黃益，于暕辰，唐戈，袁潔，高曉霞

(1.廣東藥科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.中山大學(xué) 中山醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510080)

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紅樹(shù)林內(nèi)生真菌來(lái)源內(nèi)酯類(lèi)化合物D1952抗腫瘤活性研究

黃益1,2，于暕辰2，唐戈2，袁潔2，高曉霞1

(1.廣東藥科大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.中山大學(xué) 中山醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510080)

目的 探討紅樹(shù)林老鼠簕內(nèi)生真菌來(lái)源內(nèi)酯類(lèi)化合物D1952抗腫瘤作用及分子機(jī)制。方法 分子對(duì)接技術(shù)尋找D1952的潛在靶點(diǎn)，四甲基二氮唑藍(lán)(MTT)比色法研究D1952抗腫瘤譜；脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)、PI染色法、免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)D1952對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的變化。結(jié)果 細(xì)胞周期蛋白激酶2(CDK2)是D1952的潛在靶點(diǎn)；D1952能有效抑制21種腫瘤細(xì)胞的增殖，且對(duì)MDA-MB-435的半數(shù)抑制濃度(IC50)為1.11 μmol/L。TUNEL染色可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡明顯；流式細(xì)胞術(shù)表明其能將MDA-MB-435細(xì)胞阻滯于G1/S 期，且D1952能促進(jìn)PARP的切割、導(dǎo)致p-RB降低和p21的表達(dá)增加。結(jié)論 紅樹(shù)林老鼠簕內(nèi)生真菌來(lái)源化合物D1952具有較好的抗腫瘤活性，并有望成為靶向CDK2的抗腫瘤先導(dǎo)化合物。

紅樹(shù)林； 細(xì)胞周期蛋白激酶2； 小分子抑制劑； 抗腫瘤

紅樹(shù)林因具有陸地到海洋過(guò)度獨(dú)特的特殊生態(tài)系統(tǒng)，蘊(yùn)藏著極為豐富和多樣的微生物群落，目前以紅樹(shù)林來(lái)源為代表的天然產(chǎn)物已成為海洋藥物研究的熱點(diǎn)[1-2]，從中發(fā)現(xiàn)許多具有新穎結(jié)構(gòu)和較強(qiáng)生物活性的化合物[3]。老鼠簕(AcanthusilicifoliusLinn)為爵床科老鼠簕屬藥用紅樹(shù)植物，收錄在《全國(guó)中草藥匯編》[4]，主要用于淋巴結(jié)腫大、急慢性肝炎、肝脾腫大、胃痛、咳嗽、哮喘等癥。Babu等[5]將鼠簕的乙醇提取物進(jìn)行鼠類(lèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤效應(yīng)。Zhao等[6]從老鼠簕根中發(fā)現(xiàn)4個(gè)新型2-唑啉酮對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性作用。此外，老鼠簕的次生代謝產(chǎn)物及其抗腫瘤活性也有相關(guān)報(bào)道[7-8]。

細(xì)胞周期蛋白激酶(CDK)一直被認(rèn)為是抗腫瘤藥物及其他增殖失調(diào)疾病藥物研發(fā)的重要靶點(diǎn)，其抑制劑按作用機(jī)制不同，大致可分為ATP競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑[9]，其中ATP競(jìng)爭(zhēng)性CDK抑制劑在CDK抑制劑研發(fā)較多。ATP競(jìng)爭(zhēng)性CDK抑制劑多為平面雜芳烴結(jié)構(gòu)，由雜環(huán)家族組成或衍生而來(lái)，也可來(lái)源于天然產(chǎn)物[10]。

內(nèi)酯類(lèi)化合物D1952來(lái)源于紅樹(shù)林老鼠簕樹(shù)皮內(nèi)生真菌，具有2個(gè)苯環(huán)和1個(gè)7元環(huán)的內(nèi)酯平面結(jié)構(gòu)，有望成為一個(gè)新型CDK抑制劑，本文從分子水平和細(xì)胞水平對(duì)D1952化合物抗腫瘤作用進(jìn)行了研究，以期為進(jìn)一步探索老鼠簕藥用價(jià)值，并為該化合物最終成為抗腫瘤藥物先導(dǎo)化合物提供理論依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 主要試劑及儀器

