王新軍，宮崧峰，賈 軍，王曉彬，肖文苑，董廣宇，吳春波

（1深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳518172，2深圳大學，深圳市第二人民醫(yī)院，廣東深圳518035）

Yes相關(guān)蛋白及其與顱內(nèi)腫瘤關(guān)系的研究進展

王新軍1，宮崧峰2，賈 軍1，王曉彬2，肖文苑1，董廣宇1，吳春波1

（1深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳518172，2深圳大學，深圳市第二人民醫(yī)院，廣東深圳518035）

Hippo?YAP信號通路調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展，腫瘤自身及特定的環(huán)境決定YAP蛋白是致癌基因或是腫瘤抑制基因.YAP蛋白是腫瘤的研究熱點，與顱內(nèi)腫瘤密切相關(guān)，也是顱內(nèi)腫瘤靶向治療的可選靶點.

Hippo信號通路；YAP蛋白；顱內(nèi)腫瘤

0 引言

在細胞增殖和細胞凋亡的調(diào)控中，Hippo通路起著至關(guān)重要的作用，與細胞增殖的負調(diào)控密切相關(guān)［1］，Hippo信號轉(zhuǎn)導通路涉及多種腫瘤抑制基因及癌基因.在Hippo信號通路下游，YAP（Yes?associated protein）是關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄激活因子之一.調(diào)節(jié)細胞核內(nèi)外的信號轉(zhuǎn)導及靶蛋白轉(zhuǎn)錄因子的活性，其在腫瘤的研究中多作為癌基因.研究顯示，YAP蛋白也是抑癌基因.本文主要闡述YAP蛋白及其與顱內(nèi)腫瘤的關(guān)系.

1 YAP蛋白

YAP通過“PVKQPPPLAP”序列與Src蛋白激酶家族中SH3區(qū)域相結(jié)合，分子量約65 kDa，命名為Yes?associated protein65（YAP65）［2］.位于人類染色體11q22上，廣泛存在于各個組織中；YAP包括YAP1和YAP2兩種表達亞型：在YAP1中有1個WW結(jié)構(gòu)域，YAP2中含有2個，WW結(jié)構(gòu)域含有2個高度保守的色氨酸殘基，分五個亞型，YAP蛋白的WW結(jié)構(gòu)域為最大的類群Ⅰ型，能特異性識別結(jié)合PPXY基因序列（P為脯氨酸，X為非保守氨基酸，Y為絡(luò)氨酸）.YAP2的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性比YAP1更強.在細胞信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中，YAP發(fā)揮著重要的作用［3］.

1.1 YAP蛋白的活性調(diào)節(jié)①Hippo信號通路是主要的調(diào)控通路：Hippo上游的Last1／2活化后磷酸化YAP的第381位絲氨酸，磷酸化的YAP與14?3?3結(jié)合失去活性；Last1／2磷酸化的YAP其他位點絲氨酸被CK1δ／ε磷酸化，YAP在泛素?蛋白酶體途徑降解.②G蛋白偶聯(lián)受體通路：不同的G蛋白受體決定G蛋白偶聯(lián)受體通路對YAP的作用是抑制還是促進.血清中的溶血磷脂酶（LPA）和鞘氨醇一磷酸（S1P）通過G12／13偶聯(lián)受體抑制Last1／2，激活YAP活性；胰高血糖素或腎上腺素則通過Gs偶聯(lián)受體激活Last1／2，抑制YAP活性.③機械張力：細胞粘附、細胞外基質(zhì)等機械張力依賴Rho GTPase等因素調(diào)控YAP活性；而細胞骨架在Hippo通路和cAMP／PKA通路協(xié)同作用下調(diào)控YAP.④蛋白相互作用：AMOT家族成員、ZO?2、a?cate?nin、PTPN14、homeodomain?interacting protein kinase2、14?3?3蛋白等直接和YAP作用調(diào)節(jié)YAP活性，VGLL4與YAP競爭性結(jié)合TEADs，間接抑制YAP活性.

1.2 YAP蛋白調(diào)節(jié)細胞增殖與凋亡的矛盾作用

YAP蛋白的調(diào)控作用具有多元性，在YAP蛋白中含有多個特異性氨基酸序列及結(jié)構(gòu)域，并且通過不同的結(jié)構(gòu)域或者氨基酸序列，YAP可參與多條細胞信號轉(zhuǎn)導通路的調(diào)控.有研究表明，在細胞增殖與凋亡的調(diào)控、器官大小的調(diào)節(jié)、細胞接觸性抑制以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，YAP蛋白發(fā)揮著重要作用.YAP蛋白在癌癥發(fā)生、組織再生以及干細胞的功能調(diào)控上發(fā)揮重要的作用.

