連瑞麗 ， 李宇偉 ， 馬 霞 ， 張國祖，2 ， 劉永錄

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院藥物工程系 ， 河南鄭州450046 ； 2.河南省康星藥業(yè)股份有限公司 ， 河南鄭州451464)

清熱康口服液的薄層色譜鑒別研究

連瑞麗1， 李宇偉1， 馬 霞1， 張國祖1，2， 劉永錄1

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院藥物工程系 ， 河南鄭州450046 ； 2.河南省康星藥業(yè)股份有限公司 ， 河南鄭州451464)

為了建立清熱康口服液的薄層色譜鑒別的方法，給制定其質(zhì)量控制標準提供依據(jù)。用薄層色譜法對清熱康口服液處方中的穿心蓮、板藍根和大青葉進行定性鑒別。結(jié)果在薄層色譜中均能檢出穿心蓮、板藍根和大青葉藥味的特征斑點。表明本法操作簡便可靠、專屬性強、靈敏度高，可作為清熱康口服液的定性鑒別和質(zhì)量控制的方法。

清熱康口服液 ； 薄層色譜 ； 質(zhì)量控制

清熱康口服液是根據(jù)中獸醫(yī)理論和臨床辨證的原則，自擬組方選用穿心蓮、板藍根和大青葉三味中藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、瀉火除煩、辛涼解表、消炎止痛之功效，對動物細菌性與病毒性呼吸道感染及腸道感染性疾病有特殊療效。目前，該制劑尚缺乏相應(yīng)的鑒別方法，本研究參考《中華人民共和國獸藥典》(二部)和《中華人民共和國藥典》(一部)[1-2]中穿心蓮、板藍根和大青葉三味中藥材的薄層色譜鑒別方法，建立了清熱康口服液質(zhì)量控制的薄層色譜鑒別方法，可更好地控制該制劑的質(zhì)量，為進一步建立藍蓮口服液的質(zhì)量標準提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器設(shè)備 薄層自動點樣儀，薄層色譜掃描儀，上?？普苌萍加邢薰?；UV230+型可變波長紫外檢測器，大連依利特分析儀器有限公司；AUW220D1電子天平，日本島津國際貿(mào)易有限公司；JCX-400GZ超聲波清洗器，山東省濟寧市超聲電子儀器廠。所用的玻璃器皿等用具均經(jīng)10%硝酸浸泡48 h后，用超純水洗凈。

1.2 主要試藥與試劑 清熱康口服液，由河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院“中獸藥新制劑”科技創(chuàng)新團隊與河南省康星藥業(yè)股份有限公司獸藥新制劑實驗室聯(lián)合研制(批號為：14070501、14070502)；(R，S)-告依春標準品(批號為：111753-201304)、穿心蓮內(nèi)酯標準品(批號為：110854-201313)、脫水穿心蓮內(nèi)酯標準品(批號為：110797-200307)、靛玉紅標準品(批號為110717-200204)，均購自中國藥品生物制品檢定所。環(huán)己烷、三氯甲烷、丙酮、磷酸、甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯等試劑，均為分析純；硅膠G 薄層板、硅膠GF254 薄層板，青島海洋化工廠生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 穿心蓮的薄層色譜鑒別 取清熱康口服液2 mL，加乙醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至5 mL，作為供試品溶液。另取穿心蓮對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取脫水穿心蓮內(nèi)酯標準品、穿心蓮內(nèi)酯標準品，加無水乙醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作為標準品溶液。按清熱康口服液的生產(chǎn)工藝制備陰性樣品(不含穿心蓮)量取1.5 mL，按供試品制備方法制備成陰性對照藥，材溶液。吸取上述4種溶液各10 μL，依次分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254 nm的紫外光燈下檢視[1-4]。

如圖1所示，在波長為254 nm的紫外光燈下檢視，供試品中的穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯成分可與其他成分有效分離開，并與對照藥材和穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯標準品相對應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的斑點。無穿心蓮陰性樣品在此種展開劑和顯色方法中，未出現(xiàn)斑點。由此可以看出，此鑒別方法可以作為清熱康口服液中穿心蓮的薄層鑒別方法。

圖1 穿心蓮的薄層色譜圖

注：1：穿心蓮對照藥材；2、3：清熱康口服液(批號為：14070501、14070502)；4：穿心蓮陰性；5：穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯

2.2 板藍根的薄層色譜鑒別 取清熱康口服液2 mL，加80%甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取板藍根對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取(R，S)-告依春標準品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為標準品的溶液。按清熱康口服液的生產(chǎn)工藝制備不含板藍根的陰性樣品，量取2 mL，按供試品制備方法制成陰性對照藥材溶液[1-2，5，7]。吸取上述4種溶液各10 μL，依次點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60°C～90°C)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254 nm的紫外光燈下檢視。

