■高青山 張旭光 姚雪瑞 宮 強 金遠銘 嚴昌國

(延邊大學肉?？茖W產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心，吉林延吉133000)

出生～6月齡時期的小牛即為犢牛期，在這期間小牛的生長性能最佳，且在牛的飼養(yǎng)過程中尤為重要，其飼養(yǎng)管理和后期飼養(yǎng)有著直接關(guān)系。這個階段犢牛的生存環(huán)境變化巨大；一是犢牛從母體無菌環(huán)境到體外環(huán)境，二是吸收母體營養(yǎng)，到自身消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)[1]。一直以來，延邊黃?？煞蹦概７敝承实牡拖陆o延邊黃牛資源帶來危機，使得延邊黃牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展不穩(wěn)定，為了保障延邊黃牛的繁殖性能，就必須解決犢牛成活率低及可繁母牛生產(chǎn)周期中存在的問題。相關(guān)研究顯示，代乳料配合母乳對犢牛早期生長性能均有增強效果，還可以縮短哺乳期[2]。王中群研究結(jié)果表明，代乳粉可以代替質(zhì)量差的母乳，還可以滿足犢牛生長發(fā)育所需的營養(yǎng)[3]。周建民等[4-5]報道，代乳粉配合優(yōu)質(zhì)開食料，有利于犢牛的生長。高占峰[6]研究表明，60 d飼喂代乳粉試驗表明，代乳粉對犢牛生長沒有負面影響，節(jié)省大量鮮奶，還可以提高免疫力，并減少腹瀉率。刁其玉等[7]報道，代乳粉可提高犢牛的日增重。母子分離技術(shù)，即產(chǎn)后母子分離不喝母乳，以代乳粉代替并且45 d斷奶。本試驗采用母子分離犢牛培育技術(shù)方式，采取代乳粉替代母乳飼養(yǎng)新生延邊黃牛，探求其對延邊黃牛犢牛生長性能、免疫相關(guān)指標和血液指標的影響，探索母子分離技術(shù)是否可以提高犢牛生長性能、免疫力和緩解犢牛的應(yīng)激。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

于延邊大學延邊黃?？萍紕?chuàng)新示范園選取初生重相近、體況良好、健康無病的延邊黃牛初生犢牛60頭。平均初生重（24.91±1.65）kg，組內(nèi)與組間差異不顯著（P＞0.05），所有犢牛根據(jù)初生重分為3組，每組20頭。

1.2 試驗設(shè)計

①試驗組Ⅰ（母牛產(chǎn)后不哺乳）：采用完全母子分離培育技術(shù)。出生后直接與母牛隔離，2 h內(nèi)攝入初乳粉（1劑量初乳粉富含60 g免疫球蛋白G1、26.7%免疫球蛋白G2，循環(huán)免疫球蛋白95%），出生12 h內(nèi)再次攝入初乳粉。2日齡開始飼喂代乳粉，7日齡開始訓練采食固體開食料。整個飼養(yǎng)試驗過程中，自由采食優(yōu)質(zhì)干草，自由飲水。犢牛斷奶之前每天7：00和16：00進行飼喂代乳粉，代乳粉的飼喂量為犢牛體重10%，代乳粉與水按1∶7的比例調(diào)制飼喂犢牛。45日齡開始斷奶，犢牛的連續(xù)3 d日均采食1.5 kg開食料時即可徹底斷奶。

②試驗組Ⅱ（母牛產(chǎn)后定時哺乳）：采用定時母子分離方式培育技術(shù)（犢牛7日齡開始日間人工哺乳，夜間隨母哺乳）。犢牛斷奶之前每天7：00進行飼喂代乳粉，15:00進行采食開食料的訓練，17:00開始隨母哺乳。犢牛的連續(xù)3 d日均采食1.5 kg開食料時即可徹底斷奶。整個飼養(yǎng)試驗過程中，自由采食優(yōu)質(zhì)干草，自由飲水。

③對照組（母牛產(chǎn)后全天哺乳）：采用隨母哺乳，按傳統(tǒng)方式培育。整個飼養(yǎng)試驗過程中，自由采食優(yōu)質(zhì)干草，自由飲水。

1.3 日糧營養(yǎng)水平（見表1）

代乳粉主要原料：乳清粉、乳清濃縮蛋白、大豆?jié)饪s蛋白、碳酸鈣、磷酸氫鈣、氧化膽堿、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鈷、亞硫酸鈉、有機鋅、有機錳、有機硒、維生素A、D3、E、B1、B6、B12、葉酸等。

