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        魚粉中組胺含量變化規(guī)律及魚粉保質(zhì)期的研究

        2017-01-05 08:12:52張曉曉王倩茹張明珠
        飼料工業(yè) 2017年12期
        關(guān)鍵詞:魚粉組胺保質(zhì)期

        ■張曉曉 王倩茹 張明珠 紀 元

        (中國農(nóng)業(yè)大學煙臺研究院,山東煙臺 264670)

        魚粉是水產(chǎn)飼料中的主要蛋白源,是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料,富含多種必需氨基酸、必需脂肪酸、礦物質(zhì)、維生素等[1],具有較高的可消化能和良好的適口性。在水產(chǎn)飼料中具有重要地位[2]。隨著我國漁業(yè)、畜牧業(yè)等產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展,魚粉的需求量也大大增加。組胺,是魚粉中的游離氨基酸在組氨酸脫羧酶的作用下脫羧后產(chǎn)生的[3],而組胺含量過高會對養(yǎng)殖對象產(chǎn)生危害,輕者引起過敏,重者則會危及生命[4-5]。魚粉的儲藏條件是影響魚粉變質(zhì)的決定性因素。因此探究魚粉在不同的溫濕度下產(chǎn)組胺的規(guī)律對魚粉的儲藏具有重要意義。本試驗通過一系列的檢測數(shù)據(jù)得出組胺的產(chǎn)生規(guī)律,科學的檢驗了魚粉的保質(zhì)期限,以期為魚粉在加工儲存中的組胺控制方面提供一定的理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑儀器

        1.1.1 原料

        魚粉,購自青島龍興飼料有限公司,生產(chǎn)日期為2015.05.11,保質(zhì)期18個月。

        1.1.2 試劑

        正戊醇、三氯乙酸溶液(100 g/l)、碳酸鈉溶液(50 g/l)、氫氧化鈉溶液(250 g/l)、鹽酸(1+11)、組胺標準使用液(200 μg/ml)、偶氮試劑(現(xiàn)配現(xiàn)用)。

        1.1.3 儀器

        錐形瓶、分液漏斗、比色管、比色皿、溫濕度表、TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)、SPSS Statistics17.0數(shù)據(jù)分析軟件。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 溫濕度的記錄

        記錄每天中午12點和晚上8點實驗室的溫濕度。計算每月平均溫濕度并繪制成組合折線圖。計算方法如下。

        式中:Thi——12:00溫度;

        Tli——20:00溫度;

        Thl——12:00濕度;

        Tll——20:00濕度。

        1.2.2 標準曲線的繪制

        吸取1 ml鹽酸于10 ml比色管中,另取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml組胺標準使用液(200 μg/ml),加水至2 ml,各比色管再加入3 ml碳酸氫鈉溶液,3 ml偶氮試劑,放置10 min后(溶液變?yōu)榧t棕色),分別進行全波長掃描,確定最大吸光度的波長。

        吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml組胺標準使用液(200 μg/ml),分別置于10 ml比色管中,加水至1ml,再各加1 ml鹽酸、3 ml碳酸鈉溶液、3 ml偶氮試劑,加水至10 ml刻度,混勻,放置10 min,用零管調(diào)節(jié)零點,制成終濃度0、40、80、120、160、200 μg/ml于 472 nm波長處測定吸光度,繪制標準曲線。

        1.2.3 試樣測定

        稱取2~5 g魚粉,置于具塞錐形瓶中,加入15~20 ml三氯乙酸溶液,60℃水浴加熱0.5 h,過濾后,吸取5.00 ml濾液,置于分液漏斗中,加入NaOH溶液使呈堿性。

        加入7.5 ml正戊醇,振搖5 min;提取3次后,合并正戊醇于25 ml容量瓶中,并稀釋至25 ml。吸取5 ml正戊醇提取液于分液漏斗中,每次加7.5 ml鹽酸振搖提取3次,合并鹽酸提取液并稀釋至25 ml容量瓶中備用。

        試樣中各加3 ml碳酸鈉溶液、3 ml偶氮試劑,加水至刻度,混勻,放置10 min,用零管調(diào)節(jié)零點,于472 nm波長處測定吸光度,根據(jù)標準曲線計算結(jié)果[6]。

        1.2.4 感官評定

        以色澤、氣味、質(zhì)感為評定指標,每月進行一次評定,一項出現(xiàn)異常即為變質(zhì)。

        1.2.5 數(shù)據(jù)計算與分析

        ①組胺含量的計算方法:

        式中:X——試樣中組胺的含量(mg/100 g);

        vt——加入三氯乙酸溶液的體積(ml);

        m1——試樣中組胺的質(zhì)量(根據(jù)吸光度和標準曲線計算)(μg);

        m2——試樣質(zhì)量(g)。

        ②組胺含量與溫濕度的關(guān)系

        用SPSS Statistics17.0數(shù)據(jù)分析軟件對溫濕度進行二元線性分析,確定溫度和濕度對組胺產(chǎn)生量的影響系數(shù)。

        2 試驗結(jié)果

        2.1 實驗室溫濕度周年變化

        實驗室溫濕度記錄,如圖1。6到9月份的溫濕度相對較高,10到次年3月份的溫濕度較低。

        圖1 實驗室溫濕度記錄圖

        2.2 組胺含量周年變化

        ①繪制標準曲線,如圖2。

        圖2 紫外可見分光光法標準曲線

        用分光光度計對組胺標準溶液的全波段進行掃描發(fā)現(xiàn)在472 nm紫外吸收峰最高。在此波長下,對不同濃度組胺標準溶液的吸光度進行測定,發(fā)現(xiàn)組胺含量在0~200 μg/ml之間與吸光度呈線性相關(guān),在此范圍內(nèi)制定標準工作曲線為y=0.011 6x+0.105 4,(R2=0.964 1)。

