■胡良宇 袁 霞 王夢(mèng)芝* 霍永久 羅昱宏

（1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009；2.濱海普潤生物科技有限公司，江蘇鹽城224561）

近年來，我國牛奶的營養(yǎng)價(jià)值受到人們廣泛的認(rèn)可。根據(jù)我國農(nóng)業(yè)部估測，牛奶及奶制品在2030年人均將達(dá)到25 kg，總產(chǎn)量達(dá)到4 250×104t，這意味著我國將很快成為牛奶消費(fèi)市場中最高的國家。然而，我國的人均飲用量僅僅是世界平均水平的25%，并且，我國生鮮乳的乳蛋白和乳質(zhì)量明顯低于發(fā)達(dá)國家。安全優(yōu)質(zhì)乳已成為我國奶業(yè)研究的主要方向。體細(xì)胞數(shù)（SCC）是乳業(yè)發(fā)達(dá)國家衡量乳品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。SCC值較高時(shí)會(huì)影響原料乳、奶酪、黃油等產(chǎn)品品質(zhì)，降低牛奶風(fēng)味。與此同時(shí)，SCC值高的乳中致病菌和抗生素殘留多，對(duì)人類健康會(huì)造成一定威脅。因此，奶牛泌乳各項(xiàng)指標(biāo)以及體細(xì)胞數(shù)的研究顯得格外重要。屎腸球菌原屬于腸球菌屬，革蘭氏陽性菌，可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生乳酸，也是乳酸菌的一種，分別于1989年列入FDA可直接飼喂益生菌目錄，1999年列入我國農(nóng)業(yè)允許添加動(dòng)物養(yǎng)殖微生物添加劑目錄中，是歐洲各國動(dòng)物益生菌產(chǎn)品中主要菌株。研究表明，飼糧中添加益生菌有助于奶牛瘤胃菌群活力的激活，有益菌數(shù)量的增加及飼料中纖維分解速度的加快，從而促進(jìn)揮發(fā)性脂肪酸的合成，最終有利于提高泌乳量。江科等研究表明，每天飼喂133 kg乳酸菌的奶牛組相對(duì)對(duì)照組泌乳量增加了1.59 kg/（頭·d），但其乳脂率、乳蛋白率和乳糖含量與對(duì)照組相比差異不顯著。Jeong等報(bào)道指出，飼喂泌乳奶牛乳酸桿菌和鏈球菌，泌乳量與對(duì)照組相比增加了0.8 kg/d，乳成分無顯著變化。另外，飼糧中添加屎腸球菌混合添加劑或者單獨(dú)添加屎腸球菌，都能提高圍產(chǎn)奶牛干物質(zhì)采食量、泌乳量和血液中葡萄糖和胰島素的水平，降低游離脂肪酸水平，也有提高飼糧利用率，促進(jìn)奶牛適應(yīng)高精的效果。秦歡蕾等在飲水中添加屎腸球菌對(duì)肉雞飲水量和采食量有增加的趨勢(shì)，并且有降低肉雞腹瀉率，提高肉雞日增重和生產(chǎn)性能的效果。綜合以上研究表明，益生菌在動(dòng)物生產(chǎn)性能方面研究較為廣泛，但作為益生菌其中之一的屎腸球菌對(duì)反芻動(dòng)物，尤其對(duì)泌乳奶牛泌乳性能以及體細(xì)胞方面的研究相對(duì)較少。為此，本研究擬采用在飼糧中添加不同含量的屎腸球菌的方式來測定其泌乳量、乳成分、SCC的動(dòng)態(tài)變化。以探討屎腸球菌對(duì)奶牛泌乳性能以及SCC的影響，為牛奶品質(zhì)調(diào)控技術(shù)和機(jī)理的研究提供一些基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)農(nóng)牧場選擇 24頭體重、胎次（1～2胎）、泌乳期（40±2）d、泌乳量（21.0±1.0）kg、體況（體況評(píng)分3.0）等性狀相對(duì)一致的荷斯坦奶牛作為試驗(yàn)動(dòng)物。根據(jù)揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)農(nóng)牧場提供并參照NRC（2001）奶牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧，日糧采用TMR混合機(jī)混合（基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1）。同舍分單圈飼養(yǎng)試驗(yàn)牛，每天早晚2次適量飼喂（添加劑先和部分日糧混合，再和大料混合），分早、中、晚3次擠奶。保證試驗(yàn)?zāi)膛＞潭ú畚?，自由飲水，適當(dāng)運(yùn)動(dòng)，飼養(yǎng)管理皆保持一致。試驗(yàn)隨機(jī)分為3組，每組8個(gè)重復(fù)。3組奶牛分別為對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、低劑量組（飼喂基礎(chǔ)日糧+30 g/d屎腸球菌）、高劑量組（飼喂基礎(chǔ)日糧+60 g/d屎腸球菌）。試驗(yàn)期為42 d，其中預(yù)試期14 d，正試期28 d。本試驗(yàn)屎腸球菌由濱海普潤生物科技有限公司提供，為粉狀，白色，使用石灰粉攪拌稀釋，細(xì)菌數(shù)含量為1010個(gè)/g。