胎牛血清(Hyclone)；DMEM完全培養(yǎng)基/1640培養(yǎng)基(Invitrogen)；四甲基偶氮唑藍(lán)(Genview)；TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Promega)；核糖核酸酶RNAase(鼎國(guó)生物)；碘化丙啶PI(凱基生物)；Anti-Fade試劑(Life)；人PARP抗體、人p21(Cell Signaling Technology)；α-tubulin、二甲基亞砜(DMSO)、青霉素、鏈霉素(Sigma)；兔抗、鼠抗、BCA蛋白定量分析試劑盒、ECL顯色液(Pierce)；PVDF膜(Millipore)；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo)；倒置顯微鏡(Carl Zeiss)；多功能酶標(biāo)儀(BioTek)。

1.2 細(xì)胞系

人白血病細(xì)胞系HL-60、K562，人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H226、NCI-H460，人結(jié)腸癌細(xì)胞系COLO205、HCT-116、HCT-15、HT-29、KM12、SW-620、SNB-19、U251，人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-435、MCF7、MDA-MB-231、BT-549、T-47D、MDA-MB-468，人腎癌細(xì)胞系SN12C，人前列腺癌細(xì)胞系PC-3為中山大學(xué)熱帶病防治研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存，并在已發(fā)表的其他研究項(xiàng)目中使用[11-12]。

1.3 化合物D1952與CDK2蛋白晶體結(jié)構(gòu)

海洋小分子化合物來(lái)源于國(guó)家海洋生物天然產(chǎn)物化合物庫(kù)(http://mnpd.sysu.edu.cn/)。該化合物庫(kù)收集管理海洋天然產(chǎn)物化合物信息超過(guò)13 000條，保藏化合物實(shí)物樣品超過(guò)2 000個(gè)。化合物D1952由中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院佘志剛教授提供[13]，DMSO溶解為10 mmol/L儲(chǔ)存液。CDK2的晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)來(lái)源于蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(protein data bank，PDB)。

2 方法

2.1 化合物D1952和CDK2蛋白的結(jié)構(gòu)域?qū)?/p>

采用MOE 8.0軟件對(duì)目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)和臨床前研究的23個(gè)CDK小分子抑制劑構(gòu)建相似度篩選模型，對(duì)國(guó)家海洋生物天然產(chǎn)物化合物庫(kù)的小分子化合物進(jìn)行篩選。把篩選獲得的候選分子與CDK2(3FZ1)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)進(jìn)行分子對(duì)接。經(jīng)過(guò)預(yù)處理，去水，加氫，處理蛋白，確定活性位點(diǎn)，將D1952與活性位點(diǎn)對(duì)接。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)

人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H226、NCI-H460，人結(jié)腸癌細(xì)胞系COLO205、HCT-116、HCT-15、HT-29、KM12、SW-620，人膠質(zhì)瘤細(xì)胞SNB-19、U251，人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-435、MCF7、MDA-MB-231、BT-549、T-47D、MDA-MB-468，人腎癌細(xì)胞系SN12C，人前列腺癌細(xì)胞系PC-3分別培養(yǎng)于含10%(φ)胎牛血清、2 mmol/LL-谷氨酰胺、0.1 mmol/L非必需氨基酸、10 mmol/L Hepes(緩沖液)、100 IU/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基中。人白血病細(xì)胞系HL-60、K562，培養(yǎng)于含10%胎牛血清1640培養(yǎng)基中，置于37 ℃ 5%(φ)CO2孵箱中孵育培養(yǎng)。傳代時(shí)用含0.02%EDTA的0.05%胰酶消化，以DMEM完全培養(yǎng)基終止消化。

2.3 MTT比色檢測(cè)細(xì)胞增殖[14]

2.4 TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-435細(xì)胞，按照每孔1.0×105個(gè)細(xì)胞的密度分別接種于已鋪有蓋玻片的24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于37 ℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞孵育24 h后，用不同濃度化合物處理細(xì)胞，均以0.1%DMSO為溶劑對(duì)照，置于37 ℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；處理24 h后，棄去原培養(yǎng)基，加入預(yù)冷的4%(φ)甲醛，4 ℃固定細(xì)胞30 min，PBS洗滌細(xì)胞后，用0.2%Triton X-100室溫下處理5 min，加入100 μL平衡緩沖液覆蓋細(xì)胞，室溫下孵育5～10 min后50 μL rTdT 反應(yīng)緩沖液37 ℃孵育1 h，接著加入2×SSC溶液室溫作用15 min后，PBS洗滌細(xì)胞避光干燥蓋玻片過(guò)夜。用含DAPI的Anti-Fade試劑于蓋玻片上封片，在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察并拍照，TUNEL染色陽(yáng)性熒光信號(hào)呈綠色，DAPI熒光信號(hào)呈藍(lán)色。并取10個(gè)視野進(jìn)行TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.5 PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞2×106接種于60 mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中貼壁生長(zhǎng)24 h后，分別給予不同濃度D1952作用一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，用PBS洗2次，1 200 r/min離心5 min，棄上清后重懸于75%(φ)乙醇中，過(guò)夜，用PBS洗2次后，加入RNAase及PI，37 ℃避光孵育15 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)(激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，吸收波長(zhǎng)為610 nm)，每個(gè)樣品20 000個(gè)細(xì)胞，用ModFit軟件分析。

