于明良 劉麗 彭曉紅 楊文超

(1.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬武漢普愛醫(yī)院麻醉科，湖北 武漢 430022; 2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，湖北 武漢 430022)

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氯胺酮聯(lián)合可樂定對神經(jīng)病理性痛大鼠疼痛感覺分辨和情緒體驗的影響

于明良1劉麗2△彭曉紅1楊文超1

(1.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬武漢普愛醫(yī)院麻醉科，湖北 武漢 430022; 2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，湖北 武漢 430022)

目的 對神經(jīng)病理性痛大鼠在聯(lián)合使用氯胺酮(KET)與可樂定條件下其疼痛分辨和情緒體驗受影響的情況進(jìn)行觀察。方法 雄性SD大鼠30只，分為假手術(shù)組(S組)、坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型組(C組)、氯胺酮組(K組)、可樂定組(CL組)、氯胺酮+可樂定組(KC組)。C組、K組、CL組和KC組采用坐骨神經(jīng)慢性壓迫法(CCI)制備大鼠神經(jīng)病理性痛模型，S組僅暴露坐骨神經(jīng)，不結(jié)扎。術(shù)后3～10d，每天給予K組氯胺酮(0.3 mg/kg)、CL組可樂定(1 μg/kg)、KC組氯胺酮(0.3 mg/kg) +可樂定(1 μg/kg)鞘內(nèi)注射，S組和C組鞘內(nèi)注射等容量生理鹽水。各組分別于術(shù)前、術(shù)后3、7、10 d測定機械痛閾和熱痛閾，各組于術(shù)后第10天行反映痛情緒的大鼠位置逃避實驗(PEAP)。結(jié)果 與S組比較，C組、K組、CL組、KC組術(shù)后機械痛閾和熱痛閾降低(P<0.05)，其在白室所待時間延長(P<0.05)；與C組比較，K組、CL組、KC組術(shù)后機械痛閾和熱痛閾升高(P<0.05)，其在白室所待時間縮短(P<0.05)；與K組、CL組比較，KC組術(shù)后機械痛閾和熱痛閾升高(P<0.05)，其在白室所待時間明顯縮短(P<0.05)，減少了其位置逃避行為。結(jié)論 在聯(lián)合應(yīng)用氯胺酮及可樂定的情況下，神經(jīng)病理性疼痛大鼠所存在的熱痛和機械痛過敏現(xiàn)象能夠得到有效的抑制，而且CCI大鼠的痛行為和痛相關(guān)負(fù)性情緒也會得到較大的改善。

神經(jīng)病理性疼痛； 痛相關(guān)負(fù)性情緒； 氯胺酮； 可樂定

神經(jīng)病理性疼痛是因為神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂或者是最初的損傷而造成的疼痛，它是一種慢性狀態(tài)，不但包括外周或者中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能紊亂，還包括損傷和疾病。研究表明作為非競爭性N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDA)拮抗劑的氯胺酮(KET)，在神經(jīng)病理性疼痛的治療中發(fā)揮了重要作用[1]。而可樂定是一種α2受體激動劑，也具有一定的治療疼痛的作用。D.H.Roh[2]等發(fā)現(xiàn)，鞘內(nèi)注射可樂定可抑制由注射NMDA引起的大鼠疼痛反應(yīng)及磷酸化NR1的表達(dá)。本研究擬通過將氯胺酮和可樂定向鞘內(nèi)注射的方法，觀察對其所產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用效果以及影響慢性病理性痛大鼠的情緒體驗及疼痛感覺分辨的情況進(jìn)行初步的觀察與探究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 實驗共選取了30只SD大鼠，分為五組，每組6只，分別為假手術(shù)組(S組)、坐骨神經(jīng)結(jié)扎組(C組)、氯胺酮組(K組)、可樂定組(CL組)及氯胺酮+可樂定組(KC組)。

1.2 模型制備 參照文獻(xiàn)[3]的方法，麻醉大鼠后，游離大鼠坐骨神經(jīng)，用4-0絲線在坐骨神經(jīng)干位置扎四道，每道間隔約1 mm，結(jié)扎的松緊程度以不對血運造成影響為宜。其中S組并不結(jié)扎，僅將坐骨神經(jīng)暴露，其余各組均制作坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型。術(shù)后3～10 d，每天給予K組氯胺酮(0.3 mg/kg)、CL組可樂定(1 μg/kg)、KC組氯胺酮(0.3 mg/kg) +可樂定(1 μg/kg)鞘內(nèi)注射，S組和C組鞘內(nèi)注射等容量生理鹽水。

