金鳳華

·綜述·

HPLC在中藥研究中的應(yīng)用

金鳳華

闡述高效液相色譜法(HPLC)在中藥方面的應(yīng)用, 包括炮制、指紋圖譜、有效成分的測(cè)定、藥理等。

高效液相色譜法；中藥研究；應(yīng)用

高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)起源于上世紀(jì)70年代, 自誕生后發(fā)展快速, 主要是分析、分離多成分的儀器技術(shù), 其特點(diǎn)在于方便、靈敏、準(zhǔn)確、快速。目前在各大領(lǐng)域, 包括醫(yī)藥、化工、軍事、食品等。進(jìn)入新世紀(jì)后, 廣泛應(yīng)用于前沿學(xué)科, 如生物基因工程、新能源等, 隨著計(jì)算機(jī)軟件技術(shù)的普及, 各種檢測(cè)設(shè)備的合作運(yùn)用, HPLC的運(yùn)用范圍也得到了拓展, 是當(dāng)前科技發(fā)展不可缺少的重要儀器設(shè)備。高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜, 主要包括檢測(cè)器、輸液泵、色譜柱、樣品進(jìn)入口等, 流動(dòng)相可為單一溶劑, 也可為比例不同的混合溶劑, 流動(dòng)相通過泵可直接填充至色譜柱并注入樣品溶液, 通過流動(dòng)相融入到柱內(nèi),在填充劑上分離, 之后各個(gè)成分可以先后流入到檢測(cè)器內(nèi)并記錄下其色譜圖, 開展定量、定性的分析。以其高效、穩(wěn)定、可靠的特點(diǎn), 在中藥研究中占有不可替代的地位。本文就近年來HPLC技術(shù)在中藥有效成分測(cè)定、中藥指紋圖譜研究、中藥炮制和中藥藥理等方面的應(yīng)用作一簡(jiǎn)要介紹。

1 中藥有效成分測(cè)定

HPLC在中藥有效成分分析中最常見, 特別是其樣品的純化技術(shù), 如液液、臨界、液固萃取等, 讓其具有高分離效率, HPLC法可以更加精準(zhǔn)的對(duì)中藥成分進(jìn)行測(cè)定。例如, 2015年版《中國藥典》采用HPLC法, 分析柱為C18, 流動(dòng)相包括甲醇、水等, 以此來測(cè)定骨碎補(bǔ)、丹參、香加皮、護(hù)肝片、小兒消炎栓等有效成分含量［1］。有文獻(xiàn)報(bào)道證明HPLC法分離測(cè)定中藥中的有效成分, 如生物堿類、甙類、黃酮類等均非常準(zhǔn)確、有效, 例如, 測(cè)銀杏葉中黃酮成分可采用高效液相一二極管陣列檢測(cè)器分離檢測(cè)法［2］, 測(cè)定銀杏葉提取物中內(nèi)酯、黃酮含量則可采用高效液相/蒸發(fā)激光散射檢測(cè)器［3］。包括紅豆杉中紫杉醇含量、清胃片中黃芩苷的含量等［4］。通過實(shí)驗(yàn)證明均取得了令人滿意的結(jié)果, 有著極好的操作性［5］,并且還有部分已錄入到了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)［6］。

2 中藥指紋圖譜研究

正相HPLC法、反相HPLC技術(shù)均已達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn), 分離效果好、準(zhǔn)確性高、分析快, 已被運(yùn)用到中藥材、制劑定量、定性的分析中。當(dāng)前, 檢測(cè)中藥指紋圖譜的首選方法主要就是反相HPLC技術(shù)。

中藥HPLC指紋圖譜指中成藥、中藥材在進(jìn)行一定科學(xué)處理后, 采用HPLC分析可以得到提示此藥中共有峰值的圖譜。一般來說指紋圖譜包括兩層內(nèi)容：一是要反映出此藥與其他物質(zhì)間的差別；二是對(duì)于中藥材還可反應(yīng)出采收時(shí)節(jié)或是生產(chǎn)地不同而有的差異點(diǎn), 對(duì)中成藥而言則可展現(xiàn)同一個(gè)產(chǎn)品不同批次的區(qū)別。差異小則代表穩(wěn)定性高。