2.6 Western blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白

收集得到不同濃度梯度處理的細(xì)胞裂解液，按BCA法進(jìn)行蛋白定量，取等量蛋白質(zhì)加入各電泳通道(約40 μg)。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，轉(zhuǎn)到PVDF膜上，5%脫脂牛奶室溫?fù)u床封閉1 h，TBST(pH=7.6)清洗3次，每次15 min，分別加入PARP(1∶1 000)、人p21(1∶500)、人p-RB(1∶500)以及內(nèi)參α-tubulin(1∶1 000)并4 ℃過(guò)夜后，TBST清洗3次，每次15 min，再孵育相應(yīng)二抗(1∶1 000)1 h，TBST清洗3次，每次15 min，最后在暗房用ECL顯色液顯色發(fā)光。

3 結(jié)果

3.1 化合物D1952與CDK2 PDB對(duì)接

通過(guò)對(duì)現(xiàn)有的23個(gè)CDKs小分子抑制劑的3D骨架結(jié)構(gòu)及官能團(tuán)虛擬篩選，發(fā)現(xiàn)D1952與flavopiridol相似性最高。因此基于現(xiàn)有flavopiridol的靶點(diǎn)研究和已有的CDK2 的晶體結(jié)構(gòu)[15](PDB code：3FZ1)，通過(guò)分子對(duì)接，發(fā)現(xiàn)D1952與水化Leu83和Glu81的側(cè)鏈形成較為牢固的氫鍵；同時(shí)與Phe80和Val18形成疊加的π鍵，進(jìn)而使D1952結(jié)合CDK2更加穩(wěn)定(圖1)。結(jié)果表明，化合物D1952與CDK2的非共價(jià)鍵的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合方式，但是這種“緊密”的結(jié)合模式的精確解析還有待其結(jié)構(gòu)生物學(xué)的深入研究。

HOOOHOOOABCD

A. D1952結(jié)構(gòu)圖； B.蛋白與小分子空間位置示意圖； C.小分子蛋白相互作用二維平面圖； D.蛋白小分子相互作用圖。

圖1 D1952與CDK2 活性區(qū)域的虛擬對(duì)接

Figure 1 D1952 binding with active sites of CDK2 by docking method

3.2 D1952對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT的方法探究D1952對(duì)不同組織類(lèi)型共21種腫瘤細(xì)胞增殖的影響，從而進(jìn)行D1952抗腫瘤研究。如圖2所示，D1952能抑制急性白血病細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)腫瘤細(xì)胞、人腎癌細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞的增殖，具有廣泛的抗腫瘤活性。此外，D1952對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435的生長(zhǎng)抑制作用呈現(xiàn)明顯的劑量依賴(lài)性，其作用48 h的半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度為1.11 μmol/L。

3.3 D1952對(duì)MDA-MB-435細(xì)胞周期的阻滯作用

為了進(jìn)一步驗(yàn)證D1952對(duì)人乳腺癌細(xì)胞周期的阻滯作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)PI單染法檢測(cè)不同濃度D1952對(duì)MDA-MB-435細(xì)胞周期的影響。如圖3所示，D1952可引起MDA-MB-435細(xì)胞發(fā)生G1/S期阻滯現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)1.0 μmol/L、2.0 μmol/L的D1952化合物處理24 h后的G1/S期細(xì)胞比例與對(duì)照組37.18%，分別上升至39.38%和43.98%。D1952對(duì)MDA-MB-435細(xì)胞的G1/S期阻滯作用具有一定的濃度依賴(lài)性。

3.4 TUNEL染色檢測(cè)D1952對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用

為了進(jìn)一步確定D1952對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，本研究應(yīng)用TUNEL染色檢測(cè)不同濃度D1952作用24 h后MDA-MB-435細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果顯示(圖4)， 未經(jīng)D1952作用的對(duì)照組幾乎未

