何孟蓮 ， 趙滿達(dá) ， 李 芳

(山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 ， 山東濰坊261061)

不同動(dòng)物來(lái)源轉(zhuǎn)移因子(TF)對(duì)肉仔雞T細(xì)胞免疫功能及免疫器官指數(shù)影響的比較研究

何孟蓮 ， 趙滿達(dá) ， 李 芳

(山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 ， 山東濰坊261061)

本研究用不同動(dòng)物來(lái)源轉(zhuǎn)移因子(TF)進(jìn)行AA+肉仔雞T細(xì)胞免疫功能及免疫器官指數(shù)影響的比較研究。采用T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖和T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖實(shí)驗(yàn)，來(lái)探討不同動(dòng)物來(lái)源TF免疫活性和對(duì)T細(xì)胞的體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)化增殖效果的一致性；給1 d肉仔雞飲水投服不同動(dòng)物來(lái)源TF，7 d、14 d、21 d采樣檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析證明，各實(shí)驗(yàn)組TF均對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖具有促進(jìn)作用，其中烏骨雞來(lái)源TF作用最強(qiáng)；TF對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)影響實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析證明，TF對(duì)肉仔雞免疫器官具有促生長(zhǎng)作用，并表明實(shí)驗(yàn)組中烏骨雞TF對(duì)免疫器官促生長(zhǎng)作用最強(qiáng)。

TF； 肉仔雞； T細(xì)胞免疫活性； 免疫器官指數(shù)

轉(zhuǎn)移因子(TF)具有活化T細(xì)胞，促IFN和IL生成，活化巨噬細(xì)胞的作用[1]。TF是存在于T細(xì)胞內(nèi)的免疫活性物質(zhì)[2]。TF分子量小，無(wú)熱源，無(wú)免疫原性，無(wú)毒副作用，劑量小，來(lái)源廣。研究證實(shí)，不同動(dòng)物來(lái)源的TF調(diào)節(jié)對(duì)T細(xì)胞功能的作用，促受體T細(xì)胞激活作用[3-4]。未見(jiàn)有不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)T細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)效果比較研究的報(bào)道。本研究探討不同動(dòng)物來(lái)源的TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體內(nèi)外轉(zhuǎn)化增殖作用及免疫器官指數(shù)的影響比較研究，篩選出對(duì)肉仔雞免疫調(diào)節(jié)作用最佳的一種TF。同時(shí)，采用T細(xì)胞體內(nèi)外轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)，來(lái)探討TF對(duì)T細(xì)胞的體內(nèi)外轉(zhuǎn)化增殖作用的一致性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 非免疫商品AA+肉仔雞共1 000羽。

1.2 TF的提取及活性檢測(cè) TF的提取根據(jù)文獻(xiàn)[5]制備TF提取物。用蔡氏濾菌器除菌，除菌后TF置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。TF的活性檢測(cè)根據(jù)文獻(xiàn)[6]檢測(cè)TF的活性。

1.3 不同動(dòng)物來(lái)源TF 對(duì)AA+肉仔雞T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)

1.3.1 試驗(yàn)AA+肉仔雞淋巴細(xì)胞懸液的制備 7日齡仔雞心臟采血，加肝素抗凝，根據(jù)文獻(xiàn)[7]制備淋巴細(xì)胞懸液。

1.3.2 淋巴細(xì)胞的培養(yǎng) 將淋巴細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)(37 ℃ 5% CO2)68 h，吸出50 μL上清液，加入10 μL MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h加入100 μL DMSO裂解細(xì)胞[8]。

1.3.3 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)AA+肉仔雞T細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖的影響 試驗(yàn)共設(shè)10個(gè)組，分別為空白對(duì)照組、PHA對(duì)照組、豬TF組、肉雞TF組、肉鴨TF組、烏骨雞TF組、牛TF組、綿羊TF組、山羊TF組、犬TF組等10個(gè)組別，每組重復(fù)5孔。根據(jù)文獻(xiàn)[9-11]檢測(cè)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增值效果。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)以SI值表示。