表1 日糧營養(yǎng)水平（%）

1.4 測定指標與方法

1.4.1 犢牛體重和體尺的測定

試驗犢牛1月齡、2月齡、3月齡、4月齡時，稱重并測量體尺（體高、體斜長、胸寬、胸圍、胸深、腰角髖、尻長）；體重（kg）在清晨以空腹狀態(tài)下稱重。

1.4.2 采食量的測定

每天測一次采食量，并計算出日平均采食量。

1.4.3 犢牛不同階段免疫相關(guān)指標測定

1.4.3.1 試驗樣品的采集與處理

在試驗牛3周齡、6周齡、9周齡時，早晨空腹進行頸靜脈采血，用真空血清采血管（內(nèi)含促凝劑）采血樣10 ml，用于分析免疫相關(guān)指標的變化。靜置放置凝固后將其離心（3 500 r/min，離心15 min），得到的上清液為血清，將血清放置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.3.2 測定項目及方法

血清中的免疫球蛋白（IgG）采用免疫透射比濁法檢測；堿性磷酸酶（ALP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST）等采用速率法檢測；生長激素（GH）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）、白細胞介素-1（IL-1）、皮質(zhì)醇（COR）等采用化學發(fā)光法檢測。

1.5 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)先經(jīng)過Excel 2007初步處理后，再采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（one way-ANOVA）和多重比較，結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛生長性能的影響

表2 體重的變化（kg）

由表2可知，犢牛的3月齡重，試驗組Ⅰ、Ⅱ顯著高于對照組(P＜0.05)，試驗組Ⅱ顯著低于試驗組Ⅰ(P＜0.05)；犢牛的4月齡重，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著高于對照組(P＜0.05)。

通過表3可知，2～3月齡之間增重，試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ、對照組（P＜0.05），試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05）；3～4月齡之間增重，試驗組Ⅰ、Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05）；出生～4月齡之間增重，試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ、對照組（P＜0.05），試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05）。

表3 犢牛各月齡間增重(kg)

通過表4可知，4月齡體斜長，試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ、對照組（P＜0.05），且試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05）；4月齡體高，試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05）；3月齡胸圍，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著大于對照組（P＜0.05）；4月齡胸圍試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著大于對照組（P＜0.05）；4月齡管圍，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著大于對照組（P＜0.05）。

表4 犢牛體尺的變化（cm）

通過表5可知，犢牛4月齡重，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05），試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ（P＜0.05）；全期增重，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05），試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ（P＜0.05）；平均日增重，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ高于對照組，差異顯著（P＜0.05）。

表5 日增重、全期增重及采食量變化（kg）

通過表6可知，日均采食開食料指標7～30日齡間試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ（P＜0.05）；31～60日齡間試驗組Ⅰ日均采食開食料量顯著高于試驗組Ⅱ（P＜0.05）；試驗組Ⅰ犢牛31～60日齡間采食開食料的量達到早期斷奶的標準水平并完成斷奶。61～90日齡時試驗組Ⅱ日均采食開食料量急速上升，達到0.97 kg，并完成斷奶。

表6 試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ日均采食開食料情況（kg）

2.2 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛血清免疫球蛋白的影響

表7 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛血清免疫球蛋白含量的影響(ng/ml)

從表7看出，對照組3～9周齡期間犢牛血清免疫球蛋白IgG含量有著逐漸下降的趨勢，試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ的IgG含量3～6周齡有所下降，但6～9周齡期間逐漸上升，總體趨勢先下降后上升，從表7中數(shù)值可看出，試驗組Ⅰ、Ⅱ略優(yōu)于對照組，但各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛血清細胞因子的影響

通過表8可知，犢牛3周齡時血清IL-1對照組與試驗組Ⅱ顯著高于試驗組Ⅰ（P＜0.05）；犢牛6周齡時血清IL-1對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05）；犢牛9周齡時血清IL-1試驗組Ⅱ顯著高于試驗組Ⅰ、對照組（P＜0.05）；犢牛3周齡到9周齡期間血清IL-1平均值試驗組Ⅱ顯著高于對照組和試驗組Ⅰ（P＜0.05）。3周齡血清TNF-α對照組與試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ差異不顯著，但對照組和試驗組Ⅱ高于試驗組Ⅰ；6周齡到9周齡時血清TNF-α對照組顯著高于試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ（P＜0.05），TNF-α平均值試驗組Ⅰ顯著低于試驗組Ⅱ和對照組。

