楊惠忠

[摘 要] 目的：檢測細(xì)胞粘附分子CD44在腎病綜合征（Nephrotic syndrome，NS）、慢性腎小球腎炎（Chronic glomerulonephritis，CGN）患者外周血表達(dá)水平，探討其臨床意義。方法：選取我院2013年7月～2016年7月收治的57例NS患者、69例GGN患者及同期60名健康體檢者，分別納入NS組、GGN組及對照組，采用流式細(xì)胞儀檢測3組受試者外周血單個核細(xì)胞CD44表達(dá)水平，并分析CD44表達(dá)水平與NS患者、GGN患者血漿白蛋白（ALB）、膽固醇（CE）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）的相關(guān)性。結(jié)果：CGN組患者外周血CD44表達(dá)水平高于NS組，NS組患者外周血CD44表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Pearson相關(guān)分析示，外周血CD44表達(dá)水平與NS患者ALB呈負(fù)相關(guān)，與CE呈正相關(guān)，與CGN患者Cr、BUN呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：NS、CGN患者外周血CD44表達(dá)水平超出正常范圍，可能通過免疫機(jī)制參與NS、CGN的發(fā)生發(fā)展，同時，外周血CD44表達(dá)水平與患者腎功能存在一定相關(guān)性，對于輔助病情判斷亦具有一定價值。

[關(guān)鍵詞] 細(xì)胞粘附分子；CD44；腎病綜合征；慢性腎小球腎炎

中圖分類號：R692 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：2095-5200（2016）06-094-03

DOI：10.11876/mimt201606035

腎病綜合征（Nephrotic syndrome，NS）、慢性腎小球腎炎（Chronic glomerulonephritis，CGN）發(fā)病有多種因素參與，其中免疫損傷是二者發(fā)生過程中的共同環(huán)節(jié) [1]。細(xì)胞免疫、體液免疫平衡失調(diào)是導(dǎo)致腎臟疾病發(fā)病并進(jìn)展至終末期腎衰竭、影響患者生存質(zhì)量的主要原因[2]。作為細(xì)胞粘附分子家族重要成員，CD44主要參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)間特異性粘連過程，在腫瘤、器官移植排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色[3]。本研究就NS、CGN患者外周血CD44表達(dá)水平進(jìn)行了檢測與分析，探討CD44在腎小球病變中作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2013年7月—2016年7月收治的57例NS患者、69例GGN患者及同期60名健康體檢者，分別納入NS組、GGN組及對照組。NS患者、GGN患者均經(jīng)病史、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查或腎臟病理組織學(xué)檢查，并參照改善全球腎臟病預(yù)后組織（KDIGO）慢性腎臟疾病診療指南（2012年版）確診[4]，且入組前未接受相關(guān)治療，排除合并感染、肝功能異常、其他免疫性疾病者，健康體檢者血壓、蛋白尿均處于正常范圍內(nèi)，既往無腎病史、嚴(yán)重感染史及免疫性疾病。各組受試者年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、性別等一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，受試者均知情同意并簽署書面協(xié)議。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血CD44表達(dá)水平檢測 于入組次日清晨抽取受試者空腹肘靜脈抗凝血2 mL，使用淋巴分離液分離，以1×106/mL提取單個核細(xì)胞懸液，取細(xì)胞懸液100 μL，依次加入20 μL CD44-FITC（法國Immunotech公司）及陰性對照羊抗鼠IgG1-FITC（法國Immunotech公司），避光處理30 min后，使用Epics Altra 型流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter公司）上機(jī)檢測[5]。CD44表達(dá)水平計(jì)算方法[6]：CD44陽性細(xì)胞百分比=（待測標(biāo)本內(nèi)標(biāo)記陽性細(xì)胞數(shù)/受檢細(xì)胞總數(shù)）×100%-非特異結(jié)合細(xì)胞百分比。比較各組受試者外周血CD44表達(dá)水平的差異。

1.2.2 腎功能相關(guān)指標(biāo)檢測及相關(guān)性分析 于入組次日清晨抽取NS組、CGN組患者空腹肘靜脈抗凝血2 mL，使用AU5800全自動生化分析儀（美國Beckman Coulter公司）對其血漿白蛋白（ALB）、膽固醇（CE）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）進(jìn)行檢測，運(yùn)用Pearson法計(jì)算CD44表達(dá)水平與ALB、CE、Cr、BUN的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS19.0進(jìn)行分析，性別以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，年齡、BMI、CD44表達(dá)水平等計(jì)量資料以（x±s）表示，相關(guān)性分析采用Pearson法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血CD44表達(dá)水平

