劑量治療組的法氏囊指數(shù)極顯著高于感染對(duì)照組（P＜0.01），高劑量治療組的法氏囊指數(shù)與中劑量治療組差異不顯著（P＞0.05）。治療組的免疫球蛋白IgG數(shù)較感染對(duì)照組和健康組顯著增高（P＜0.05），而高劑量治療組與中劑量治療組差異不顯著（P＞0.05）。由此說(shuō)明“溫必清”可以提高對(duì)病雞傳染性喉氣管炎的免疫功能。

復(fù)方中藥 雞傳染性喉氣管炎 免疫

隨著養(yǎng)殖業(yè)的高速發(fā)展，畜禽疾病給養(yǎng)殖戶(hù)帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失，尤其是雞傳染性喉氣管炎。目前，主要依靠接種弱毒疫苗和滅活疫苗進(jìn)行預(yù)防，雖然起到了較好效果，但弱毒疫苗毒力普遍偏強(qiáng)，應(yīng)用后機(jī)體反應(yīng)強(qiáng)烈。因此，急需研制安全高效的新型疫苗以達(dá)到防治ILT的目的。

雞傳染性喉氣管炎臨床上以呼吸困難、咳嗽、?？瘸鰩а獫B出物為特征。典型病理變化為喉部和氣管黏膜腫脹、充血和出血。氣管腔內(nèi)有帶血的黏液，有的有酪狀滲出物，在氣管和喉頭形成管套，且易剝離，病的早期可見(jiàn)核內(nèi)包涵體。

本病在易感雞群內(nèi)傳播很快，感染率可達(dá)90%～100%；病死率為5%～70%，平均在10%～20%之間。在產(chǎn)蛋高峰期雞群的病死率較高。

現(xiàn)代研究表明，中草藥具有安全無(wú)害、無(wú)抗藥性、無(wú)殘留、無(wú)毒副作用等特點(diǎn)，同時(shí)，還能明顯地提高家禽的生產(chǎn)性能，改善肉蛋品質(zhì)，從而顯著增加了養(yǎng)禽業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，充分顯示了中草藥在防治禽病上的優(yōu)勢(shì)。中草藥的有效成分對(duì)動(dòng)物胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育有影響；促進(jìn)抗體的形成，提高抗體的抗體水平及機(jī)體免疫力；促進(jìn)血清抗體效價(jià)上升和延長(zhǎng)血清抗體時(shí)限；有的中草藥可參與補(bǔ)體激活及提高補(bǔ)體水平。還可促進(jìn)細(xì)胞免疫，提高吞噬細(xì)胞的流行性和淋巴細(xì)胞的功能。如多糖類(lèi)補(bǔ)益中藥具有整體的協(xié)調(diào)功能，其中以神經(jīng)、內(nèi)分泌與免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)為主，在促進(jìn)細(xì)胞免疫，提高非特異性免疫功能方面有顯著作用。另外，一些中草藥或其活性成分對(duì)機(jī)體免疫功能呈雙向調(diào)節(jié)作用，即劑量依賴(lài)性和功能依賴(lài)性雙向作用。

依據(jù)傳染性喉氣管炎的主要臨床表現(xiàn)，從中醫(yī)角度分析為濕熱蘊(yùn)結(jié)下焦、膀胱氣化失利、排尿不暢、尿液受熱煎熬，其中雜質(zhì)化為沉積物。治宜清熱解毒，降火利濕。運(yùn)用中草藥為防治雞病毒性疾病提供了新途徑，本實(shí)驗(yàn)擬在前期研究基礎(chǔ)上深入研究復(fù)方中藥對(duì)人工感染蛋雛雞傳染性喉氣管炎ILTV免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用14日齡的非免疫蛋雛雞150只，進(jìn)行適應(yīng)性觀(guān)察飼養(yǎng)7d后隨機(jī)分五組再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)毒株

ILT實(shí)驗(yàn)毒株由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室分離。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

復(fù)方中藥制劑，主要成分為大青葉、黨參、苦杏仁、前胡和黃芩等，為山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系實(shí)驗(yàn)獸藥總廠(chǎng)生產(chǎn)。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

淋巴細(xì)胞分離液，太原力普科貿(mào)有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基（10×1L），Gibco進(jìn)口分裝；臺(tái)盼藍(lán)，太原力普科貿(mào)有限公司；植物凝集素（PHA），SigmaL分裝；大腸桿菌脂多糖（LPS），SigmaL進(jìn)口分裝；小牛血清，杭州四季青有限公司；肝素鈉（粉末）；噻唑藍(lán)（MTT），SigmaL進(jìn)口分裝；Hepes[N-雙（2-羥乙基）哌嗪-N-2-（乙磺酸）]，SigmaL進(jìn)口分裝。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 ILTV種毒分離復(fù)壯與感染液的制備

