□ 鹿文紅 方夢漁 郭 飛 張 娟 梁志桃 上海格瑞產(chǎn)品檢測有限公司，農(nóng)業(yè)部設(shè)施園藝產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點實驗室

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定雞肉中磺胺醋酰殘留量的測量不確定度評定

□ 鹿文紅 方夢漁 郭 飛 張 娟 梁志桃 上海格瑞產(chǎn)品檢測有限公司，農(nóng)業(yè)部設(shè)施園藝產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點實驗室

根據(jù)《動物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB/T21316-2007）[1]規(guī)定的測量步驟對雞肉中磺胺醋酰的含量進行了測定，根據(jù)測量不確定度的評定理論，分析整個測試過程中的不確定度來源，結(jié)果表明擬合直線求樣品溶液濃度和標準溶液配制是該方法不確定度的主要來源。

磺胺醋酰；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；不確定度

本實驗根據(jù)《測量不確定度的要求》（CNAS-CL07：2011）[2]中有關(guān)測量不確定度的要求，對高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉中磺胺醋酰殘留的不確定度進行分析與評定，找出主要分量，為測量結(jié)果的準確性和可靠性提供科學(xué)依據(jù)。

1 測量方法和數(shù)學(xué)模型

1.1 材料與試劑

上海市2014年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測抽查任務(wù)中于市場抽樣雞肉樣品。

乙腈（色譜純，CNW TechnologiesGmbH，德國），正己烷（色譜純，CNW Technologies GmbH，德國），正丙醇（色譜純，CNW Technologies GmbH，德國）。

1.2 儀器與設(shè)備

液相質(zhì)譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀XEVOTQ(Waters，美國)，離心機（D-37520，ThermoFisher，德國），微波爐（M1-211A，美的，中國），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（2034，Welch，美國）。

1.3 前處理方法

1.3.1 提取

精確稱取雞肉2.00 g置于玻璃研缽中，再稱取6.00 g C18填料加至試樣上用玻璃杵輕輕研磨，使樣品與填料混合均勻，裝于50 mL具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管中，加入25 mL乙腈-水溶液，渦旋震蕩1 min，放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30 s，3 000 r/min離心5 min，將乙腈層移入100 mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25 mL乙腈搖勻，微波輻照提取30 s，3 000 r/min離心5 min，合并乙腈提取液，待凈化。

1.3.2 凈化

提取液中加入25 mL乙腈飽和正己烷溶液，振搖5 min，將底層乙腈溶液移入150 mL棕色雞心瓶中，加入10 mL正丙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45 ℃水浴中減壓蒸發(fā)至近干，氮氣流吹干。準確加入1 mL乙腈-水溶液，超聲30 s溶解殘渣，將溶解液移入10 mL棕色離心管中，加0.5 mL乙腈飽和正己烷，渦旋震蕩2 min，于3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷溶液，取下層乙腈-水溶液過0.22 μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：BEH C18（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）；柱溫：30 ℃；流動相及配比：0.1%甲酸水+乙腈；流速：0.3 mL/min。

樣品中磺胺醋酰的含量按公式（1）計算：

式中：X—試樣中磺胺醋酰的含量，μg/kg；

C—標準溶液中磺胺醋酰的含量，μg/mL；

V—試樣溶液定容體積，mL；

m—試樣溶液所代表的質(zhì)量，g。

2 測量不確定度的來源

雞肉中磺胺醋酰的測量不確定度的來源包括：試樣溶液中磺胺醋酰濃度的相對標準不確定度u（c0）；樣品提取物溶液體積的相對標準不確定度u（V）；試樣溶液所代表的質(zhì)量m的不確定度u（m）。

3 測量不確定度的計算

3.1 試樣液中磺胺醋酰濃度的相對標準不確定度u（c0）

用99.5%磺胺醋酰標準物質(zhì)配制成10μg/mL的標準貯備液，然后用該貯備液分別配制磺胺醋酰濃度為0.1、0.2、0.4、1.0 μg/mL和2.0 μg/mL的標準工作液，每種標準工作溶液測定1次，并通過線性擬合得出校準曲線和相關(guān)系數(shù)。C0的不確定度有三個來源：（1）擬合校準曲線引入的標準不確定度u1；（2）標準溶液配制引入的不確定度u2；（3）重復(fù)測量產(chǎn)生的不確定度u3。

3.1.1 擬合校準曲線引入的標準不確定度u1

由于儀器系統(tǒng)的限制，只能選取1次響應(yīng)的參與曲線擬合，因此不確定度包含兩個因素：（1）儀器穩(wěn)定性帶來的不確定度us（C0）；（2）相關(guān)系數(shù)帶來的不確定度u1（r）。儀器穩(wěn)定性的不確定度在磺胺醋酰含量重復(fù)性檢測引入的標準不確定度評定中進行評估，在這里只評定相關(guān)系數(shù)帶來的不確定度u1（r）。