1.3 藥品、試劑和儀器情況 鹽酸氯胺酮注射液(福建古田藥業(yè)有限公司，批號：KH140309)；可樂定(湖北隨州天豐化工科技有限公司，批號：201405200411)；PL-200熱輻射儀(成都泰盟科技有限公司)；位置逃避實驗箱(自制)。

1.4 行為學(xué)測定 各組大鼠分別在術(shù)前、術(shù)后3、7、10 d時測定機械痛閾(MWT)和熱痛閾(TWL)。(1)機械痛閾：采用up-down法計算對大鼠的機械痛閾進(jìn)行測定[4]。把大鼠放置在箱子中適應(yīng)30 min以上，箱子為30 cm×40 cm×60 cm的有機玻璃箱，底部為1 cm× 1 cm的鐵絲網(wǎng)，采用von Frey纖維絲測定機械縮足反射閾值(PWT)。(2)熱痛閾(TWL)：參照Hargreaves等[5]的方法測定熱痛閾，熱輻光源通過3 mm厚的玻璃板對大鼠右后肢足底的中部進(jìn)行照射，并對其縮足反應(yīng)出現(xiàn)的時間予以記錄，且每隔5 min測定一次，連測3次，取其平均值作為熱痛閾。(3)位置逃避實驗：術(shù)后第10天進(jìn)行位置逃避實驗，參考C.J.LaBuda等[6]方法。將動物放于安靜、獨立的環(huán)境中，使其適應(yīng)環(huán)境至少1 h，測試箱為有機玻璃箱(60 cm × 30 cm × 30 cm)，其一半為暗室，另一半明室環(huán)境。在測試開始的30 min內(nèi)允許大鼠在測試箱中自由活動。測試時將其放入測試箱中央，每隔15 s 用60 g Von Frey纖毛刺激大鼠后足底中部，當(dāng)大鼠停留在暗室時刺激其患側(cè)足，在明室時刺激其健側(cè)足。每隔5 min記錄大鼠在明室和暗室分別所待時間。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠機械痛閾和熱痛閾變化情況 各組大鼠在術(shù)前1 d的機械痛閾和熱痛閾比較差異無統(tǒng)計學(xué)，P>0.05。較之術(shù)前以及S組，K組、CL組和KC組大鼠機械痛閾和熱痛閾明顯降低，P<0．05；較之C組,K組、CL組和KC組大鼠在術(shù)后的3、7、10 d都出現(xiàn)了機械痛閾和熱痛閾明顯升高，P<0.05；較之K組、CL組，KC組術(shù)后機械痛閾和熱痛閾升高，P<0.05。見表1，表2。

組別n術(shù)前術(shù)后不同時段3d7d10dS621．7±2．321．5±3．122．6±3．323．2±2．8C623．1±3．211．9±3．3#△6．8±2．1#△9．3±1．6#△K622．6±1．913．7±2．2#△▲14．2±3．1#△▲14．9±2．4#△▲CL623．1±2．613．1±2．9#△▲13．6±2．8#△▲14．8±2．8#△▲KC622．4±1．915．2±2．1#△▲16．4±2．4#△▲★☆17．6±2．4#△▲★☆

注：與S組比較，#P<0.05；與術(shù)前比較，△P<0.05；與C組比較，▲P<0.05；與K組比較，★P<0.05；與CL組比較，☆P<0.05。

組別n術(shù)前術(shù)后不同時段3d7d10dS611．4±0．811．4±0．311．5±0．9 11．5±0．8C611．5±0．47．2±0．8#△8．01±0．8#△ 8．2±0．8#△K611．2±0．47．8±0．4#△▲8．23±0．2#△▲9．2±0．7#△▲CL611．3±0．47．7±0．4#△▲8．25±0．3#△▲8．6±1．2#△▲KC611．6±0．59．4±1．3#△▲ 9．9±1．5#△▲★☆ 10．2±1．1△▲★☆