郭澄等［7］運(yùn)用指紋圖譜, 對(duì)中藥螻蛄品種、混亂品種間、皺瘤海鞘有效部位開展鑒定。有文獻(xiàn)以報(bào)告, 參照物-丹皮酚、流動(dòng)相-甲醇-水, 進(jìn)行連續(xù)梯度洗脫測(cè)定10批牡丹皮藥材指紋圖譜。以此構(gòu)建起了規(guī)范化種植藥用牡丹皮的HPLC指紋圖譜, 穩(wěn)定性、精密度都比較高, 也為丹皮藥材的質(zhì)控提供參考。有文獻(xiàn)報(bào)告, 利用高效液相/紫外檢測(cè) 、高效液相/熒光檢測(cè)、高效液相/蒸發(fā)光散射檢測(cè)指紋圖譜, 對(duì)于制首烏、枳殼超微粉甲醇提取物、七葉皂苷鈉、三七藥開展測(cè)定工作。例如, 運(yùn)用DAD可以得到3D圖譜,可見可適用成分復(fù)雜的, 紫外光區(qū)有吸收的藥物。有學(xué)者則采用3DHPLC指紋圖譜對(duì)黃連粉針劑、黃連解毒湯制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。并且還有烏拉爾甘草、甘草根莖的乙醇提取物的HPLC指紋圖譜的有關(guān)文獻(xiàn)［8-11］。宋金春等［12］則采用RPHPLC, 分析構(gòu)建了如下藥材HPLC指紋圖譜分析法：川芎、野菊花、山楂等, 此方法可靠性強(qiáng)、重現(xiàn)性好, 可以對(duì)這些藥材質(zhì)量進(jìn)行有效控制。

3 中藥炮制研究

有學(xué)者采用高效的液相法對(duì)肉豆蔻及炮制品揮發(fā)油中肉豆蔻醚、黃樟醚展開測(cè)定, 方法快速、準(zhǔn)確, 也證明了肉豆蔻醚在炮制后會(huì)有不同程度的減少, 可降低毒性, 交對(duì)炮制機(jī)理進(jìn)行了簡(jiǎn)單描述［10］。相關(guān)學(xué)者則采用高效液相法, 測(cè)定白附生品、不同的炮制品中次烏頭堿含量, 實(shí)驗(yàn)證明了煮后可讓烏頭堿下降, 下降率可達(dá)98%, 而蒸后的下降率更高,達(dá)100%, 這也說明了炮制解毒機(jī)理主要是讓中藥材中的毒性成分含量下降, 此測(cè)定也為炮制工作打下了扎實(shí)的基礎(chǔ)［13］。

4 中藥藥理研究

李艷等［14］實(shí)驗(yàn)表明, 限制大鼠活動(dòng)空間, 以此導(dǎo)致的反復(fù)心理應(yīng)激大鼠血漿多巴胺(DA)、5-羥色氨(5-HT)、下丘腦DA和5-HT含量明顯降低。而去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量則相反, 有上升的形式。運(yùn)用加味四逆散, 可以在一定程度上提升應(yīng)激大鼠下丘腦和血漿中DA、5-HT含量, 與人參總皂苷相比, 起效更多。同時(shí)也可減少血漿中NE、E含量, 這也證明了味四逆散能明顯提升應(yīng)激能力, 這機(jī)制和升高中樞和血漿中DA及5-HT含量, 降低血漿中NE和E含量有關(guān)。

文愛東等［15］結(jié)果證明, 阿魏酸在脾虛血瘀組大鼠體內(nèi)分布容積明顯降低, 消除速度也明顯降低, 曲線下面積增加,多劑量注射阿魏酸后脾虛血瘀組大鼠血漿和近段空腸組織中胃動(dòng)素含量顯降, 降結(jié)腸和直腸組織中前列腺素的含量顯著升高。從這里可以看出, 明阿魏酸在正常及血瘀證大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)中存在著差異性, 阿魏酸治療血瘀證的作用和調(diào)節(jié)胃腸激素平衡有一定的關(guān)系。

