■ 陳 靜 周振金 劉乃芝 謝全喜 徐海燕 谷 巍 王春鳳 殷潔鑫

（1.山東寶來利來生物工程股份有限公司，山東泰安271000；2.吉林農(nóng)業(yè)大學，吉林長春130000；3.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學院，江蘇泰州225300）

霉菌毒素（mycotoxins）是絲狀真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，其性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解。目前已鑒別出的霉菌毒素有400多種[1]。據(jù)統(tǒng)計，目前世界上每年至少有25%的農(nóng)作物被霉菌毒素所污染，這些農(nóng)作物被動物攝入后能引起多種不良的生理反應(yīng)，主要表現(xiàn)為慢性中毒，導致動物的生長、繁殖障礙，影響動物生產(chǎn)性能、產(chǎn)蛋率和孵化率等[2-3]，同時毒素在動物組織中殘留，通過肉、蛋、奶和奶酪等畜產(chǎn)品給人類健康帶來危害[4]，引起代謝紊亂、免疫抑制、致癌、致畸和活性誘變等[5]。因而，霉菌毒素成為影響食品安全的一個重要因素。

在過去的幾十年，科學工作者就一直致力于飼料霉菌的預(yù)防、解毒、脫毒方面的研究工作[4,6]。研究表明，霉變飼料中添加霉菌毒素吸附劑是解決這個問題最為有效和最主要的方法[7]，防止或減少動物的霉菌毒素中毒癥狀。同時生物脫毒法的處理條件相對溫和，不破壞飼料中其他營養(yǎng)成分，且能增加產(chǎn)品的營養(yǎng)價值，目前生物脫毒法也受到廣泛關(guān)注。本試驗旨在探討霉菌毒素吸附劑水合硅酸鹽和益生菌組成的復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑對飼喂霉變飼料的蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血清生化指標的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑：主要由枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌和水合硅酸鹽等成分組成，其中枯草芽孢桿菌及其代謝產(chǎn)物可降解玉米赤霉烯酮、乳酸桿菌可降解黃曲霉毒素B1，均由山東寶來利來生物工程股份有限公司研究院提供，活菌數(shù)≥5.0×108cfu/g；霉變玉米置于自然條件（溫度23～28℃，濕度65%～85%）培養(yǎng)制備，將水分提高至20%左右，肉眼觀察有明顯霉變產(chǎn)生，用霉菌毒素ELISA試劑盒檢測，其中黃曲霉毒素B1（AFB1）90 μg/kg，按照50%霉變玉米替代正常玉米配制試驗飼料黃曲霉毒素B1（AFB1）27.9 μg/kg，已超過蛋雞的安全限度20 μg/kg；玉米赤霉烯酮（ZEN）2 512 μg/kg，按照50%霉變玉米替代正常玉米配制試驗飼料玉米赤霉烯酮（ZEN）778.7 μg/kg，已超過蛋雞的安全限度500 μg/kg。

1.2 試驗設(shè)計及日糧

420日齡海蘭褐產(chǎn)蛋雞600只，隨機分為5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)40只?？瞻讓φ战M（Ⅰ組）：飼喂正常玉米日糧；陰性對照組（Ⅱ組）：飼喂用50%霉變玉米替代正常玉米的日糧；試驗Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組，飼喂在陰性對照日糧的基礎(chǔ)上添加復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑，添加量分別為1.0‰、2.0‰和4.0‰。預(yù)飼期1周，試驗期28 d。

飼養(yǎng)過程中防止飼料發(fā)霉和霉變飼料繼續(xù)發(fā)霉，將飼料置于干燥、陰涼條件下存放?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

常規(guī)飼養(yǎng)管理，人工喂料和揀蛋。飼料為干粉料，自由采食和飲水。每日8：00、11：00、14：00和17：00各喂料1次。每天喂料以次日添料時基本不剩料為標準。每天15：00撿蛋1次。試驗期內(nèi)采用自然加人工光照，光照強度為20 lx，16 h/d，舍內(nèi)溫度控制在18～23℃，相對濕度為40%～60%，自然通風。每天定時記錄各個重復(fù)組試驗雞產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破軟蛋數(shù)等，每周統(tǒng)計1次采食量。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.4 測定指標

