馮仲鍇，孫永強(qiáng)，劉汝銀，岳宗進(jìn)，王新立

（河南中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院骨科脊柱病區(qū)，河南鄭州450002）

淫羊藿苷聯(lián)合地塞米松對(duì)人髓核細(xì)胞增殖及分泌表達(dá)的影響

馮仲鍇，孫永強(qiáng)，劉汝銀，岳宗進(jìn)，王新立

（河南中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院骨科脊柱病區(qū)，河南鄭州450002）

目的探討淫羊藿苷（ICA）與地塞米松（Dex）聯(lián)合作用對(duì)人髓核細(xì)胞（hNPs）增殖及聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、II型膠原蛋白（Col2a）、IL-6、IL-8和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-13）表達(dá)的影響。方法取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hNPs按不同處理因素分為：control組（只含培養(yǎng)基）、ICA組（20μmol/LICA）、Dex組（0.2μmol/LDex）、ICA+Dex組（20μmol/LICA+0.2μmol/LDex）、IL-1β組（10ng/mlIL-1β）、ICA+IL-1β組（20μmol/LICA+10ng/mlIL-1β）、Dex+IL-1β組（0.2μmol/LDex+10ng/mlIL-1β）、ICA+Dex+IL-1β組（20μmol/LICA+0.2μmol/LDex+10ng/mlIL-1β），各組作用48h；CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖；Westernblot、RT-PCR以及ELISA檢測(cè)Aggrecan、Col2a、IL-6、IL-8和MMP-13表達(dá)。結(jié)果CCK-8結(jié)果顯示：與control組比較，低濃度的ICA（≤20μmol/L）和Dex（≤0.2μmol/L）單獨(dú)作用均提高h(yuǎn)NPs存活率但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然而，10μmol/LICA和0.2μmol/LDex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs的存活率大于單獨(dú)用藥（P<0.05）；Westernblot、RT-PCR以及ELISA結(jié)果表明：與單獨(dú)用藥組相比，ICA和Dex聯(lián)合作用促進(jìn)Aggrecan、Col2a蛋白和mRNA表達(dá)（P<0.05）；另外，ICA和Dex聯(lián)合處理抑制IL-1β誘導(dǎo)的hNPs炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8的分泌表達(dá)（P<0.05），同時(shí)降低MMP-13蛋白、mRNA水平（P<0.05）。結(jié)論ICA與Dex聯(lián)合作用對(duì)促進(jìn)hNPs增殖、Aggrecan和Col2a表達(dá)有效果；同時(shí)抑制IL-1β誘導(dǎo)的hNPs炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8和MMP-13的表達(dá)，為椎間盤退行性病變的藥物治療提供理論依據(jù)。

淫羊藿苷；地塞米松；人髓核細(xì)胞；聚集蛋白聚糖；II型膠原蛋白；椎間盤退行性病變

椎間盤退行性病變是脊柱外科典型的常見病、多發(fā)病，是由椎間盤退變引起的以頸肩腰腿痛為主要表現(xiàn)的一系列臨床綜合征。其機(jī)制極其復(fù)雜，到目前為止尚不完全清楚，是一個(gè)急需解決的醫(yī)學(xué)難題[1]。促進(jìn)髓核細(xì)胞的增殖，提高蛋白聚糖（Aggrecan）和Ⅱ型膠原蛋白（typeⅡcollagen，Col2a）的含量，抑制炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，對(duì)改善椎間盤退行性病變至關(guān)重要[2]。淫羊藿苷（Icariin，ICA）提取于中藥淫羊藿，有強(qiáng)筋壯骨、增強(qiáng)免疫力等作用[3]。研究發(fā)現(xiàn)[4]，淫羊藿苷抑制白細(xì)胞介素8（Interleukin-8，IL-8）、白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、Col2a和基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），從而延緩椎間盤退變過程。地塞米松（Dexamethasone，Dex）是合成的糖皮質(zhì)激素，具有抗炎、抗過敏、抗休克、免疫抑制等重要生理和藥理作用，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用[5]。淫羊藿苷和地塞米松在改善腰椎間盤退行性病變方面均有相關(guān)報(bào)道，然而目前未見二者以及聯(lián)合用藥在髓核細(xì)胞方面的相關(guān)研究。本研究以人髓核細(xì)胞（human nucleus pulposus cells，hNPs）為研究對(duì)象，探討ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs增殖的影響，以及對(duì)hNPs內(nèi)Aggrecan、Col2a表達(dá)、炎癥介質(zhì)和基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP-13）的影響。以期為預(yù)防、延緩及治療椎間盤退行性病變提高實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