u1（r）=（1-r2）/r2

=（1-0.9992）/0.9992=0.002

u1=u1（r）=0.002

樣品測得的濃度C0=200 μg/kg

相對標準不確定度為：

u1（CX）/CX=0.002/201=0.00001

3.1.2 標準溶液引入的相對標準不確定度分量u2

標準溶液和標準曲線各點配制過程如下：用天平準確稱取0.0043 g含量為99.5%的磺胺醋酰標準物質(zhì)于25 mL容量瓶中，定容，配制濃度為171 μg/mL磺胺醋酰標準貯備液。然后用移液槍準確移取1.462 mL濃度為171 μg/mL的磺胺醋酰標準儲備液于25 mL容量瓶中，定容，配制成濃度為10 μg/mL磺胺醋酰標準儲備液。用時先用0～1 000 μL移液槍吸800 μL濃度為10 μg/mL磺胺醋酰標準儲備液到5 mL樣品瓶中，取3 200 μL甲醇定容到4 mL，配制成濃度為2 μg/mL磺胺醋酰標準工作液。再分別準確移取100、100、200 μL和500 μL濃度為2 μg/mL磺胺醋酰標準工作液于2 mL樣品瓶，吸1 900 μL甲醇定容到2 mL，吸取900 μL、800 μL和500 μL甲醇定容到1 mL，得到濃度為0.1、0.2、0.4、1.0 μg/mL和2.0 μg/mL的磺胺醋酰標準工作溶液。稀釋時使用0～1 000 μL移液槍，經(jīng)校準移液槍100 μL時誤差為1.2%，500 μL時誤差為0.3%，1 000 μL時誤差定度為0.9%。

標準溶液的不確定度分量u2分為兩部分，外購標準物質(zhì)的不確定度u（bw）；和標準工作液配制過程中引入的不確定度u（pz）。

3.1.2.1 外購標準物質(zhì)帶來的不確定度u（bw）

本實驗使用的外購磺胺醋酰標準物質(zhì)，其純度為（99.5±0.5）%，引用的不確定度假定為矩形分布。

標準不確定度

相對不確定度u（bw）/99.5%=0.0029

3.1.2.2 配制標準工作液引入的不確定度u（pz）

（1）標準物質(zhì)稱量引入的相對不確定度

最大量程200g的天平，法定允許誤差為±0.1mg，按均勻分布轉(zhuǎn)換成標準不確定度為0.1/false=0.058mg，相對標準不確定度為0.058/4.3=0.013

（2）移液槍引入的相對不確定度

移取1 462 μL、3 200 μL和1 900 μL時不確定度以0.9%計，移取100 μL時不確定度以1.2%計，移取200 μL、2個500 μL、800 μL和900 μL時不確定度以0.3%計。按均勻分布，

相對不確定度為：

（3）容量瓶定容引入的相對不確定度

將標樣溶液移入經(jīng)鑒定為A級的25 mL容量瓶中，國家計量檢定規(guī)程《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG196-90）中規(guī)定，該容器的允許誤差為±0.03 mL，按均勻分布評定；水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4，均勻分布評定：

相對標準不確定度為：

u（V25）/V25=0.0009

配制標準工作液引入的不確定度u（pz）：（0.0132+0.0142+0.00092）1/2=0.019

標準溶液引入的相對不確定度分量u2：

u2=（0.00292+0.0192）1/2=0.019

3.1.3 重復(fù)測量產(chǎn)生的相對不確定度u3

樣品溶液重復(fù)測量2次，測定結(jié)果及相對誤差見表1。

表1 重復(fù)測量結(jié)果

按矩形分布，由表1數(shù)據(jù)計算重復(fù)測量產(chǎn)生的相對不確定度u3：

將上述不確定度分量合成得：u（CX）/CX=（0.000012+0.0192+0.0062）1/2=0.020

3.2 定容體積產(chǎn)生的相對不確定度u（V）/V

樣品凈化時，氮吹干后，準確加入1 mL乙腈-水溶液，超聲30s溶解殘渣，將溶解液移入10 mL棕色離心管中，加0.5 mL乙腈飽和正己烷，渦旋震蕩2 min，于3 000 r/min離心5 min，棄去正己烷溶液，取底層乙腈-水溶液過0.22 μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。經(jīng)校準移液槍1 000 μL時誤差定度為0.9%，500 μL時誤差定度為0.3%，按均勻分布，相對不確定度為：

3.3 稱量樣品產(chǎn)生的相對不確定度u（m）/m

最大量程200g的天平，法定允許誤差為±0.1mg，按均勻分布轉(zhuǎn)換成標準不確定度為根據(jù)資料，在50 g以內(nèi)稱樣量變動標準偏差為0.07mg，因此標準不確定度為如稱取10g，則相對不確定度為u（m）/ m=0.09/10000=0.000009。

4 合成標準不確定度u（X）及擴展不確定度U

取包含因子k=2，則擴展不確定度為：

U=u（X）×2=8.4μg/kg

5 結(jié)果報告

液相色譜法測定水產(chǎn)品中磺胺醋酰含量，稱樣量2g時，測量結(jié)果為（200±8.4）μg/kg，k=2。

6 結(jié)語

由計算結(jié)果可以看出，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定雞肉中磺胺醋酰含量的測定過程中，有證標準物質(zhì)、檢定合格的玻璃儀器、樣品稱量和測量重復(fù)性所帶來的不確定度分量均遠小于由擬合直線求樣品溶液濃度和標準溶液配制所帶來的不確定度分量，因此由擬合直線求樣品溶液濃度和標準溶液配制是該方法不確定度的主要來源。

[1]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.《動物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》(GB/T21316-2007)[S].北京:中國標準出版社,2007.

[2]中國合格評定國家認可委員會.《測量不確定度的要求》(CNAS-CL07) [S].北京:中國標準出版社,2011.

鹿文紅（1986-），女，內(nèi)蒙古赤峰人，碩士研究生。研究方向：有機污染物環(huán)境行為和控制技術(shù)研究、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全控制。