1.4.1 生產(chǎn)性能測定

于正試期第1 d早上6：00將料槽里的飼料全部清除干凈，然后飼喂試驗日糧，每周末定時結(jié)料、稱重，并統(tǒng)計各重復(fù)的實際耗料量。試驗期每天以重復(fù)為單位，記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、采食量、破殼數(shù)、次蛋數(shù)（蛋殼著色不均勻、沙皮蛋、軟殼蛋、薄殼蛋及畸形蛋等），計算試驗蛋雞每周的蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、料蛋比和軟破蛋率。

1.4.2 蛋品質(zhì)測定

于試驗35 d時，每組隨機抽取30枚（每個重復(fù)10枚）蛋采用全自動蛋品質(zhì)儀測定雞蛋蛋重、蛋白高度、哈氏單位、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強度和蛋形指數(shù)等。

蛋殼厚度：分別取蛋的大頭、小頭和中間部分的蛋殼，用鑷子剔除內(nèi)殼膜，用蛋殼厚度測定儀分別測其厚度，取其平均值作為蛋殼厚度。

蛋形指數(shù)：分別用游標卡尺測量雞蛋的橫徑長和縱徑長，計算縱徑長/橫徑長的比值。

1.4.3 血液生化指標的測定

于試驗35 d時從每個重復(fù)中隨機抽取5只禁食（自由飲水）12 h后的蛋雞，翅下采血，4 000 r/min離心取血清。采用日立7020全自動生化分析儀檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和堿性磷酸酶（ALP）含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用Excel軟件進行初步處理后，采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計分析，采用One-way ANOVA進行方差分析，LSD法進行組間多重比較，結(jié)果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響（見表2）

表2 復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，產(chǎn)蛋率方面，與空白對照組相比，陰性對照組飼喂霉菌毒素日糧后顯著降低產(chǎn)蛋率（P＜0.05）。與陰性對照組相比，隨著復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑添加劑量的增加產(chǎn)蛋率呈升高趨勢，其中2.0‰和4.0‰添加量組產(chǎn)蛋率分別提高5.81%和11.22%，差異均顯著（P＜0.05）；日耗料量方面，與空白對照組相比，陰性對照組飼喂霉菌毒素日糧后日耗料量顯著提高（P＜0.05）。與陰性對照組相比，隨著復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑添加劑量的增加日耗料量呈降低趨勢，差異均顯著（P＜0.05）；料蛋比方面，與空白對照組相比，陰性對照組飼喂霉菌毒素日糧后料蛋比顯著提高34.95%（P＜0.05）。與陰性對照組相比，隨著復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑添加劑量的增加料蛋比呈降低趨勢，差異均顯著（P＜0.05），其中4.0‰添加量組料蛋比最低；破軟殼率方面，與空白對照組相比，陰性對照組顯著提高（P＜0.05）。隨復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑添加劑量的增加破軟殼率呈降低趨勢，其中2.0‰和4.0‰添加量組顯著低于陰性對照組（P＜0.05）。綜上可知，2.0‰和4.0‰添加量組在改善霉菌毒素污染的蛋雞生產(chǎn)性能方面效果較好，其中以4.0‰添加量組效果最優(yōu)。

2.2 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響（見表3）

表3 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，與空白對照組相比，陰性對照組飼喂霉菌毒素日糧蛋殼厚度、蛋殼強度和蛋黃色澤分別降低19.44%、16.29%和20.50%，差異均顯著（P＜0.05）。與陰性對照組相比，各霉菌毒素吸附劑添加組蛋殼厚度、蛋殼強度和蛋黃色澤均呈增高趨勢，其中2.0‰和4.0‰添加量組蛋殼厚度分別提高20.69%和27.59%，1.0‰、2.0‰和4.0‰添加量組蛋殼強度分別提高9.73%、17.79%和15.77%，4.0‰添加量組蛋黃色澤提高19.00%，差異均顯著（P＜0.05）；霉菌毒素和復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑對蛋重、蛋黃重、蛋形指數(shù)、蛋白高度和哈氏單位沒有顯著影響。

2.3 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞血清生化指標的影響（見表4）

表4 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞血清生化指標的影響（U/l）

由表4可知，與對照組（I組）相比，陰性對照組（Ⅱ組）ALT、AST和ALP分別升高87.58%、23.19%和48.66%，差異均顯著（P＜0.05）。與陰性對照組相比，各復(fù)合型霉菌毒素吸附劑組ALT、AST和ALP均呈下降趨勢，其中4.0‰添加量組ALT和AST分別降低25.04%和16.19%，2.0‰和4.0‰添加量組ALP分別降低11.99%和17.46%，差異均顯著（P＜0.05）。綜上可知，飼料中污染霉菌毒素后對蛋雞肝臟造成一定程度的損傷，添加復(fù)合型霉菌毒素吸附劑后使得ALT、AST和ALP含量呈下降趨勢，說明復(fù)合型霉菌毒素吸附劑吸附了一定量的霉菌毒素，減輕了對肝臟的損傷，其中以4.0‰添加量效果最優(yōu)。