A. 3 μmol/L D1952的抗腫瘤譜； B. 不同濃度的D1952對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435作用48 h的抑制效果。

A. D1952誘導(dǎo)MDA-MB-435細(xì)胞周期變化分析； B. D1952作用于MDA-MB-435細(xì)胞的細(xì)胞周期時(shí)相分布。

A. D1952誘導(dǎo)MDA-MB-435細(xì)胞凋亡的結(jié)果； B. D1952作用于MDA-MB-435細(xì)胞的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞定量。

圖4 TUNEL染色檢測(cè)D1952對(duì)MDA-MB-435細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用

Figure 4 Effect of D1952 on the apoptosis of MDA-MB-435 cells

見(jiàn)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞；經(jīng)D1952作用后，TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加。熒光顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞比例，可見(jiàn)隨著D1952濃度的升高，TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞比例逐步增高，呈劑量依賴(lài)性。濃度為1.0 μmol/L的D1952作用24 h后，MDA-MB-435細(xì)胞TUNEL染色陽(yáng)性率均達(dá)到20.05%；2.0 μmol/L濃度的D1952作用24 h后，MDA-MB-435細(xì)胞TUNEL染色陽(yáng)性率均達(dá)到26.49%。

3.5 D1952作用后MDA-MB-435細(xì)胞中凋亡蛋白及細(xì)胞周期蛋白表達(dá)變化

為明確D1952導(dǎo)致人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435凋亡的分子機(jī)制，本文以2個(gè)不同濃度的D1952作用于MDA-MB-435細(xì)胞24 h后，檢測(cè)到相關(guān)的蛋白表達(dá)。如圖5所示，隨著該化合物濃度的提高，凋亡相關(guān)蛋白PARP前體降低，而剪切體升高，這指示該化合物能夠促使細(xì)胞凋亡；細(xì)胞周期抑制蛋白p21表達(dá)水平比對(duì)照組有所升高，而p-RB表達(dá)水平降低，這提示該化合物可能通過(guò)阻滯細(xì)胞G1周期來(lái)促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。

123MDA-MB-435(24h)IntactPARPCleavedPARPp21p-RBα-tubulin

1. Control； 2. 1.0 μmol/L D1952； 3. 2.0 μmol/L D1952。

圖5 D1952作用后MDA-MB-435細(xì)胞中的PARP、p21和p-RB的表達(dá)水平

Figure 5 Effect of D1952 on the expression of PARP,p21and p-RB in MDA-MB-435 cells

4 討論

近年研究發(fā)現(xiàn)，癌細(xì)胞中大多存在細(xì)胞分裂周期基因的活化、過(guò)度表達(dá)及CDKIs(CDK inhibitor，CDKIs)功能的缺損[16]，與其相對(duì)的CDKIs發(fā)揮抑制細(xì)胞周期的制動(dòng)器作用。本文利用計(jì)算機(jī)輔助尋靶點(diǎn)的方法，首先篩選出于D1952具有相似3D空間結(jié)構(gòu)的CDK小分子抑制劑Flavopiridol，在臨床前研究中Flavopiridol表現(xiàn)出誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和腫瘤生長(zhǎng)抑制活性，此外Flavopiridol對(duì)CDK1、2、4的抑制活性試驗(yàn)，以及與酶ATP 結(jié)合口袋的三維晶體結(jié)構(gòu)確證了Flavopiridol與CDKs的相互作用[17]。因此，本文通過(guò)對(duì)Flavopiridol已有研究報(bào)道的靶點(diǎn)進(jìn)行分析，將D1952與現(xiàn)有的蛋白晶體結(jié)構(gòu)CDK2進(jìn)行分子對(duì)接，預(yù)測(cè)其靶點(diǎn)。已有研究表明，F(xiàn)lavopiridol與CDK2的晶體結(jié)構(gòu)顯示其5-羥基和4-酮能分別與CDK2主干上Glu81的羰基氧和Leu83的氨基NH形成兩條氫鍵作用[18]，本實(shí)驗(yàn)對(duì)接結(jié)果發(fā)現(xiàn)D1952也能水化Leu83和Glu81的側(cè)鏈形成較為牢固的氫鍵，同時(shí)，D1952還能與Phe80淺腔中Phe80共軛結(jié)合。近年來(lái)研究者發(fā)現(xiàn)該淺腔只能容納體積較小的疏水性基團(tuán)，對(duì)該淺腔不同程度占據(jù)表明小分子抑制劑的活性具有選擇性[19]。同時(shí)本研究對(duì)D1952體外抗腫瘤活性及其機(jī)制進(jìn)行了研究，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)D1952能有效抑制不同組織類(lèi)型共21種腫瘤細(xì)胞增殖，具有廣泛的抗腫瘤活性。TUNEL實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明D1952具有誘導(dǎo)MDA-MB-435細(xì)胞凋亡的作用。此外，通過(guò)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，D1952能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞造成G1/S期阻滯，引起細(xì)胞凋亡。