1.2.1 YAP促進細胞增殖，抑制細胞凋亡 YAP在細胞核內(nèi)，通過WW結(jié)構(gòu)域與轉(zhuǎn)錄因子TEAD家族、P73、SMAD家族、IAP家族、ErbB4胞質(zhì)結(jié)合域和PEBP2α等結(jié)合，參與細胞增殖和細胞凋亡的調(diào)節(jié).磷酸化的YAP蛋白發(fā)生轉(zhuǎn)位，在細胞漿中集聚，結(jié)合磷酸化的ser127及14?3?3蛋白，不能進入細胞核內(nèi)，因而失去轉(zhuǎn)錄激活因子活性，最終被泛素依賴的蛋白酶降解.Hippo通路中其他因子通過磷酸化負性調(diào)控YAP水平，或者發(fā)生突變，使YAP活性增加，進而引起cyclinE、DIAP1等下游轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子轉(zhuǎn)錄增強，抑制細胞凋亡，促進細胞增殖.YAP的調(diào)控作用使細胞增殖過度、凋亡受抑 （但不影響細胞本來的分化）［4］.YAP作為癌基因已經(jīng)被多個研究證實，YAP蛋白表達增高、活性增強最終促進細胞的惡性轉(zhuǎn)化［5－8］.YAP過度表達促進細胞增殖，導致組織器官增大；YAP失活導致細胞凋亡，造成組織器官萎縮.YAP在正常機體內(nèi)高度保守，介導細胞信號轉(zhuǎn)導，調(diào)控多種轉(zhuǎn)錄因子的活性；在機體病理狀態(tài)下，Hippo通路對YAP的抑制失效或YAP活性增強，導致腫瘤發(fā)生發(fā)展.

1.2.2 YAP促進細胞調(diào)亡，抑制細胞增殖 YAP通過兩條途徑控制p73的功能，一是細胞核內(nèi)YAP通過競爭性抑制P73及E3泛素蛋白連接酶結(jié)合位點的PPXY基因序列，從而抑制P73降解，使P73蛋白及功能趨于穩(wěn)定；二是使YAP蛋白的WW結(jié)構(gòu)域與P73的PPXY基因序列結(jié)合，增強p73基因的功能，增加下游促凋亡蛋白的活性，促進細胞凋亡.

1.3 YAP是癌基因，也是抑癌基因影響YAP調(diào)控細胞增殖與細胞凋亡的雙重調(diào)控作用包括：①機體本身的內(nèi)環(huán)境和腫瘤本身的因素；②TEAD和P73等不同主要轉(zhuǎn)錄因子選擇不同，YAP調(diào)控作用相反；③信號通路的上游信號及激酶控制YAP的調(diào)控方向.

2 YAP蛋白和顱內(nèi)腫瘤的關(guān)系

2.1 YAP在腫瘤細胞中的分布方式Y(jié)AP在腫瘤細胞中的分布有兩種方式：一是積聚在細胞核內(nèi)；二是無細胞核濃聚，在細胞質(zhì)與細胞核內(nèi)染色.YAP導致腫瘤發(fā)生發(fā)展的可能機制為：①Hippo信號通路失控、YAP活性增強、YAP活化導致腫瘤發(fā)生發(fā)展；②YAP基因擴增，YAP蛋白過度表達，活性增加而致癌［9］.YAP基因激活的關(guān)鍵“驅(qū)動子”在于染色體11q22位點的基因擴增，而過度表達的YAP誘導腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展［10－11］.腫瘤的發(fā)生發(fā)展與YAP密切相關(guān)：YAP高表達或功能上調(diào)促進腫瘤發(fā)生發(fā)展；相反，降低YAP表達水平或者抑制其功能能夠抑制腫瘤，從而為腫瘤靶向治療提供新的靶點.