將病雞的氣管組織用生理鹽水沖洗三次，放在無(wú)菌研缽中剪碎后加入石英砂研磨，隨后加入5倍量的生理鹽水（內(nèi)含200 200u/ml鏈霉素和200u/ml青霉素）制成乳劑后移入滅菌的離心管中，凍融三次，2000r/min離心，備用。

ILTV實(shí)驗(yàn)毒株使用前用雞胚復(fù)壯，經(jīng)尿囊腔接種于十日齡SPF雞胚，每胚0.1ml。37℃培養(yǎng)36～40h，收集雞胚尿囊液，加入青霉素1000IU/ml，鏈霉素1mg/ml，以2000r/min離心15min，取上清液作為病毒感染液備用。其EID50為10-6，攻毒時(shí)用100 EID50。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理

將21日齡非免疫蛋雛雞淘汰弱雞、病雞，隨機(jī)分為5組，每組30只，即感染對(duì)照組、健康對(duì)照組、高劑量治療組、中劑量治療組和低劑量治療組。健康對(duì)照組不攻毒不給藥。感染對(duì)照組和高劑量、中劑量、低劑量治療組在21日齡全部攻毒，感染對(duì)照組只攻毒不給藥，高劑量、中劑量、低劑量治療組分別進(jìn)行如下方法攻毒處理。在雞群出現(xiàn)典型臨床癥狀后分別按照表1中的治療方案給藥5～6d。

表1 實(shí)驗(yàn)分組及處理方法

1.2.3 樣品的采集

分別于攻毒后14、21、28d時(shí)清晨從每組中隨機(jī)抽取7只雞空腹稱(chēng)重，之后于心臟采血制備血清，保存待測(cè)；采血后進(jìn)行剖檢，取出法氏囊、脾臟，用濾紙吸凈表面水，稱(chēng)重。

1.2.4 指標(biāo)的檢測(cè)

（1）臟器指數(shù)計(jì)算公式為：

法氏囊指數(shù)（mg/g）=法氏囊濕重（mg）/體重（g）

脾指數(shù)（mg/g）=脾臟濕重（（mg）/體重（g）

（2）運(yùn)用免疫比濁法測(cè)定血清IgG。

2 結(jié)果與分析

2.1 攻毒后14、21、28d時(shí)各組法氏囊指數(shù)、脾臟指數(shù)（見(jiàn)表2、3）

表2 攻毒后14、21、28d時(shí)各組法氏囊指數(shù)

表3 攻毒后14、21、28d時(shí)各組脾臟指數(shù)

由表2可以看出法氏囊指數(shù)隨天數(shù)的增長(zhǎng)而增加，用藥后高劑量治療組和中劑量治療組的法氏囊指數(shù)顯著高于感染對(duì)照組（P＜0.01），高劑量治療組的法氏囊指數(shù)與中劑量治療組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于低劑量治療組（P＜0.05），低劑量治療組顯著高于感染對(duì)照組（P＞0.05）。在攻毒后28d，高劑量治療組和中劑量治療組的法氏囊指數(shù)接近于健康對(duì)照組。

由表3可以看出用藥后治療組的脾臟指數(shù)較感染對(duì)照組顯著下降，健康對(duì)照組較其極顯著下降。但脾臟指數(shù)隨天數(shù)的增加而增加。

2.2 攻毒后14、21、28d時(shí)各組雞血清中免疫球蛋白總量（見(jiàn)表4）

表4 攻毒后14、21、28d時(shí)血清中l(wèi)gG數(shù)

由表4可見(jiàn)，對(duì)于IgG，攻毒后第14d各組的抗體相近，隨后隨天數(shù)的增長(zhǎng)各組均上升，但健康組和治療組較感染對(duì)照組上升迅速。治療組較健康組增長(zhǎng)極顯著（P＜0.01），治療組中高劑量治療組與中劑量治療組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于低劑量治療組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 投藥后機(jī)體應(yīng)答能力的變化

復(fù)方中藥制劑的主要成分為大青葉、黨參、苦杏仁、前胡和黃芩等，此次實(shí)驗(yàn)證明本組方在治療與免疫方面均對(duì)家禽有益。從表2、3可見(jiàn)，此藥可提高法氏囊指數(shù)，這與其他實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，但脾臟指數(shù)下降，這與其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同。脾臟是抗體形成的主要淋巴器官，雖然用藥組脾指數(shù)下降，但其抗體形成能力提高，這種現(xiàn)象提示可能是由于胸腺、法氏囊或其他淋巴器宮發(fā)育良好而脾臟發(fā)生代償性退化的結(jié)果。這一結(jié)果說(shuō)明并不是能提高免疫功能的中藥組方就一定能提高所有免疫器官的重量。