CGN組患者外周血CD44表達(dá)水平高于NS組，NS組患者外周血CD44表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 外周血CD44表達(dá)水平與腎功能相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，外周血CD44表達(dá)水平與NS患者ALB呈負(fù)相關(guān)，與CE呈正相關(guān)，與CGN患者Cr、BUN呈正相關(guān)（P<0.05）。見表2。

3 討論

細(xì)胞粘附分子是一類來自不同基因的配體/受體分子，具有介導(dǎo)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化等作用，在近年來腎臟疾病的機(jī)制研究中得到了廣泛關(guān)注[7-8]。

研究發(fā)現(xiàn)，CD44在人類和大鼠正常腎臟組織中幾乎無表達(dá)，腎小囊上皮細(xì)胞、亨氏拌升支粗段小管上皮細(xì)胞以及遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞可見少量表達(dá)，但在腎臟疾病中，CD44蛋白表達(dá)往往處于異常增高狀態(tài)[9]。Fogo等[10]

發(fā)現(xiàn)，系膜增生性腎炎患者外周血CD44表達(dá)水平明顯升高，且與系膜細(xì)胞活化增殖、腎小球內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤具有密切關(guān)聯(lián)；鄒麗萍等[11]指出，CD44可促進(jìn)機(jī)體炎癥因子分泌，參與炎癥反應(yīng)。本研究就CD44在NS、CGN患者外周血內(nèi)表達(dá)水平進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，NS、CGN患者外周血CD44表達(dá)水平均處于異常升高狀態(tài)，考慮與CD44誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞在腎組織內(nèi)廣泛浸潤、活化炎癥和產(chǎn)生炎性因子等作用有關(guān)[12]，說明CD44在NS、CGN發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色。

本研究相關(guān)性分析結(jié)果可見，CD44表達(dá)水平與NS患者ALB呈負(fù)相關(guān)，與CE呈正相關(guān)，其機(jī)制可能為：CD44具有調(diào)節(jié)細(xì)胞游走功能作用，可通過促進(jìn)淋巴細(xì)胞在腎間質(zhì)內(nèi)廣泛浸潤，造成外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量或功能異常、淋巴細(xì)胞亞群間比例失衡，而T淋巴細(xì)胞功能失調(diào)被認(rèn)為是NS發(fā)病的重要機(jī)理之一[13-14]，而NS患者以高脂血癥、低白蛋白血癥為主要表現(xiàn)[15]，故隨著NS患者外周血CD44表達(dá)水平的升高，其CE逐漸升高，ALB逐漸下降。

通過對CD44與CGN患者腎功能相關(guān)指標(biāo)的分析，可以發(fā)現(xiàn)，CD44表達(dá)水平與患者Cr、BUN呈正相關(guān)，與ALB、CE無明顯相關(guān)性，與CGN患者腎臟病理生理改變具有一致性：CGN患者腎小球?yàn)V過率的下降可導(dǎo)致肌酐清除率降低，繼而導(dǎo)致體內(nèi)Cr、BUN水平大幅上升，且其上升程度與患者病情具有密切關(guān)聯(lián)[16]，而CD44可與透明質(zhì)酸配體結(jié)合，上調(diào)細(xì)胞活素類物質(zhì)、化學(xué)活素類物質(zhì)表達(dá)，參與CGN細(xì)胞免疫病理過程，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向腎小球、腎小管間質(zhì)浸潤，導(dǎo)致病情進(jìn)展[17]。此外，Maruyama等[18]發(fā)現(xiàn)，腎臟疾病患者尿液內(nèi)CD44細(xì)胞密度亦呈現(xiàn)明顯增高狀態(tài)，說明CD44對系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)的影響在NS、CGN發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定作用。

因此，可以認(rèn)為，細(xì)胞粘附分子CD44在NS、CGN患者外周血表達(dá)水平均呈現(xiàn)異常增高狀態(tài)，說明CD44在NS、CGN發(fā)病過程中扮演了重要角色，與此同時，CD44與患者腎功能相關(guān)指標(biāo)具有顯著相關(guān)性，亦可為患者病情判斷提供一定參考。本研究為NS、CGN發(fā)病機(jī)制的深入了解及臨床防治策略的制定提供了思路，但需要注意的是，由于目前臨床對于腎臟疾病的確切發(fā)病機(jī)制尚無明確闡釋，關(guān)于CD44對NS、CGN發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)理仍有待更深層次的研究加以了解。

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