5 討論

幾千年過去了, 國藥中藥世世代代傳承下來, 在各種疾病的治療、保健、養(yǎng)生中, 都有非同一般的效果［16,17］。但是,從根本上來說, 中藥成分復(fù)雜、多元, 在一定程度上限制了其在臨床上的發(fā)展, 中藥品種確實(shí)是不斷推出新品, 但質(zhì)量卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)未能實(shí)現(xiàn)科學(xué)的量化, 所有的問題都要依靠先進(jìn)、靈敏、精密的儀器來逐步解決。而HPLC在中藥有效成分測(cè)定、中藥質(zhì)量控制、中藥新劑型研究等方面均有廣泛的運(yùn)用, 其分離效果好、分析速極快, 同時(shí)不用耗費(fèi)大量的樣品就可以進(jìn)行測(cè)定［18-20］。伴隨和質(zhì)譜、質(zhì)譜串聯(lián)等聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展、完善, HPLC一定會(huì)在中藥活性成分鑒定、有效成分分析、中藥以及制劑生產(chǎn)質(zhì)量質(zhì)控等方面起到重要的作用, 是未來分離、含量測(cè)定等的第一選擇方法。

［1］國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典(2015年版).一部. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2015∶254.

［2］田南卉, 張?chǎng)H. 高效液相色譜法蒸發(fā)激光散射檢測(cè)器測(cè)定銀杏葉提取物中內(nèi)酯的含量. 藥物分析雜志, 1997(4)∶282-283.

［3］王喜軍, 孫暉. 茵陳蒿湯的三維HPLC分析. 中成藥, 1993(12)∶33-35.

［4］陶巧鳳, 黃宗玉, 范秀林. 高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉制劑中黃酮含量. 中成藥, 1993(12)∶14-15.

［5］陶巧鳳.高效液相色譜法測(cè)定清胃片中黃苓甙含量.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 1996, 13(增刊)∶33.

［6］牟德海, 周治發(fā).反相HPLC法分析紅豆杉樹皮和樹葉中紫杉醇及其類似物含量的研究.分析測(cè)試學(xué)報(bào), 1997, 16(16)∶8.

［7］郭澄, 魏道智, 鄭漢臣.中藥螻蛄的高效液相指紋圖譜研究.藥學(xué)實(shí)踐雜志, 2005, 23(6)∶ 366-369.

［8］謝培山.中藥色譜指紋圖譜.北京∶ 人民衛(wèi)生出版社, 2005∶74.

［9］王璽, 王文宇, 張克榮, 等.中藥HPLC指紋圖譜相似性研究的探討.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 20(5)∶361-362.

［10］葉皓, 沈順, 張祥民.液相指紋圖譜結(jié)合歐氏距離對(duì)野菊花質(zhì)量控制的研究.世界科技研究與發(fā)展, 2006, 28(2)∶72.

［11］湯樹良, 楊濱, 黃璐琦, 等.山楂高效液相指紋圖譜研究.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2004, 10(4)∶9-13.

［12］宋金春, 胡傳芹, 劉紅, 等.川芎高效液相指紋圖譜的建立.中國藥房, 2005, 16(9)∶716-718.

［13］龍全江, 江葳葳, 熊健, 等.高效液相色譜在中藥研究應(yīng)用中的新進(jìn)展.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1999, 16(4)∶44-46.

［14］李艷, 嚴(yán)燦, 史亞飛, 等.反復(fù)心理應(yīng)激大鼠血漿和下丘腦單胺神經(jīng)遞質(zhì)的變化及加味四逆散的影響.中藥藥理與臨床, 2002, 18(1)∶1-3.

［15］文愛東, 黃熙, 任平, 等.阿魏酸在正常和脾虛血淤大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及對(duì)胃腸激素的影響.中國藥學(xué)雜志, 2001, 36(9)∶594.

［16］邵清松, 胡潤淮. 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2007, 35(3)∶44-47.

［17］王芳. 高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展. 現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐, 2002, 16(3)∶44-46.

［18］劉力, 張大方, 李超英, 等. 高效液相色譜法在中藥研究中的應(yīng)用. 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 1994(1)∶62-63.

［19］吳恒, 陳禮明, 張善堂. 高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用.安徽醫(yī)藥, 2009, 13(8)∶863-866.

［20］王慧森, 劉明, 李更生. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法在中藥研究中的應(yīng)用. 中醫(yī)研究, 2008, 21(8)∶61-62.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.02.098

2016-12-26］

238000 合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心