□ 袁麗紅 陳 玉 肖竹青 華測品標(biāo)檢測技術(shù)有限公司

動物肌肉組織中硝基呋喃原藥HPLC-MS/MS的測定

□ 袁麗紅 陳 玉 肖竹青 華測品標(biāo)檢測技術(shù)有限公司

建立動物肌肉組織中硝基呋喃類原藥的固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。樣品用乙酸乙酯溶液提取，經(jīng)HLB柱凈化，甲醇和5 mmol/L乙酸銨溶液為流動相，經(jīng)BEH-C18柱分離，在HPLC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式下進(jìn)行定性定量分析。加標(biāo)回收率為80%～98%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。

材料與方法

試劑與設(shè)備

呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃它酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%；甲醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、乙酸銨：色譜純；濾膜：PTEE，0.22 μm；用甲醇配成濃度為1 mg/mL的原藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0～4 ℃保存。

LC-MS/MS 8050，配電噴霧離子源；BEH-C18；渦旋混合器；超聲儀；離心機(jī)；氮吹儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

實驗方法

1 HPLC-MS/MS檢測條件

1.1 色譜條件

色譜柱為BEH-C18，柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流速：0.2mL/min，流動相A：5 mmol/L乙酸銨水溶液，流動相B：甲醇，梯度洗脫。

1.2 質(zhì)譜條件

ESI，正離子掃描+負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測，毛細(xì)管電壓：4.0 kV；離子源溫度：300 ℃，定量離子對：FZD（m/z226.2/122.1）、FTD（m/z325.0/281.1）、NFT（m/z 2 3 7.2/1 5 2.1）和N F Z（m/z197.2/124.2）；定性離子對：FZD（m/z226.2/252.1）、FTD（m/z3 25.0/13 9.0）、NFT（m/z 2 3 7.2/1 2 4.1）和N F Z（m/z197.2/80.1）

1.2.2 樣品前處理

稱樣10 g于離心管中，加10 mL乙酸乙酯，渦旋混合1 min，超聲10 min，4 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上層液，重復(fù)提取1次，合并提取液，30 ℃氮吹儀吹至干，加入10 mL 5%甲酸溶液，渦旋振蕩使全部溶解，然后用HLB小柱進(jìn)行凈化，先用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 5%甲酸溶液平衡，再用5 mL 5%甲醇淋洗，最后用5 mL甲醇洗脫，35 ℃水浴氮氣吹至近干。用流動相復(fù)溶，過濾后供上機(jī)。

1.2.3 回收率和精密度的測定

稱取豬肉、雞肉、魚肉空白樣品10 g作為空白基質(zhì)，分別添加硝基呋喃原藥標(biāo)準(zhǔn)品，使得樣品中含量分別為1 μg/kg、5 μg/kg和20 μg/kg，按照樣品前處理進(jìn)行操作，每個濃度水平做3次平行實驗，上機(jī)，測定該方法的回收率及精密度。

結(jié)果與討論

質(zhì)譜條件的選擇

分別用ESI+和ESI-兩種掃描方式對4種藥物進(jìn)行掃描，顯示FZD和FTD在正模式下有較好的靈敏度，而NFT和NFZ在負(fù)模式下有較好的靈敏度，因此選擇兩種模式同時掃描。以信號最強(qiáng)的碎片離子作定量離子，信號次強(qiáng)的作定性離子。

提取凈化條件的選擇

分別選擇乙酸乙酯、乙腈、甲醇3種提取劑，震蕩提取、超聲提取和渦旋提取3種提取方式研究了4種硝基呋喃原藥提取效率最高的提取條件。結(jié)果表明：采用乙酸乙酯作為提取劑、超聲作為提取方式時，提取效率最高。另外，本文分別研究了硅膠、C18和HLB三種萃取小柱的凈化效果。結(jié)果表明，HLB小柱的凈化效果最好，雜質(zhì)峰少，回收率高。因此，本文采用HLB小柱進(jìn)行凈化。

精密度與回收率

本文分別測試了豬肉、雞肉、魚肉中硝基呋喃原藥檢測的精密度與回收率，見表1，四種藥物的回收率為80%～98%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜10%。

表1 加標(biāo)回收率和精密度測定結(jié)果

結(jié)論

本文建立了動物源性食品中硝基呋喃原藥的HPLC-MS/MS檢測方法，對動物源性食品中硝基呋喃原藥的提取及檢測條件進(jìn)行了研究。本方法操作簡便、靈敏度高，精密度與回收率符合國家標(biāo)準(zhǔn)檢測要求。