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，CDK單體沒(méi)有活性，只有與相應(yīng)的調(diào)節(jié)亞基cyclin結(jié)合后才能變成有活性的穩(wěn)定構(gòu)象。CDK/cyclin的活化也受到內(nèi)源性抑制子抑制、活化及抑制磷酸化的調(diào)節(jié)。其中p21 Waf1/Cip1蛋白作為一種細(xì)胞周期抑制蛋白，可以與CDK2形成復(fù)合體，限制其構(gòu)象改變，抑制酶活，同時(shí)當(dāng)CDK2與cyclin E結(jié)合受到抑制時(shí)，導(dǎo)致視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，RB)磷酸化減少，從而促進(jìn)RB與轉(zhuǎn)錄因子E2F結(jié)合并抑制其活性，造成G1/S阻滯[20]。為探討D1952抗腫瘤的分子機(jī)制，采用Western blotting分析了細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)蛋白變化，結(jié)果表明，D1952作用后，MDA-MB-435細(xì)胞中的凋亡效應(yīng)蛋白PARP發(fā)生裂解，及細(xì)胞周期抑制蛋白p21表達(dá)量升高，同時(shí)p-RB減少，一定程度上說(shuō)明D1952能夠靶向CDK2誘導(dǎo)細(xì)胞通過(guò)p21和p-RB抑制細(xì)胞周期活動(dòng)從而引起細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤的活性。該結(jié)果為深入研究D1952抗腫瘤活性的分子機(jī)制提供了線索，并為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)抗腫瘤新型候選藥物奠定了基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編輯：幸建華)

Potent antineoplastic effects of a lactone D1952 derived from mangrove microbes

HUANG Yi1,2,YU Jianchen2,TANG Ge2,YUAN Jie2,GAO Xiaoxia1

(1.SchoolofPharmacy,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.ZhongshanSchoolofMedicine,Sun-YatSenUniversity,Guangzhou510080,China)

Objective To investigate the antineoplastic activity and mechanism of D1952,a lactone derived from mangrove microbes,at both cellular and molecular levels. Methods The target of D1952 was predicted by molecular docking. MTT assay was utilized to study cytotoxicity of D1952 on different tumor cells. Effects of D1952 on cell cycle and apoptosis were tested by terminal deoxynucleotidyl transferase (TDT)-mediated biotinylated deoxyuridine triphosphate (dUTP)-biotin nick end labeling (TUNEL) staining,PI staining and western blotting. Results D1952 effectively inhibited the proliferation of 21 tumor cells with potentially targeting CDK2. The half maximal inhibitory concentration (IC50) of D1952 in MDA-MB-435 cells was 1.11 μmol/L. D1952 induced cell apoptosis and apoptosis protein PARP was cleaved leading increased P21 and decreased p-RB. D1952 also induced cell cycle arrest at the G1/S phase. Conclusion D1952 derived from mangrove microbes displays the antitumor activity,which is expected to be a lead compound targeting CDK2 in relevant tumors.

mangrove; CDK2; small molecule inhibitor; antitumor

2016-08-12

海洋公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)(201305017); 海洋經(jīng)濟(jì)創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范專(zhuān)項(xiàng)(GD2012-D01-001)

黃益(1991—)，女，2014級(jí)碩士研究生，Email: huanghuayu57@yahoo.com；通信作者: 高曉霞 (1972—)，女，博士，教授，主要從事中藥制劑質(zhì)量控制研究，Email: gaoxxia91@163.com；袁潔(1978—)，女，博士，副教授，主要從事海洋活性分子的藥物靶點(diǎn)及分子機(jī)制研究，Email: yuanjie@mail.sysu.edu.cn。

時(shí)間：2016-11-29 9:37 ttp://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20161129.0937.001.html

R965

A

1006-8783(2016)06-0737-06

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016081202