1.4 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)AA+肉仔雞T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(α-乙酸萘酯酶染色方法)

1.4.1 試驗(yàn)分組 非免疫AA+肉仔雞1 000羽，分10組，分別為空白對(duì)照組、PHA對(duì)照組、豬TF組、肉雞TF組、肉鴨TF組、烏骨雞TF子組、牛TF組、綿羊TF組、山羊TF組、犬TF組等，每組100羽，分欄飼養(yǎng)。試驗(yàn)組3日齡肉仔雞分別飲水添加1 000單位/100 Kg不同動(dòng)物來(lái)源TF，PHA組50 mg/1 000羽飲水、空白對(duì)照組飲水中不添加任何物質(zhì)。飲水投藥的第24、72、120、168、240小時(shí)采血涂片，待檢。

1.4.2 α-乙酸萘酯酶染色方法 根據(jù)文獻(xiàn)[12]對(duì)樣品進(jìn)行染色，并顯微鏡觀察其結(jié)果。

1.5 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)影響比較試驗(yàn)

1.5.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 非免疫AA+肉仔雞100羽隨機(jī)分組，對(duì)照組、PHA組、烏骨雞TF組、犬TF組、肉鴨TF組、肉雞TF組、豬TF組、綿羊TF組、山羊TF組和牛TF組等10組，每組60羽。實(shí)驗(yàn)組1日齡肉仔雞分別飲水添加1 000單位/100Kg不同來(lái)源TF，PHA組50mg/1 000羽飲水、對(duì)照組飲水中不添加任何物質(zhì)。

1.5.2 免疫器官指數(shù)的計(jì)算 于7、14、21日齡雞放血致死，稱取體重，摘取脾臟、胸腺、腔上囊，稱取濕重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重(g)/體重(g)×1 000[13]。1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SAS軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖實(shí)驗(yàn) 每一組 5個(gè)孔的數(shù)據(jù)重復(fù)性較高，表明TF對(duì)T細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)化增殖作用穩(wěn)定。各實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和PHA對(duì)照組比較，數(shù)據(jù)分析，差異極顯著，表明各實(shí)驗(yàn)組TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖作用顯著；不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體外增殖作用強(qiáng)度不同，烏骨雞來(lái)源TF與其他實(shí)驗(yàn)組比較，結(jié)果表明，烏骨雞來(lái)源TF對(duì)T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖作用最強(qiáng)。

表1 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)

注：1.對(duì)照組和的試驗(yàn)組比較，*為差異顯著，**為差異極顯著； 2.烏骨雞TF組和其他試驗(yàn)組比較，a為差異顯著，b為差異極顯著

2.2 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(α-乙酸萘酯酶染色方法) 各試驗(yàn)組數(shù)據(jù)與空白對(duì)照組和PHA對(duì)照組比較，差異極顯著，試驗(yàn)組TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖具有顯著促進(jìn)作用；不同動(dòng)物來(lái)源TF作用強(qiáng)度不同，烏骨雞來(lái)源TF作用最強(qiáng)。從第24小時(shí)的數(shù)據(jù)可看出，TF的促T細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖作用反應(yīng)迅速，效果明顯；從第240小時(shí)的數(shù)據(jù)可看出，TF的促T細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖作用持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，尤其烏骨雞來(lái)源TF即使到了第240小時(shí)也能維持較高的活性。

2.3 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)影響比較試驗(yàn) 烏骨雞TF與其他各試驗(yàn)組比較，與犬TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟及14日齡腔上囊比較，差異極顯著。與肉鴨TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟及14、21日齡腔上囊比較，差異極顯著；與7日齡腔上囊比較，差異顯著。與肉雞TF

表2 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)