1.2 奶樣的采集與指標(biāo)的檢測

奶樣采集：正試每周末（0、1、2、3、4）記錄產(chǎn)奶量，于（8：00、14：00、22：00）3 次采集奶樣，3 次奶樣按照1∶1∶1比例均勻混合，用以測定乳成分、體細(xì)胞數(shù)。

乳品質(zhì)分析：采用揚(yáng)大康源乳業(yè)的丹麥福斯120乳品檢測儀（紅外線）檢測乳脂率、非脂乳固體、乳蛋白率、牛奶密度等乳品質(zhì)指標(biāo)。

體細(xì)胞數(shù)：采用南京建成科技有限公司生產(chǎn)的姬姆薩染色試劑盒，具體操作可見說明書。

單位干物質(zhì)產(chǎn)奶量（kg）=泌乳量（kg）/攝入干物質(zhì)質(zhì)量(kg)。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所獲得的數(shù)據(jù)資料采用Excel對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行方差分析和鄧肯氏多重比較。P值小于0.05為顯著差異水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 屎腸球菌對(duì)泌乳性能和乳品質(zhì)的影響

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 屎腸球菌對(duì)乳成分和乳品質(zhì)的影響

由表2可知，乳蛋白、乳脂率、非脂乳固體、牛奶密度組間均無顯著差異（P＞0.05），高劑量組的泌乳量顯著高于低劑量組（P＜0.05），與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

屎腸球菌對(duì)試驗(yàn)牛試驗(yàn)期間乳成分含量變化比較分析結(jié)果見表3。由表3可知，低劑量組的乳蛋白含量顯著低于其他兩組（P＜0.05）；脂肪含量組間無顯著差異（P＞0.05），數(shù)值上，高劑量組含量最高，對(duì)照組其次，低劑量組最低；對(duì)于非脂乳固體含量，對(duì)照組與高劑量組顯著高于低劑量組（P＜0.05）；對(duì)照組的干物質(zhì)泌乳量與其他兩組相比差異不顯著（P＞0.05），高劑量組顯著高于低劑量組（P＜0.05）。

表3 屎腸球菌對(duì)乳蛋白、乳脂肪、非脂乳固體和單位干物質(zhì)泌乳量產(chǎn)量的影響

2.2 屎腸球菌對(duì)乳體細(xì)胞的影響

時(shí)間上，除嗜酸性細(xì)胞和體細(xì)胞總數(shù)在第0 d顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05），其他細(xì)胞在時(shí)間軸上均無顯著差異（P＞0.05）；在嗜酸性細(xì)胞中，對(duì)照組與高劑量組和低劑量組與高劑量組在組間中無顯著差異（P＞0.05），但對(duì)照組顯著高于低劑量組（P＜0.05）；低劑量組和高劑量組中的嗜中性細(xì)胞顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；在嗜堿性細(xì)胞中，高劑量組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），但與低劑量組相比無顯著差異（P＞0.05）；在淋巴細(xì)胞中，對(duì)照組顯著高于其他兩組（P＜0.05）；對(duì)照組的單核細(xì)胞數(shù)值最高，高劑量組其次，低劑量組最低（P＜0.05）；高劑量組的體細(xì)胞總數(shù)顯著低于對(duì)照組，與低劑量組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表4 屎腸球菌對(duì)體細(xì)胞的影響