3 討論

3.1 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

飼料中常因劣質(zhì)原料或存放不當含有霉菌毒素，如果不強化管理或脫毒處理，將對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)生危害，從而影響蛋雞養(yǎng)殖效益。霉菌毒素可導致蛋雞卵巢和輸卵管萎縮、產(chǎn)蛋量下降、畸形蛋增多、生產(chǎn)性能下降，飼料報酬降低等。其中對蛋雞影響及毒害作用較大的毒素有黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮等[8]。李俊營等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加吸附劑載鋅納米蒙脫石可提高蛋雞產(chǎn)蛋率。張軍民等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞日糧中添加0.2%霉菌毒素吸附劑可極顯著提高產(chǎn)蛋率，降低破損率。史艷云等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在含有霉菌毒素的蛋雞日糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋殼強度，降低料蛋比。本試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，霉菌毒素顯著降低蛋雞產(chǎn)蛋率、顯著提高料蛋比和破軟殼率；2.0‰和4.0‰復(fù)合型霉菌毒素吸附劑組可顯著提高含霉菌毒素日糧蛋雞產(chǎn)蛋率、顯著降低破軟殼率和料蛋比，其中4.0‰添加量時效果接近正常水平。

3.2 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響

Zaghini等[12]報道，日糧中霉菌毒素可使雞蛋的蛋黃重、蛋黃色澤、蛋殼強度和蛋殼厚度等蛋品質(zhì)指標顯著變差。本試驗結(jié)果表明，飼喂霉菌毒素日糧可顯著降低（P＜0.05）蛋殼厚度、蛋殼強度和蛋黃色澤19.44%、16.29%和20.50%。添加2.0‰和4.0‰復(fù)合霉菌毒素吸附劑可使蛋殼厚度分別提高20.69%和27.59%、蛋殼強度分別提高17.79%和15.77%，差異均顯著（P＜0.05）。4.0‰復(fù)合霉菌毒素吸附劑可顯著提高蛋黃色澤19.00%（P＜0.05）。在一定程度上改善了雞蛋的蛋品質(zhì)，緩解了霉菌毒素對蛋雞的毒害作用。這與史艷云等[11]研究結(jié)果相一致。本試驗中添加霉菌毒素吸附劑對蛋品質(zhì)的改善效果較空白對照組較差，分析原因可能是試驗采用的發(fā)霉玉米的營養(yǎng)成分已被破壞，營養(yǎng)水平低于正常玉米，即使添加了霉菌毒素吸附劑也不可能達到正常玉米的營養(yǎng)價值。

3.3 復(fù)合型霉菌毒素吸附劑對海蘭褐蛋雞血清生化指標的影響

血清生化指標的變化反映組織細胞通透性和動物機體新陳代謝機能的基本狀況。霉菌毒素是肝毒素，低劑量可致動物肝臟損傷、免疫機能抑制，長期接觸可引發(fā)動物癌變致死[13]。在毒素造成蛋雞肝臟機能紊亂和肝細胞受損時，多種與肝臟活動相關(guān)的酶類會釋放出來進入血液中，使血清中多種酶的活性升高，因此血清酶活性變化是評估動物組織和器官損傷程度的依據(jù)[14]。本試驗結(jié)果表明，發(fā)霉玉米使蛋雞血清中ALT、AST和ALP含量顯著升高，蛋雞肝臟受到損傷。4.0‰復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑組ALT、AST和ALP分別降低25.04%、16.19%和17.46%，差異均顯著（P＜0.05），維持了機體代謝穩(wěn)定，說明霉變飼料中添加該復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑可緩解霉菌毒素對肝臟等器官的損傷作用。

4 結(jié)論

復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑能夠明顯改善霉菌毒素所導致的的產(chǎn)蛋率低下、料蛋比和破軟殼率升高等問題，在一定程度上改善蛋品質(zhì)，并能明顯緩解霉菌毒素對肝臟等器官的損傷作用，其中以4.0‰添加量的復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑效果最好，2‰添加量的復(fù)合型霉菌毒素脫毒劑效果次之。