注：1.對(duì)照組和試驗(yàn)組比較，*為差異顯著，**為差異極顯著； 2.烏骨雞TF組和其他試驗(yàn)組比較，a為差異顯著，b為差異極顯著

組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟及14、21日齡腔上囊比較，差異極顯著；與7日齡腔上囊比較，差異顯著。與豬TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟及14日齡腔上囊比較，差異極顯著；與21日齡腔上囊比較，差異顯著。與綿羊TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟、腔上囊均比較，差異極顯著。與山羊TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟、腔上囊比較，差異極顯著。與牛TF組7、14、21日齡肉仔雞胸腺、脾臟、腔上囊比較，差異極顯著。試驗(yàn)證明，不同動(dòng)物TF中，烏骨雞TF對(duì)肉仔雞免疫器官的促生長(zhǎng)作用最強(qiáng)。

表3 不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)影響比較試驗(yàn)

注：1.對(duì)照組和試驗(yàn)組比較，*為差異顯著，**為差異極顯著； 2.烏骨雞TF組和其他試驗(yàn)組比較，a為差異顯著，b為差異極顯著

3 討論

病毒性疾病是目前國(guó)內(nèi)肉雞行業(yè)發(fā)展的主要制約因素之一，尤其是近年來(lái)，隨著我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，禽病毒性疾病的危害越來(lái)越突出。疫苗在預(yù)防病毒病起著很重要的作用，但由于多種因素的影響，生產(chǎn)中常見(jiàn)有免疫失敗而病毒性疾病的暴發(fā)現(xiàn)象，給國(guó)內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。從改善家禽整體免疫狀態(tài)入手，采取有效的措施提高家禽免疫細(xì)胞對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)現(xiàn)有禽用疫苗的免疫效果，降低免疫失敗發(fā)生概率。因此，研究開(kāi)發(fā)新型免疫調(diào)節(jié)劑，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展成為新的突破點(diǎn)。

本試驗(yàn)表明，不同動(dòng)物來(lái)源TF均對(duì)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖作用顯著，促免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育作用也顯著，TF通過(guò)促T細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖作用和促免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育，可顯著提高肉仔雞免疫功能。TF對(duì)肉仔雞免疫調(diào)節(jié)免疫功能的作用強(qiáng)弱與來(lái)源動(dòng)物密切相關(guān)，從試驗(yàn)結(jié)果得出，烏骨雞來(lái)源TF活性最強(qiáng)，牛來(lái)源的TF活性最弱；不同動(dòng)物來(lái)源TF在飲水投服時(shí)在24 h內(nèi)激活體內(nèi)T細(xì)胞，120-168 h左右作用達(dá)高峰，過(guò)240 h仍然使保持T細(xì)胞的激活狀態(tài)，說(shuō)明TF激活T細(xì)胞作用迅速，被激活的T細(xì)胞超過(guò)240 h仍然保持較高激活狀態(tài)。不同動(dòng)物來(lái)源TF對(duì)T細(xì)胞體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)結(jié)果比較，可看出TF對(duì)T細(xì)胞體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)化增殖作用高度一致。

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Comparison on the function of T-cell-mediated immunity and immune organ index of transfer factor from different species on chicken

HE Meng-lian， ZHAO Man-da， LI Fang

(Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College , Weifang 261061, China)

In this study, we investigated the effects of animal transfer factor (TF) of various sources on AA+broiler T cell immune function and immune organ index. One day old AA+ broilers were given TF from different sources in drinking water, and then samples were collected at 7 d, 14 d, and 21d and analyzed. Our results showed that TF in each experimental group had a promoting role in T cell proliferation in vitro and in vivo, and also increased immune organ index. Of which, black bone chicken source TF had the strongest effect.

TF (transfer factor) ; chicken ; T-cell-mediated immunological activity ; immune organ index

ZHAO Man-da

2015-09-11

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)(SDAIT-11-05)

何孟蓮(1974- )，女(蒙古族)，講師，碩士，主要從事動(dòng)物免疫病理學(xué)研究, E-mail：sdmyxymdzhao@163.com

趙滿達(dá)， E-mail：sdmyxymdzhao@163.com

S858.31

A

0529-6005(2016)11-0032-03