注：與S組比較，#P<0.05；與術(shù)前比較，△P<0.05；與C組比較，▲P<0.05；與K組比較，★P<0.05；與CL組比較，☆P<0.05。

2.3 鞘內(nèi)注射氯胺酮和可樂定對CCI大鼠位置逃避行為的影響 C組與S組相比，其在白室所待時間明顯增加(P<0.05)，提示CCI大鼠表現(xiàn)出明顯的痛厭惡情緒。鞘內(nèi)注射氯胺酮和可樂定組0.5 h后，K組、CL組和KC組與C組相比，其在白室所待時間明顯縮短(P<0.05)；與K組和CL組相比，KC組在白室所待時間均明顯縮短(P<0.05)，位置逃避行為減少，此作用在實驗開始后20 min具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) ,見表3。

組別5min10min15min20min25min30minS35±726±629±827±728±931±8C42±845±9#55±11#48±12#57±14#53±11#K41±831±632±7▲27±6▲25±5▲22±6▲CL43±932±734±6▲30±6▲28±5▲27±6▲KC42±730±1128±9▲22±7▲★☆18±6▲★☆16±5▲★☆

注：與S組相比，#P<0.05；與C組比較，▲P<0.05；與K組比較，★P<0.05；與CL組比較，☆P<0.05。

3 討 論

目前臨床上神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病率呈現(xiàn)快速增長，疼痛及負(fù)性情緒給患者的身心造成了嚴(yán)重的損害。T.T.Li等[7]研究發(fā)現(xiàn)周圍炎性痛可導(dǎo)致前扣帶皮層(ACC)內(nèi)NMDA的NR2A和NR2B兩種受體亞基表達(dá)上調(diào)，易化其突觸傳遞過程，增強ACC內(nèi)神經(jīng)元興奮性，提示NMDA受體的NR2A、NR2B亞基參與痛相關(guān)厭惡情緒的形成。相關(guān)研究表明神經(jīng)病理性疼痛發(fā)展過程中激活NMDA受體，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流，內(nèi)流的Ca2+與CaM結(jié)合，進(jìn)而磷酸化激活CaMKII,p-CaMKII又可以磷酸化激活NR2B,導(dǎo)致痛相關(guān)負(fù)性情緒的形成，因此推測抑制NMDA受體的激活，就可以有效抑制痛相關(guān)負(fù)性情緒的形成。

氯胺酮和可樂定單獨使用都可以用于神經(jīng)病理性疼痛的治療。氯胺酮通過阻斷NMDA受體，直接抑制PKC的活性，減少GAP-43的生成。還可以通過降低Ca2+濃度抑制GaM與GAP-43的解離，使GAP-43釋放減少，通過這兩條途徑使脊髓的中樞敏化減輕，緩解痛覺過敏[8]。但氯胺酮對交感神經(jīng)和循環(huán)有興奮作用，會導(dǎo)致血壓升高、心率增快、眼內(nèi)壓和顱內(nèi)壓升高，興奮邊緣系統(tǒng)，出現(xiàn)惡夢幻覺等不良反應(yīng)[9]。

研究[10]表明中樞性α2受體參與氯胺酮鎮(zhèn)痛作用，作為α2受體激動劑的可樂定可能通過抑制谷氨酸的釋放，加強氯胺酮的鎮(zhèn)痛作用。而可樂定亦可以通過調(diào)節(jié)Ca2+的濃度使GAP-43的表達(dá)下調(diào)而減輕疼痛。并且可樂定可以降低高血壓、減慢心率、鎮(zhèn)靜和一定的鎮(zhèn)痛作用，從藥理作用上可以拮抗氯胺酮的副作用，兩者合用具有協(xié)同互補的作用。

本實驗觀察發(fā)現(xiàn)氯胺酮和可樂定聯(lián)合使用對坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠的熱痛閾及機械痛閾在術(shù)后3、7、10 d都有明顯的提升。在坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后10 d，氯胺酮聯(lián)合可樂定組大鼠位置逃避行為減少，提示氯胺酮聯(lián)合可樂定鞘內(nèi)給藥的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于氯胺酮或者可樂定單獨使用，且未發(fā)現(xiàn)單獨使用氯胺酮所出現(xiàn)的易激惹、煩躁等不良反應(yīng)。綜上所述，氯胺酮聯(lián)合可樂定使用通過不同的作用機制發(fā)揮協(xié)同鎮(zhèn)痛的作用，不僅可以減少副作用，還具有更理想的鎮(zhèn)痛效果，對于神經(jīng)病理性疼痛的治療提供了新的思路。

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武漢市衛(wèi)計委科研基金(編號：WX14C63)

R614.R-332

B

1000-744X(2016)03-0251-03

2015-09-08)

△通信作者