表8 不同犢牛培育技術(shù)對IL-1和TNF-α的影響(pg/ml)

2.4 不同犢牛培育技術(shù)對免疫相關(guān)激素水平的影響

通過表9可知，Cort含量變化趨勢試驗組與對照組基本一致。IGF-1含量3周齡時試驗組Ⅰ顯著低于試驗組Ⅱ和對照組（P＜0.05），6、9周齡對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05），其3～9周齡平均值對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ。

表9 不同犢牛培育技術(shù)對免疫相關(guān)激素水平的影響(ng/ml)

2.5 不同犢牛培育技術(shù)對ALP活性的影響

通過表10可知，3周齡犢牛血清ALP活性，對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05）；6周齡犢牛血清ALP，對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05）；9周齡犢牛血清ALP，對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05），試驗組Ⅰ顯著高于試驗組Ⅱ（P＜0.05）；犢牛3周齡到9周齡期間血清ALP平均值，對照組顯著低于試驗組Ⅰ、Ⅱ（P＜0.05）。

表10 不同犢牛培育技術(shù)對堿性磷酸酶活性的影響(U/l)

3 討論

3.1 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛生長性能的影響

本試驗測定結(jié)果顯示試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ采用的母子分離技術(shù)都顯著地提高了犢牛的生長發(fā)育。全期增重，分別提高了55.60%（P＜0.05）和42.98%（P＜0.05）；平均日增重試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ顯著高于對照組（P＜0.05），分別高出55.81%（P＜0.05）和44.18%（P＜0.05）。韓國相關(guān)研究表明，科學飼養(yǎng)條件下韓牛的4月齡體重能達到110 kg[8]，這一結(jié)果與本試驗相一致，在采用完全母子分離技術(shù)與定時母子分離技術(shù)的兩組犢牛的生長發(fā)育性能及體重都與韓國韓牛指標趨勢相一致，這表明本試驗采取母子分離技術(shù)有助于犢牛的生長發(fā)育。

根據(jù)試驗結(jié)果來看，試驗組Ⅱ的犢牛出生～2月齡期間增重速度較快，2～3月齡期間增重速度較慢，分析可能由于開始斷奶代乳粉的飼喂量減少，固體開食料的飼喂量增加，犢牛不能完全消化吸收固體開食料中的營養(yǎng)物質(zhì)，因此犢牛增重速度降低。3～4月齡期間由于犢牛消化系統(tǒng)發(fā)育基本完善，可完全消化吸收固體開食料中的營養(yǎng)物質(zhì)，因此犢牛的生長速度迅速上升；這一結(jié)果表明，在2月齡前采用母子分離技術(shù)使用代乳粉配合一定量的母乳代替母乳在前期可以滿足犢牛的營養(yǎng)需求。這一結(jié)果與王中群[3]報道的代乳粉可以代替質(zhì)量差的母乳，還可以滿足犢牛生長發(fā)育所需的營養(yǎng)結(jié)論一致。周建民等[4-5]報道，代乳粉配合優(yōu)質(zhì)開食料，有利于犢牛的生長。與刁其玉等[7]報道的代乳粉可提高犢牛的日增重的作用相一致。

3.2 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛血清IgG的影響

免疫球蛋白G（IgG）主要分布在動物血清中，是抗細菌、抗毒素、抗病毒抗體的重要組成部分，其含量可以間接表示血液用免疫球蛋白的含量，也是機體感染免疫過程中的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，是機體免疫水平的重要指標。犢牛血清IgG含量的提高可保證犢牛的健康[9]。Baumrucker等[10]報道，患腹瀉的犢牛血清IgG含量低于健康犢牛。研究表明，由于母牛胎盤結(jié)構(gòu)上的特異性，胎兒期的犢牛不能從母體獲得免疫因子，免疫球蛋白的傳遞被阻止[11]。本試驗研究結(jié)果表明，試驗組Ⅰ、Ⅱ和對照組相比無明顯差異，試驗組Ⅰ、Ⅱ其IgG含量隨著周齡增長而呈上升的趨勢，而對照組與之相反，說明母子分離技術(shù)可以提高犢牛的免疫水平，這是由于代乳料可以通過調(diào)節(jié)犢牛的胃腸道生態(tài)平衡，促進乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌的生長和繁殖，抑制有害菌如沙門氏菌、大腸桿菌等在腸壁的黏附和定植，維持犢牛腸道正常的消化道環(huán)境，提高犢牛機體的免疫，提高了延邊黃牛犢牛的免疫力。