3 討論

3.1 屎腸球菌對(duì)泌乳性能和乳品質(zhì)的影響

屎腸球菌屬于腸球菌屬，生物學(xué)特性優(yōu)良，在腸道中可形成優(yōu)勢(shì)菌群，增加有益菌數(shù)量，抑制有害菌，維持腸道菌群平衡，提高免疫力，并且對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)有一定的促進(jìn)作用。屎腸球菌在代謝過程中可以產(chǎn)生乳酸，乳酸可以被埃氏巨球形菌利用來產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸，且乳脂合成的前體物質(zhì)是乙酸。丙酸是早期泌乳奶牛經(jīng)過糖異生途徑合成糖的主要前體物質(zhì)，瘤胃中的乳酸也可被丙酸桿菌利用產(chǎn)生丙酸。瘤胃中大量丙酸鹽的存在會(huì)促進(jìn)肝糖原的合成，這將為乳糖的合成提供原料。劉虎傳等將屎腸球菌、植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑飼喂斷奶仔豬后發(fā)現(xiàn)，盲腸內(nèi)容物中乳酸、乙酸和丙酸含量增加。Beauchemin和Chorbani等研究也發(fā)現(xiàn)屎腸球菌有利于瘤胃丙酸和乙酸濃度的增加。Gomez-Basauri也發(fā)現(xiàn)復(fù)合乳酸菌對(duì)泌乳量有一定的促進(jìn)作用，增加了0.73 kg/d，乳成分上也有所改善。劉彩娟等在研究飼糧中添加復(fù)合益生菌對(duì)奶牛瘤胃發(fā)酵及纖維素酶活性的影響中發(fā)現(xiàn)，添加復(fù)合益生菌有利于氨態(tài)氮（NH3-N）、揮發(fā)性脂肪酸(VFA)、乙酸濃度、微生物粗蛋白(MCP)的提高，同時(shí)顯著提高瘤胃內(nèi)羧甲基纖維素酶、水楊苷酶和木聚糖酶活。另外有研究證明，1.25×106個(gè)/ml屎腸球菌發(fā)酵液顯著提高了NH3-N、乙酸與總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)的濃度。龐德公等研究表明，添加屎腸球菌、枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母可提高M(jìn)CP含量和VFA生產(chǎn)量，并使瘤胃微生物乙酸發(fā)酵類型轉(zhuǎn)向?yàn)楸岚l(fā)酵類型。以上分析表明，本研究屎腸球菌可能通過產(chǎn)生乳酸而促進(jìn)揮發(fā)性脂肪酸的產(chǎn)生或改變瘤胃發(fā)酵環(huán)境而改善乳成分，這需要進(jìn)一步的研究闡明。