hNPs（sciencell公司），重組人白細(xì)胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）（Peprotech公司），胰酶、胎牛血清（FBS）和DMEM/F12培養(yǎng)基（Gibco公司），淫羊藿苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院），Dex（Sigma公司）；CCK-8試劑盒、RIPA裂解液和BCA試劑盒（上海碧云天公司），硝酸纖維素膜（Bio-Rad公司），Aggrecan、MMP-13和Col2a兔抗（AbcamCambridge公司）及β-actin山羊抗兔二抗（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），Trizol（Invitrogen公司），TaKaRaPrime-ScriptTMRT-PCRKit（TaKaRa公司），PCR引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 hNPs培養(yǎng)hNPs用含10%FBS、DMEM/F12培養(yǎng)基（pH7.2），置于37℃、5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中孵育。觀察細(xì)胞狀態(tài)，待生長(zhǎng)到80%～90%融合時(shí)用0.25%的胰蛋白酶消化傳代。

1.2.2 CCK-8檢測(cè)hNPs增殖取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hNPs，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔6.5×103個(gè)/150μl密度接種至96孔培養(yǎng)板，邊緣用無菌PBS填充，10~24h后根據(jù)不同處理因素將細(xì)胞隨機(jī)分組：只含培養(yǎng)基組（control）、ICA作用組（ICA）、Dex作用組（Dex）、ICA與Dex作用組（ICA+Dex）。ICA作用組分別用終濃度5、10、20及40μmol/LICA處理hNPs；Dex作用組分別用終濃度0.1、0.2、0.4及0.8μmol/L Dex處理細(xì)胞；ICA與Dex作用組用ICA（終濃度10μmol/L）和Dex（終濃度0.2μmol/L）同時(shí)處理細(xì)胞。每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，每孔200μl，繼續(xù)培養(yǎng)48 h加入20μl CCK-8，37℃孵育3 h，充分震蕩10min后，酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)吸光值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值，細(xì)胞活力以control組的百分比表示。

1.2.3 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子分泌表達(dá)水平取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hNPs，調(diào)整細(xì)胞濃度，按每孔2.0× 104個(gè)/100μl密度接種至24孔培養(yǎng)板，10～24 h后根據(jù)不同處理因素將細(xì)胞隨機(jī)分為兩大組：對(duì)照組（control）只加培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組（IL-1β組）加入終濃度為10 ng/m l IL-1β，其中IL-1β的濃度參考文獻(xiàn)[17]選定。IL-1β組又根據(jù)不同藥物作用分為：ICA+ IL-1β組（終濃度為10μmol/L ICA）、Dex+IL-1β組（終濃度為0.2μmol/L Dex）、ICA+Dex組（ICA終濃度10μmol/L+終濃度0.2μmol/L Dex）處理細(xì)胞。每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，每孔600μl，繼續(xù)培養(yǎng)48 h收集上清液，按照ELISA試劑盒使用說明書檢測(cè)IL-6及IL-8的含量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.2.4 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平將hNPs細(xì)胞（每孔1.5×106個(gè)/2ml）接種于6孔板，檢測(cè)Aggrecan和Col2a表達(dá)的實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理與1.2.2完全相同。檢測(cè)MMP-13表達(dá)的實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理與1.2.3完全相同。培養(yǎng)48 h收集各組細(xì)胞，用含RIPA裂解液裂解細(xì)胞；BCA法測(cè)定蛋白濃度并定量；SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、抗體孵育，利用免疫反應(yīng)化學(xué)發(fā)光劑上機(jī)檢測(cè)蛋白的表達(dá)，以β-actin作為內(nèi)參。其中一抗為Aggrecan（1∶200）、Col2a（1∶500）和MMP-13（1∶500）兔抗抗體（1∶200）；二抗為β-actin辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔抗體（1∶1500）。

1.2.5 RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平將hNPs（每孔1.3×106個(gè)/2ml）接種于6孔板，實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理與1.2.4相同。收集到的細(xì)胞用Trizol法提取各組細(xì)胞的總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)提取RNA濃度并純度；將調(diào)整至同一濃度的各組總RNA按照TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA；然后以cDNA為模板，以β-actin為內(nèi)參，進(jìn)行基因片段的擴(kuò)增，PCR引物見表1。用TaKaRa PrimeScriptTMRT-PCR Kit試劑盒采用兩步法RT-PCR檢測(cè)。反應(yīng)條件：94℃，5min；36個(gè)循環(huán)（95℃，30 s；60℃，35 s；72℃，50 s）；72℃，終延伸10min。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)2-ΔΔCT方法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)方差（±s）表示，采用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 實(shí)時(shí)定量PCR引物