        ②魚粉中組胺的產(chǎn)生量,如圖3。組胺的總含量在不斷增加,到12月份試樣中的組胺含量達到131.217 mg/100 g。

        ③ 每月組胺增長量,如圖4。5、6、7、9月份的增長速度較快,7月份組胺增長量最大,為17.95 mg/100 g,其他月份組胺量增長相對較慢。

        2.3 實驗室條件下組胺含量與溫濕度的關(guān)系

        用SPSS Statistics17.0數(shù)據(jù)分析軟件進行線性回歸分析和逐步分析。

        圖3 試樣中組胺含量折線圖

        圖4 試樣中每月組胺增長量折線圖

        通過線性回歸分析和逐步方法進行分析,得到表1~表3,由表1~表3可知,在逐步分析中由于溫度對因變量組胺含量的作用較小,所以不被引入回歸方程分析,分析結(jié)果表明,濕度對組胺含量的影響具有顯著性。設(shè)X為濕度,Y為每月組胺產(chǎn)生量,根據(jù)表3可列出方程Y=-10.219+0.274X(P<0.05),濕度與每月組胺產(chǎn)生量呈正相關(guān),符合分析結(jié)果。

        表1 模型匯總

        表2 Anovab

        表3 系數(shù)a

        2.4 感官評定結(jié)果

        試樣每月感官評定結(jié)果見表4。

        表4 試樣每月感官評定結(jié)果

        由表4知,試驗飼料最早出現(xiàn)變質(zhì)的指標是氣味,8月出現(xiàn)異味,9月份開始發(fā)黏,根據(jù)感官評定變質(zhì)的指標[7]判定樣品于8月份變質(zhì),保質(zhì)期為15個月。

        3 討論

        3.1 關(guān)于組胺含量測定的方法

        用分光光度計對組胺標準溶液的全波段進行掃描發(fā)現(xiàn)在472 nm處紫外吸收峰最高,不同于其他實驗中的480 nm波長[6]。在此波長下,對不同濃度組胺標準溶液的吸光度進行測定,發(fā)現(xiàn)組胺含量在0~200 μg/ml之間與吸光度呈線性相關(guān)。

        3.2 實驗室條件下組胺含量與溫濕度的關(guān)系

        儲藏環(huán)境中由于溫濕度的變化,導(dǎo)致魚粉的水分、酸價等指標發(fā)生物理化學變化,進而為產(chǎn)組胺提供了良好的生長繁殖條件,從而使組胺生成速度加快,組胺含量增多[8]。

        從3月份到8月份儲存魚粉的溫濕度都呈升高趨勢,8月份到12月份的溫濕度逐漸降低。結(jié)合溫濕度記錄圖和試驗所測得樣品中組胺含量可知隨著溫度和濕度的升高,魚粉中組胺的含量在不斷增加,且7月份和8月份升高最快,到11、12月份組胺含量增加速度減慢。

        圖1中5月和7月實驗室的溫度相同,但濕度(7月份濕度為68%RH,5月份是57%RH)相差較大,其他相鄰月份的實驗室溫度相差也都比濕度相差小,試驗結(jié)果(表1、2、3)也說明在適宜溫度范圍內(nèi)濕度對組胺的產(chǎn)生影響作用更大,與軟件分析結(jié)果相符。Sevim Kose等[9]在魚粉中組胺含量變化規(guī)律的研究中指出,溫度在0、20、30℃和 35℃時,對組胺生成量沒有顯著性影響。與試驗結(jié)果相符。

        3.3 保質(zhì)期的判定

        魚粉儲藏環(huán)境中的溫度及濕度變化,是影響組胺含量變化的最直接、最可觀的因素。魚粉組胺含量超過1 000 mg/kg時,即可引起過敏性食物中毒[10]。由圖3可知,8月份魚粉中的組胺含量為1 110.487 mg/kg,已經(jīng)不能再作為飼料投喂了[11]。在感官評定方面,由表4知,試驗飼料最早出現(xiàn)變質(zhì)的指標是氣味,8月份出現(xiàn)異味,9月份開始發(fā)粘,根據(jù)國標魚粉感官評定標準[11],在氣味、顏色、質(zhì)感、有毒物質(zhì)含量等方面至少一項出現(xiàn)異常,即判定該魚粉已發(fā)生變質(zhì),不能繼續(xù)作為飼料,與組胺含量測定結(jié)果相符[11]。試驗魚粉生產(chǎn)日期為2015年5月,組胺超標日期為2016年8月,保質(zhì)期為15個月。而包裝上標明的保質(zhì)期為18個月,其原因可能與魚粉的包裝方式、魚粉種類、實驗室儲存環(huán)境、儲藏方式、光照等因素有關(guān)。

        4 結(jié)論

        在本實驗室常規(guī)儲存條件下,溫度和濕度對魚粉中組胺的產(chǎn)生量具有直接影響,其中濕度的影響更大。經(jīng)過科學試驗確定在實驗室存儲條件下,魚粉的保質(zhì)期為15個月。因此,建議魚粉儲存在低溫干燥的環(huán)境中,且使用時間盡量不要超過產(chǎn)品的保質(zhì)期。

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