屎腸球菌在動(dòng)物腸道內(nèi)大量定植，它快速黏附腸道黏膜，產(chǎn)生乳酸、系菌素、過氧化氫等物質(zhì)降低腸道pH值、抑制病原菌、改善胃腸內(nèi)環(huán)境，維持微生態(tài)平衡。Pieper等報(bào)道指出，乳酸桿菌仔豬腸道有益菌群繁殖數(shù)量增加，對(duì)仔豬胃腸道健康有一定促進(jìn)作用。賈美云等發(fā)現(xiàn)屎腸球菌能在數(shù)分鐘內(nèi)于腸道內(nèi)定植繁殖，其所形成的優(yōu)勢(shì)菌群可以為腸道內(nèi)正常菌群提供厭氧環(huán)境。有益菌群在瘤胃內(nèi)生長繁殖有利于維生素、氨基酸以及促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)的產(chǎn)生，能夠刺激微生物分泌淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶等各種消化酶，從而有利于飼料中蛋白質(zhì)、脂肪和復(fù)雜的碳水化合物的降解。其所造成的酸性環(huán)境與一般腸道內(nèi)消化酶的最適pH值相符合，有機(jī)酸的產(chǎn)生還可加強(qiáng)腸道的蠕動(dòng)和消化液的分泌，因此有利于各養(yǎng)分的消化吸收。姜艷美等采用人工瘤胃法研究屎腸球菌對(duì)瘤胃發(fā)酵的影響，結(jié)果表明，屎腸球菌可以極顯著地提高瘤胃NH3-N濃度，添加1.25×106/ml屎腸球菌和對(duì)照組相比可以促進(jìn)瘤胃飼料中碳水化合物發(fā)酵，促進(jìn)揮發(fā)性脂肪酸和乙酸的產(chǎn)生，為機(jī)體提供能量。也有研究證明，屎腸球菌可促進(jìn)瘤胃微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的降解，并在體外發(fā)酵后期仍具有發(fā)酵潛能而促進(jìn)瘤胃微生物生長、繁殖。由此分析屎腸球菌可以通過促進(jìn)特定瘤胃菌群的生長繁殖提高瘤胃微生物對(duì)氨的利用，從而使瘤胃微生物蛋白的合成在一定程度上有所提高，進(jìn)而提高泌乳量和總?cè)榈鞍缀?。并且，屎腸球菌可以通過提高胃腸道中各種消化酶的活性而促進(jìn)機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收，最終提高奶牛泌乳量、總?cè)榈鞍缀俊?/p>

3.2 屎腸球菌對(duì)乳體細(xì)胞數(shù)的影響

SCC在維持乳腺健康以及被動(dòng)免疫轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著重要作用。SCC的數(shù)量主要是中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和少量乳腺組織脫落的上皮細(xì)胞。健康奶牛會(huì)因品種、年齡胎次等原因引起SCC數(shù)量在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，但穩(wěn)定在20～30萬個(gè)/ml。本試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ橹蠸CC相對(duì)于對(duì)照組顯著降低，在健康范圍之內(nèi)。生鮮乳中SCC超過一定限度后，說明乳房出現(xiàn)了不同程度的感染。當(dāng)奶牛乳腺被大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等外源致病菌感染時(shí)，牛奶體細(xì)胞的組成種類以及數(shù)量會(huì)在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生巨大變化，這主要是由于自身免疫防御機(jī)制的啟動(dòng)，目的是抗炎的防御作用。Hass等在研究不同病原造成乳房炎對(duì)SCC影響的過程中也發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌引起乳房炎時(shí)，SCC會(huì)明顯出現(xiàn)一個(gè)高峰，并且在很長時(shí)間內(nèi)，SCC也不會(huì)恢復(fù)正常水平。試驗(yàn)證明，仔豬飼料中添加屎腸球菌有利于降低腸道中大腸桿菌數(shù)量，盲腸、結(jié)腸中乳酸桿菌數(shù)量顯著降低，并且可以顯著增加仔豬脾臟重量和脾臟指數(shù)。飼糧中添加屎腸球菌在一定程度上降低糞中沙門氏菌和大腸桿菌數(shù)量，從而改善斷奶仔豬腸道菌群而降低腹瀉率。李素霞在屎腸球菌及其對(duì)母豬繁殖性能和健康的影響報(bào)道中指出，飼喂1×109cfu/kg屎腸球菌有降低母豬乳房炎的趨勢(shì)。以上研究表明，屎腸球菌的添加有利于平衡腸道微生物，提高機(jī)體免疫力。除此之外，田樹青等提出乳中SCC會(huì)隨著泌乳量增高而降低，即產(chǎn)乳量高，SCC減少，產(chǎn)乳量低，SCC增加。

總之，屎腸球菌可能是：①通過提高泌乳量而改變體細(xì)胞的濃度而影響SCC，最終改變泌乳量、乳成分的；②通過提高瘤胃微生物活性，增加有益菌，維護(hù)胃腸道環(huán)境的穩(wěn)定來改善機(jī)體免疫從而降低SCC。

4 結(jié)論

綜上表明，飼糧中添加屎腸球菌，提高了泌乳量、總蛋白含量，降低SCC，有利于牛奶總蛋白含量和乳品質(zhì)的提高。