2 結(jié)果

2.1 人髓核細(xì)胞

倒置顯微鏡下觀察hNPs多呈短梭形，胞漿均勻，邊界清楚。其增殖速度適中，貼壁生長(zhǎng)較好（見圖1）。

2.2 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs增殖的影響

CCK-8檢測(cè)ICA與Dex單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)hNPs增殖的影響，結(jié)果顯示：與Control組比較，低濃度的ICA和Dex單獨(dú)作用均提高h(yuǎn)NPs存活率，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（圖2A、B）。為了檢測(cè)ICA和Dex聯(lián)合作用對(duì)hNPs增殖的影響，選取2者促增殖效果最大時(shí)對(duì)應(yīng)的藥物濃度，觀察2者聯(lián)合作用對(duì)hNPs增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10μmol/L ICA和0.2μmol/LDex聯(lián)合用藥時(shí)hNPs的存活率高于單獨(dú)用藥時(shí)存活率（與ICA組比較：P=0.024；與Dex組比較：P=0.032）（圖2C）。

2.3 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs表達(dá)Aggrecan和Col2a的影響

圖1 hNPs（×100）

Western blot及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與control組比較，ICA和Dex單獨(dú)作用促進(jìn)Aggrecan和Col2a的mRNA及蛋白表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ICA組mRNA：PAggrecan=0.029，PCol2a=0.023；蛋白：PAggrecan=0.038，PCol2a=0.039；Dex組mRNA：PAggrecan=0.024，PCol2a=0.027；蛋白：PAggrecan=0.034，PCol2a=0.017）；而ICA和Dex聯(lián)合用藥組高于單獨(dú)用藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（與ICA組比較mRNA：PAggrecan=0.01，PCol2a=0.001；蛋白：PAggrecan=0.011，PCol2a=0.006；與Dex組比較mRNA：PAggrecan=0.03，PCol2a=0.024；蛋白：PAggrecan= 0.029，PCol2a=0.025）。見圖3。

2.4 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)IL-1β誘導(dǎo)hNPs炎癥介質(zhì)IL-6及IL-8的影響

ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，IL-6和IL-8在IL-1β組中的表達(dá)水平高于control組（PIL-6=0.003，PIL-8= 0.001）；其在ICA組、Dex組及ICA和Dex聯(lián)合用藥組的表達(dá)水平低于IL-1β組（ICA組：PIL-6=0.047，PIL-8=0.016；Dex組：PIL-6=0.019，PIL-8=0.015；ICA+Dex組：PIL-6=0.006，PIL-8=0.002）；而ICA和Dex聯(lián)合用藥組低于單獨(dú)用藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（與ICA組比較：PIL-6=007，PIL-8=0.003；與Dex組比較：PIL-6=0.005，PIL-8=0.004）。見圖4。

2.5 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)IL-1β誘導(dǎo)hNPs表達(dá)MMP-13的影響

Western blot及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，MMP-13在IL-1β組中的表達(dá)水平高于control組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（mRNA：P=0.005；蛋白：P=0.005）；ICA和Dex單獨(dú)或聯(lián)合作用后IL-1β的表達(dá)水平低于IL-1β組（ICA組mRNA：P=0.037；蛋白：P= 0.035；Dex組mRNA：P=0.011；蛋白：P=0.013；ICA+ Dex組mRNA：P=0.004.；蛋白：P=0.005）；同時(shí)ICA和Dex聯(lián)合用藥組低于單獨(dú)用藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（與ICA組比較mRNA：P=0.005；蛋白：P=0.000；與Dex組比較mRNA：P=0.006；蛋白：P= 0.006）。見圖5。

圖2 CCK-8法檢測(cè)ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs增殖的影響

圖3 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)hNPs表達(dá)Aggrecan和Col2a的影響

圖4 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)IL-1β誘導(dǎo)hNPs炎癥介質(zhì)IL-6及IL-8的影響