2.2 YAP與顱內(nèi)腫瘤密切相關(guān)顱內(nèi)腫瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病，通常分為原發(fā)和繼發(fā)兩大類.原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤是指發(fā)生于腦組織、腦膜、顱神經(jīng)、垂體、血管及殘余胚胎組織等的腫瘤；繼發(fā)性腫瘤是指來源于機體其他部位的惡性腫瘤侵入或者轉(zhuǎn)移至顱內(nèi)形成轉(zhuǎn)移瘤.顱內(nèi)腫瘤的治療目前以手術(shù)為主，根據(jù)腫瘤的性質(zhì)及不同的個體制訂包括放療、化療等一系列綜合化治療方案.科學的不斷進步、精準治療方案的發(fā)展與分子生物學中的蛋白功能及作用靶點密切相關(guān)，YAP是一個可選擇靶點.

2.2.1 YAP和膠質(zhì)瘤 在YAP和顱內(nèi)腫瘤的研究中，對膠質(zhì)細胞瘤的研究最為廣泛和成熟.關(guān)于YAP在細胞核內(nèi)表達水平檢測的研究中，Orr等［12］發(fā)現(xiàn)，YAP在膠質(zhì)母細胞瘤中細胞核內(nèi)高表達常見，在毛細胞性星形細胞瘤內(nèi)高表達較少，而在兒童膠質(zhì)瘤患者中，YAP高表達較少.國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)在人類腦膠質(zhì)母細胞瘤中YAP核內(nèi)高表達，體外研究證實轉(zhuǎn)染YAP病毒載體使膠質(zhì)瘤細胞中YAP高表達，可促進膠質(zhì)瘤細胞增殖.YAP在各種胚胎性腦腫瘤中均有表達，在侵襲性星形細胞瘤中表達升高，YAP表達增高的侵襲性星形細胞瘤腫瘤患者中位生存期明顯縮短，實驗證明YAP能促進膠質(zhì)瘤的細胞生長.于福華等［13］發(fā)現(xiàn)敲低LN229膠質(zhì)瘤細胞系中的YAP表達能夠抑制腫瘤細胞增殖，阻滯細胞周期于G0／G1期，促進細胞凋亡，而且抑制腫瘤細胞的侵襲能力.通過降低YAP的表達可以抑制YAP的致癌促癌效應(yīng)，抑制人膠質(zhì)瘤細胞的增殖和遷移［14］，從而起到抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移.研究表明YAP1在人腦膠質(zhì)瘤細胞中表達，YAP1在不同級別的膠質(zhì)瘤的染色值不同，且膠質(zhì)瘤的惡性程度增高，YAP1染色值也增高.證實了YAP1表達與膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān).YAP調(diào)控膠質(zhì)瘤的生物學行為.

2.2.2 YAP和其他類型顱內(nèi)腫瘤 其他類型的顱內(nèi)腫瘤和YAP的研究也在進行中.現(xiàn)階段明確的抑癌基因是神經(jīng)纖維瘤抑制基因NF2，質(zhì)膜表面蛋白連接骨架成分與NF2的編碼蛋白，而2型神經(jīng)纖維瘤的發(fā)病和突變的NF2密切相關(guān)［5］.YAP是NF2的效應(yīng)分子，NF2主要通過調(diào)控YAP基因發(fā)揮功能，NF2、Mst1、Mst2的缺失導致YAP在S127位點磷酸化而激活，導致細胞過度增殖癌變.研究發(fā)現(xiàn)惡性腦膜瘤最常見的基因突變是NF2，而且普遍存在lats失活和YAP過度活化；Striedinger等［15］發(fā)現(xiàn)腦膜瘤細胞的YAP過度表達是由NF2的缺失造成，細胞的接觸性抑制特性丟失，因而過度增殖；而敲除NF2缺失的腦膜瘤細胞系上的YAP基因后，在S期，細胞增殖停滯，說明YAP引起腫瘤進展可能與NF2缺失有關(guān).Baia等［16］研究發(fā)現(xiàn)腦膜瘤的細胞核中都表達YAP1，并且不與腫瘤的發(fā)展歷程相關(guān)，YAP1在腦膜瘤的早期階段就存在，敲除細胞核YAP1后發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞增殖會受到抑制；當YAP1表達增多時，細胞生長和遷移也更快.Modena等［17］研究發(fā)現(xiàn)，YAP在原發(fā)性顱內(nèi)室管膜瘤中基因擴增.YAP1在SHH通路和WNT通路相關(guān)髓母細胞瘤中表達升高，SHH通路能調(diào)節(jié)YAP核內(nèi)轉(zhuǎn)移，放療后髓母細胞瘤新生細胞中YAP的表達明顯升高［18］.在髓母細胞瘤中發(fā)現(xiàn)YAP通過誘導IGF的表達及AKT的活化增進細胞的放射抵抗，導致放療后腫瘤復(fù)發(fā)［19］.提示化療的敏感性及預(yù)后也與YAP相關(guān)，YAP可能作為藥物治療腫瘤的突破口.