如圖2所示，在波長為254 nm的紫外光燈下檢視，供試品中的(R，S)-告依春成分可與其他成分有效分離開，并與對照藥材和(R，S)-告依春標準品相應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的斑點。無板藍根陰性樣品在此種展開劑和顯色方法中，未出現(xiàn)斑點。由此可以看出，此鑒別方法可以作為清熱康口服液中板藍根的薄層鑒別方法。

圖2 板藍根的薄層色譜圖

注：1：板藍根陰性；2、3.清熱康口服液(批號為：14070501、14070502)；4：R-S告依春；5：板藍根對照藥材

2.3 大青葉的薄層色譜鑒別 取清熱康口服液2 mL，加三氯甲烷20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。另取靛玉紅標準品加三氯甲烷制成每毫升含1 mg的溶液，作為標準品溶液。按清熱康口服液的生產(chǎn)工藝制備不含大青葉的陰性樣品，量取1.5 mL，按供試品制備方法制成陰性對照藥材溶液[1-2，8-9]。吸取上述4種溶液各 10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干。

如圖3所示，白光下視檢，供試品中的靛玉紅成分可與其他成分有效分離開，并與標準品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。無大青葉陰性樣品在此種展開劑和顯色方法中，未出現(xiàn)斑點。由此可以看出，此鑒別方法可以作為清熱康口服液中大青葉的薄層鑒別方法。

圖3 大青葉的薄層色譜圖

注：1：靛玉紅；2、3：清熱康口服液(批號為：14070501、14070502)；4：大青葉陰性

3 討論

3.1 薄層色譜條件的優(yōu)化 該鑒別方法是參考《中華人民共和國獸藥典》(二部)和《中華人民共和國藥典》(一部)[1-2]板藍根、大青葉和穿心蓮三味中藥材的薄層色譜鑒別方法，并對采用的硅膠薄層板進行了篩選，穿心蓮和板藍根采用硅膠GF254薄層板，大青葉采用硅膠G薄層板；穿心蓮以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)為展開劑，板藍根以石油醚(60 ℃～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，大青葉以環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶2)為展開劑，能夠獲得理想的色譜效果。此外，藥典規(guī)定單藥的稱樣量是0.5 g，點樣量均為5 μL，按照5 μL的點樣量，經(jīng)多次試驗，發(fā)現(xiàn)樣品和對照藥材都很難展開，斑點分離度差。因清熱康口服液為復(fù)方制劑，其含量為每毫升相當于0.5 g原藥材，將藥典中的方法折算成復(fù)方的稱樣量為2 mL，同時由于口服液樣品中活性成分的含量較低，故將點樣量由藥典的5 μL增加為10 μL，所得色譜圖的斑點清晰，分離良好。

3.2 清熱康口服液的薄層色譜鑒別 本處方中藥相互間干擾較大，本文在優(yōu)化了薄層色譜條件后，對清熱康口服液中的活性成分進行了薄層色譜鑒別研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些活性成分均可與其他成分有效分離開，并分別與相應(yīng)對照藥材或標準品相同的位置上出現(xiàn)相同顏色并且清晰的斑點，而所有陰性樣品在相應(yīng)的展開劑和顯色方法中，均未出現(xiàn)相應(yīng)標準品斑點。結(jié)果表明，本研究所采用的薄層色譜方法，專屬性強、重現(xiàn)性好、靈敏度高，用于清熱康口服液中穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、(R，S)-告依春、靛玉紅成分的定性鑒別及質(zhì)量控制是切實可行的。

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Study on Thin Layer Chromatography Identification of Qingrekang Oral Liquid

LIAN Rui-li1， LI Yu-wei1， MA Xia1， ZHANG Guo-zu1，2， LIU Yong-lu1

(1.Medicinal Engineering Department of Henan University of Animal Husbandry and Economy，Zhengzhou 450046，China ； 2.Henan KangXing pharmaceutical company limited，Zhengzhou 451464，China)

To establish a thin layer chromatography(TLC)identification method of Qingrekang oral liquid to provide quality control standard for the product.The TLC method was established for qualitative identification ofAndrographispaniculata、RadixIsatidisand leaves of Radix Isatidis in prescription of Qingrekang Oral Liquid.The character blotches ofAndrographispaniculata、RadixIsatidisand leaves of Radix Isatidis in prescription were detected by TLC.The TLC identification method is a simple，reliable and specific method with good reproducibility，which can be used as quality control identification method for Qingrekang Oral Liquid.

Qingrekang oral liquid ； Thin layer chromatography(TLC) ； Quality control

MA Xia

2015-08-12

河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院“中獸藥新制劑創(chuàng)新”科技創(chuàng)新團隊項目(HUAHE2015009)；河南省教育廳自然科學(xué)研究計劃項目(2009B210025)

連瑞麗(1978-)，女，講師，碩士，主要從事中獸藥新制劑的研究工作，E-mail：lrl410@163.com

馬霞，E-mail：maxia801010@126.com

R284

A

0529-6005(2016)11-0107-03