圖5 ICA和Dex聯(lián)合用藥對(duì)IL-1β誘導(dǎo)hNPs表達(dá)MMP-13的影響

3 討論

椎間盤退行性病變是一種慢性病變。當(dāng)退行性病變發(fā)生時(shí)，椎間盤的成分、結(jié)構(gòu)、功能漸進(jìn)性被破壞，導(dǎo)致椎間盤高度和脊柱的穩(wěn)定性改變，進(jìn)而影響椎間盤生物力學(xué)功能，加重小關(guān)節(jié)和其他結(jié)構(gòu)負(fù)擔(dān)[6]。近年來，通過藥物治療、物理療法、針灸、推拿、生物治療等手段及時(shí)干預(yù)退行性病變的諸多環(huán)節(jié)，維持髓核細(xì)胞數(shù)量、功能并改善其生存微環(huán)境，為扭轉(zhuǎn)和修復(fù)椎間盤退行性病變帶來新希望[7]。

髓核細(xì)胞是椎間盤的主要細(xì)胞之一，是椎間盤功能的主要執(zhí)行者。髓核細(xì)胞數(shù)量的減少以及細(xì)胞外基質(zhì)的丟失進(jìn)而導(dǎo)致椎間盤發(fā)生退行性病變。文獻(xiàn)報(bào)道[8]，退行性病變椎間盤中髓核細(xì)胞凋亡率[（61.3±24.5）%]比正常椎間盤中髓核細(xì)胞凋亡率[（15.5±6.8）%]高出很多；也有研究顯示[9]，Dex可促進(jìn)髓核細(xì)胞增殖，本研究通過CCK-8法也發(fā)現(xiàn)了相同的現(xiàn)象。另外，本研究首次發(fā)現(xiàn)ICA也可以促進(jìn)髓核細(xì)胞增殖。但是Dex和ICA單獨(dú)作用，增殖不顯著，于是本研究將2者聯(lián)合處理髓核細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)增殖。文獻(xiàn)報(bào)道，絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信號(hào)通路與髓核細(xì)胞增殖有關(guān)[10]。同時(shí)，ICA促細(xì)胞增殖作用也與MAPK信號(hào)通路有關(guān)[11]，推測(cè)2者促髓核細(xì)胞增殖的分子機(jī)制也與MAPK信號(hào)通路有關(guān)。髓核細(xì)胞作為椎間盤組織工程的種子細(xì)胞，其保持和再植可延緩椎間盤退行性病變[12]，因此，可以考慮采用Dex和ICA 2者聯(lián)合作用來治療椎間盤退行性病變。

Aggrecan和Col2a是椎間盤基質(zhì)內(nèi)最主要的蛋白基質(zhì)，主要由髓核細(xì)胞分泌表達(dá)?；|(zhì)內(nèi)的Aggrecan大量結(jié)合透明質(zhì)酸形成富含負(fù)電荷、具有彈性和親水性的聚合體。當(dāng)椎間盤發(fā)生退行性病變時(shí)，整個(gè)椎間盤的含水量下降，Aggrecan含量減少，同時(shí)伴有Col1a的增多，Col2a的減少。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[4]，ICA促進(jìn)腰椎間盤退行性病變的大鼠模型中Col2amRNA表達(dá)，同時(shí)Dex可以上調(diào)兔髓核細(xì)胞中Aggrecan、Col2a的表達(dá)[13]。但是，2者在hNPs中的作用沒有研究報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)，Dex和ICA單獨(dú)作用可促進(jìn)hNPs Aggrecan和Col2a表達(dá)，2者聯(lián)合作用效果更顯著，提示Dex和ICA聯(lián)合作用將更加有效地改善椎間盤退行性病變。

炎癥因子在椎間盤退行性病變中發(fā)揮著重要的作用[14-17]。研究顯示，突出腰椎間盤組織培養(yǎng)液中IL-6含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常椎間盤組織中的IL-6含量[18]，和IL-6一樣，IL-8也參與椎間盤組織的退行性病變[19]；另外，白藜蘆醇能夠抑制退行性病變椎間盤組織中IL-6和IL-8的異常表達(dá)，對(duì)阻止頸椎間盤退行性病變具有良好作用[20]。文獻(xiàn)報(bào)道[21]，ICA和Dex都可抑制炎癥因子IL-6和IL-8的釋放。但是，2者在髓核細(xì)胞中的作用沒有報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)，ICA和Dex也可抑制IL-1β誘導(dǎo)hNPs炎癥因子IL-6和IL-8的表達(dá)，提示其對(duì)椎間盤退行性病變有改善作用。