3 YAP蛋白作為腫瘤治療的靶點

YAP蛋白的調(diào)控機制研究越來越透徹，YAP蛋白作為腫瘤治療的其中一種靶點思路逐漸清晰.但是，目前對YAP的靶向藥物研究還在進展之中，藥物的作用方式多分為YAP直接抑制、干擾YAP?TEAD復(fù)合物等，由此來調(diào)控Hippo信號通路.

3.1 YAP抑制劑抑制YAP核內(nèi)轉(zhuǎn)移，降低YAP表達能有效抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展.黃智慧等［20］發(fā)明的YAP抑制劑能夠降低YAP的表達，干擾膠質(zhì)瘤細胞的增殖和遷移，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展.甲羥戊酸途徑限速酶HMG?COA限速酶抑制劑他汀類（氟伐他?。┛山档蚏ho GTP酶活化，促進YAP磷酸化，抑制核內(nèi)轉(zhuǎn)運，抑制YAP活性；氟伐他汀、達沙替尼、帕唑帕尼聯(lián)合使用協(xié)同抑制YAP核內(nèi)轉(zhuǎn)移，抑制克隆，同時也使腫瘤對化療藥物敏感性增加［21］.

3.2 YAP?TEAD復(fù)合物干擾YAP在TEAD周圍環(huán)繞，通過3個位點相結(jié)合.TEAD在YAP的致瘤起重要作用，干擾抑制YAP?TEAD復(fù)合物形成是有效控制腫瘤的方法.維替泊芬（VP）能夠阻斷YAP?TEADs的相互作用，使腫瘤倍增時間延長，抑制腫瘤生長［22］.退變樣蛋白4（VGLL4）與YAP競爭性結(jié)合TEADs，抑制YAP?TEAD轉(zhuǎn)錄活性，抑制腫瘤細胞增殖［23］.

4 展望

YAP作為Hippo信號通路下游的關(guān)鍵信號因子，在機體內(nèi)高度保守，維持細胞增殖和凋亡之間的平衡，抑制組織器官過度生長.其作為藥物治療靶點的設(shè)想和研究越來越受重視，研究發(fā)現(xiàn)其作為靶點的腫瘤抑制作用有效，尤其是在化療的敏感增效方面效果顯著.目前，YAP與腫瘤的研究較多，而新興的腫瘤干細胞與YAP的研究也逐步深入.但是，YAP與顱內(nèi)腫瘤的相關(guān)研究不多，加大研究投入，爭取在顱內(nèi)腫瘤靶向治療的研究中獲得突破性進展.

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Research progress of Yes?associated proteins and its relationship with intracranial tumors

WANG Xin?Jun1，GONG Song?Feng2，JIA Jun1，WANG Xiao?Bin2，XIAO Wen?Yuan1，DONG Guang?Yu1，WU Chun?Bo1
1People's Hospital of Longgang District，Shenzhen 518172，China；2Second Hospital of Shenzhen，Shenzhen University，Shenzhen 518035，China

Hippo?YAP signaling pathway regulate the occur?rence and development of tumor，while YAP protein is a cancer gene or tumor suppressor gene related to the specific environment and tumor itself.YAP protein has become a hotspot of tumor research，which is closely related to intracranial tumor.YAP is high expression in pituitary adenomas.It is also an optional target for targeted therapy of intracranial tumors.

Hippo signaling pathway；YAP protein；intracranial tumor

R739.41

A

2095?6894（2017）07?83?03

2016－10－09；接受日期：2016－10－29

深圳市知識創(chuàng)新計劃項目（JCYJ20140414170821293，JCYJ20150330102401088）；深圳市龍崗區(qū)科技發(fā)展基金醫(yī)療衛(wèi)生（扶持類）項目（YLWS20150526165408484）

王新軍.碩士.E?mail：wangxinjuncn＠163.com

賈 軍.碩士，主任醫(yī)師.E?mail：jiajun69＠qq.com