3.3 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛血清細胞因子的影響

白細胞介素-1（IL-1）又名淋巴細胞刺激因子，主要有活化的單核-巨噬細胞產(chǎn)生。促進B細胞生長和分化，可刺激多種不同的間質(zhì)細胞釋放蛋白分解酶并產(chǎn)生一些效應(yīng)；腫瘤壞死因子（TNF-α）主要由活化的巨噬細胞、NK細胞及T淋巴細胞產(chǎn)生，促進T細胞及其他殺傷細胞對腫瘤細胞的殺傷，對機體免疫功能的調(diào)劑作用。Mosmann等[12]報道，IL-1和TNF-α作為先天免疫反應(yīng)的主要指標，在血清中含量的高低反應(yīng)肝損害的水平。王根生等[13]報道，IL-1的大量分泌可能會刺激各種免疫，導致TNF-α，IL-6，IL-8等炎性細胞的產(chǎn)生。

本試驗研究結(jié)果表明，3～9周齡對照組和試驗組ⅠIL-1含量隨周齡的增長而降低，試驗組Ⅱ血清IL-1在犢牛3～6周齡間有所下降，6周齡后逐漸上升。血清TNF-α對照組、試驗組Ⅱ隨周齡的增長而上升，試驗組Ⅰ血清TNF-α在犢牛6周齡后有所下降，試驗結(jié)果表明母子分離技術(shù)對犢牛沒有造成影響。

3.4 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛免疫相關(guān)激素的影響

Matsuo指出，機體受到應(yīng)激刺激時血液中的皮質(zhì)醇含量會上升[14]，血液中皮質(zhì)醇（Cort）含量是衡量機體應(yīng)激反應(yīng)的重要指標，血液中Cort值過高可以抑制生長激素和胰島素的分泌。本試驗結(jié)果表明，采用母子分離技術(shù)兩組血液中Cort含量與對照組相比無顯著性差異，但試驗組有高于對照組的趨勢，可能是在飼喂過程和采血過程中發(fā)生的輕微應(yīng)激，總的來說，采用母子分離技術(shù)對犢?；緵]有應(yīng)激作用。

IGF-1（胰島素樣生長因子-1）是動物生長的直接調(diào)節(jié)物，胰島素樣生長因子-1調(diào)控細胞增殖分化，而且對蛋白質(zhì)的合成和結(jié)締組織及骨髓的產(chǎn)生有重要影響[15-16]。血液中IGF-1的變化可作為外援蛋白質(zhì)和能量攝入量的一項指標[17]。Adkins等[18]研究表明，保持低水平蛋白質(zhì)營養(yǎng)時，血液中IGF-1含量偏低。本試驗結(jié)果表明，母子分離犢牛培育技術(shù)和定時母子分離犢牛培育技術(shù)對犢牛蛋白質(zhì)營養(yǎng)水平?jīng)]有引起負面影響。

3.5 不同犢牛培育技術(shù)對犢牛ALP的影響

堿性磷酸酶（ALP）廣泛分布于動物體內(nèi)肝臟、骨骼、腸、腎等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶[19]。ALP是成骨細胞的一種外酶，ALP的表達活性是細胞分化的一個明顯特征[20]。ALP在幼畜體內(nèi)中的主要生理功能是在成骨的同時水解焦磷酸鹽，解除其對骨鹽形成的擬制作用，有利于成骨作用[21-23]。Oeztuerk等[24]報道，堿性磷酸酶活性越強動物的生長性能越高，堿性磷酸酶活性越弱動物的發(fā)育速度越慢。從本試驗檢測結(jié)果表明，犢牛3～9周齡期間血清ALP活力平均值，試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ均高于對照組，分別高出60.42%和55.57%。說明母子分離犢牛培育技術(shù)和定時母子分離犢牛培育技術(shù)可以提高ALP的活力，有利于延邊黃牛犢牛骨骼的發(fā)育。

4 結(jié)論

采用母子分離技術(shù)可以提高犢牛日增重，母子分離技術(shù)可以滿足犢牛早期生長發(fā)育所需營養(yǎng)，可以提高犢牛免疫力，促進犢牛生長，緩解犢牛的應(yīng)激。