MMPs是一類具有鋅離子、鈣離子活性的蛋白水解酶家族。其中，MMP-1、8主要降解Ⅲ型膠原和Ⅰ型膠原，MMP-13是Ⅱ型膠原降解酶。MMPs在椎間盤內(nèi)的表達(dá)受到多種因素的調(diào)節(jié)，其中白細(xì)胞介素1（Interleukin-1，IL-1）、IL-6及前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）等炎癥因子可以促進(jìn)其合成[22-23]。有學(xué)者報(bào)道，IL-6影響MMP-13/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1）的平衡，從而參與椎間盤退行性病變過程[24]。研究發(fā)現(xiàn)ICA可降低IL-1β誘導(dǎo)的人軟骨肉瘤細(xì)胞MMP-13表達(dá)[25]，Dex也可降低MMP-13表達(dá)[26]。但是2者以及聯(lián)合在hNPs中的作用未見報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)2者聯(lián)合對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的hNPs表達(dá)MMP-13降低更加明顯，提示ICA和Dex聯(lián)合作用可能通過抑制炎癥因子降低MMP-13活性，減緩基質(zhì)的降解，進(jìn)而改善椎間盤退行性病變。

綜上所述，ICA和Dex聯(lián)合作用可促進(jìn)hNPs增殖，同時(shí)增加Aggrecan和Col2a、mRNA水平的表達(dá)。此外，抑制IL-1β誘導(dǎo)的hNPs炎癥介質(zhì)IL-6、IL-8的分泌表達(dá)，降低MMP-13蛋白質(zhì)、mRNA水平。這些結(jié)果均提示ICA和Dex聯(lián)合作用對(duì)改善椎間盤退行性病變有顯著的效果，然而，其在退行性病變的髓核細(xì)胞以及退行性病變椎間盤的動(dòng)物模型中的研究以及分子機(jī)制的探討有待深入研究，以期為改善椎間盤退行性病變提供直接的證據(jù)，這也是進(jìn)一步研究的方向。

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（張西倩編輯）

Effect of icariin in combination w ith Dexamethasone on cell proliferation and secretion expression of human nucleus pulposus cells

Zhong-kai Feng,Yong-qiang Sun,Ru-yin Liu,Zong-jin Yue,Xin-liWang
(Department of Orthopedics,Rachiopathy Ward,Henan Province Hospital of TCM,The Second Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou,Henan 450002,China)

ObjectiveTo investigate the effect of icariin(ICA)in combination with Dexamethasone(Dex)on cell proliferation and secretion expression of Aggrecan,typeⅡcollagen(Col2a),IL-6,IL-8 and MatrixMetalloproteinase-13(MMP-13)in human nucleus pulposus cells(hNPs).MethodsThe experimentwas divided into different groups based on different treatments:control group(only culturemedium),ICA group(20μM/L ICA),Dex group(0.2μM/L Dex),ICA+Dex group(20μM/L ICA+0.2μM/L Dex),IL-1βgroup(10 ng/mL IL-1β),ICA+IL-1βgroup(20 μM/L ICA+10 ng/mL IL-1β),Dex+IL-1βgroup(0.2μM/L Dex+10 ng/mL IL-1β),ICA+Dex+IL-1βgroup (20μM/L ICA+0.2μM/LDex+10 ng/mL IL-1β).Each group was treated for 48 h.Cell proliferation was detectedby CCK-8 assay.The expression levels of Aggrecan,Col2a,IL-6,IL-8 and MMP-13 were examined by Western blotting,RT-PCR and ELISA methods.ResultsICA(20μM/L)or Dex(≤0.2μM/L)at low concentrations promoted hNPs proliferation,but there was no significant difference when compared with the control group(P＞0.05). However,20μM/L ICA in combination with 0.2μM/L Dex significantly increased the cell survival rate of hNPs when compared with the control group,the ICA and teh Dex single treatment group(P＜0.05).The protein and mRNA expression of Aggrecan and Col2a in hNPs were also markedly increased by ICA in combination with Dex when compared with the control group,the ICA and the Dex single treatment group(P＜0.05).In addition,the secretion expression of IL-6,IL-8 and MMP-13 in IL-1β-induced hNPs were significantly inhibited by ICA in combination with Dex when compared with IL-1β,ICA+IL-1βor Dex+IL-1βgroups(P＜0.05).ConclusionsThese findings suggest that icariin in combination with Dexamethasone significantly promotes cell proliferation and the expression of Aggrecan and Col2a in hNPs,and inhibites the secretion expression of IL-6,IL-8 and MMP-13 in IL-1β-induced hNPs,providing a preliminary experimental basis for drug treatment of intervertebral disc degeneration.

icariin;Dexamethasone;hNPs;aggrecan;Col2a;intervertebral disc degeneration

R285.5

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.24.003

1005-8982（2016）24-0011-07

2016-04-11