從表4可見(jiàn)，本組方可提高機(jī)體的體液免疫機(jī)能，用藥后IgG免疫球蛋白量有所提高。治療組比感染對(duì)照組上升的較早且較快，這可能是因?yàn)檫@兩組同時(shí)攻毒時(shí)，治療組在給藥的情況下其免疫球蛋白總量產(chǎn)生的最高，這充分說(shuō)明投藥增強(qiáng)了機(jī)體的應(yīng)答能力，使機(jī)體受到抗原刺激時(shí)能快速動(dòng)員機(jī)體的免疫系統(tǒng)，達(dá)到最佳水平。

從表2、表3和表4的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，該試驗(yàn)所擬中藥組方對(duì)雞傳染性喉氣管炎具有一定的治療作用。經(jīng)該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，復(fù)方中藥制劑中劑量的治愈率高達(dá)96.6%。

3.2 制劑中各成分對(duì)傳喉的影響

復(fù)方中藥制劑的主要成分為大青葉、黨參、苦杏仁、前胡和黃芩等，是根據(jù)我國(guó)中獸醫(yī)標(biāo)本兼治、辨證論治的原則，精心篩選多味中草藥，采用現(xiàn)代制藥技術(shù)研制而成的專(zhuān)門(mén)用于治療雞傳染性喉氣管炎的藥物。它具有清熱解毒、扶正固本、補(bǔ)中益氣和止咳平喘的功能，以達(dá)到健脾益氣、降氣祛痰、利水止瀉的功效。大青葉為清熱解毒藥，均有抗病毒的功效入心、胃、肝經(jīng)，既走氣分，又入血分，對(duì)痢疾桿菌副大腸桿菌有較強(qiáng)的抑制作用；前胡為清化熱痰藥，入肺、肝經(jīng)，具有降氣祛痰，宣散風(fēng)熱的功效，有顯著增加呼吸道分泌作用，祛痰作用顯著，常用于治療氣管炎；苦杏仁為止咳平喘藥，入肺、大腸經(jīng)，具有止咳平喘，潤(rùn)腸通便的功效，服用小劑量苦杏仁，其所含苦杏仁甙會(huì)在體內(nèi)慢慢分解，逐漸產(chǎn)生少量氫氰酸，能輕度抑制呼吸中樞，使呼吸加深，痰液易于排出，從而達(dá)到鎮(zhèn)咳平喘的作用；黨參為補(bǔ)氣藥，入脾、肺經(jīng)，是治療里虛癥的要藥，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有興奮作用，能增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺的功效，并能作用于消化系統(tǒng)，對(duì)腸道細(xì)菌有一定的抑制作用。由于黨參功效與人參相差不遠(yuǎn)，故常代人參入藥使用。黃芩性味苦、寒，入心、肺、膽、大腸經(jīng)，有瀉實(shí)火、除濕熱、止血、安胎的功效。有些中草藥能促進(jìn)抗體的生成和抗體水平增加，如淫羊藿能促進(jìn)抗體生成。人參皂甙與黃芪皂甙都有促進(jìn)抗體的生成、促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)的作用。黃芪對(duì)正常機(jī)體的抗體生成功能有明顯促進(jìn)作用。此外，影響免疫作用的中草藥方劑還有很多如：補(bǔ)中益氣湯、四君子湯、八珍湯、桂枝湯、柴胡湯、六味地黃湯等對(duì)免疫反應(yīng)具有不同程度的促進(jìn)作用，表明它們可不同程度地刺激細(xì)胞免疫及抗體生成反應(yīng)。

綜上所述，該復(fù)方中藥制劑在雞傳染性喉氣管炎的免疫方面的效果顯著，但仍有待于其他理論數(shù)據(jù)的觀(guān)測(cè)驗(yàn)證。本組方可提高機(jī)體的體液免疫機(jī)能，這充分說(shuō)明投藥增強(qiáng)了機(jī)體的應(yīng)答能力，使機(jī)體受到抗原刺激時(shí)能快速動(dòng)員機(jī)體的免疫系統(tǒng)，達(dá)到最佳水平。所以應(yīng)用中草藥治療畜禽某些疾病還是能起到很好的效果，中藥對(duì)于畜禽疾病的預(yù)防和治療方面有很大的潛力。

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鄧瑞強(qiáng)（1983-），男，山西榆次人，碩士學(xué)歷，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)信息學(xué)院遠(yuǎn)景學(xué)院副院長(zhǎng)，近年來(lái)主要從事獸醫(yī)流行病學(xué)相關(guān)研究。