陳李圳,王秀鳳,馬娜,廖成彬,劉基,賴炳榮,黃沐陽,陳樹龍
(1.廣東藥科大學 中藥學院,廣東 廣州 510006; 2.廣東藥科大學 基礎學院,廣東 廣州 510006; 3.中國中醫(yī)科學院 針灸研究所,北京 100700)
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右歸丸對腎陽虛大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的動態(tài)影響
陳李圳1,3,王秀鳳2,馬娜2,廖成彬2,劉基1,賴炳榮1,黃沐陽1,陳樹龍1
(1.廣東藥科大學 中藥學院,廣東 廣州 510006; 2.廣東藥科大學 基礎學院,廣東 廣州 510006; 3.中國中醫(yī)科學院 針灸研究所,北京 100700)
目的 動態(tài)研究右歸丸對腎陽虛大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響。方法 90只SD大鼠隨機分成3組:正常組、模型組和右歸丸組。采用氫化可的松構建腎陽虛模型,造模第8天開始,藥物組用右歸丸湯劑灌胃,正常組和模型組用生理鹽水灌胃。分別在第15、23、30天處死動物,檢測血清中促甲狀腺素(TSH)、三碘甲腺原氨酸(T3)和四碘甲腺原氨酸(T4)的含量,檢測下丘腦勻漿中促甲狀腺激素釋放激素(TRH)的含量,并對垂體、甲狀腺質量進行稱重和組織切片HE染色觀察。結果 與正常組比較,腎陽虛模型組大鼠各期TRH、TSH、T3、T4的含量明顯降低(P<0.01);與模型組比較,右歸丸組各期下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素水平均有升高,其中垂體-甲狀腺軸激素水平升高明顯(P<0.01),右歸丸對垂體-甲狀腺軸TSH、T3、T4的動態(tài)調整程度不一。結論 在腎陽虛證動態(tài)發(fā)展過程中,下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素水平變化明顯且TSH、T3、T4是敏感指標。
右歸丸; 腎陽虛; 下丘腦-垂體-甲狀腺軸; 動態(tài)影響
腎陽虛證是中醫(yī)臨床上常見證候,主要表現(xiàn)為腰膝酸軟、畏寒肢冷、小便清長,男子陽痿早泄,女子宮寒不孕。中醫(yī)證是動態(tài)發(fā)展變化的,腎陽虛證也是動態(tài)變化的,有關腎陽虛證的動態(tài)研究在中西醫(yī)結合方面少有報道,前期課題組為深入認識腎陽虛本質,建立了腎陽虛證大鼠的動態(tài)模型,觀察大鼠垂體-甲狀腺軸的動態(tài)變化并初步分析了右歸丸對腎陽虛大鼠垂體-甲狀腺軸動態(tài)影響[1-3]。下丘腦是神經(jīng)-內分泌網(wǎng)絡的調節(jié)中樞,本實驗在前期研究的基礎上,將垂體-甲狀腺軸擴大為下丘腦-垂體-甲狀腺軸,進一步研究右歸丸對腎陽虛大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的動態(tài)影響。
1.1 實驗動物
SD大鼠,雄性,SPF級,體質量180~220 g,廣東省實驗動物中心提供,生產許可證號: SCXK(粵)2012-0125。
1.2 藥物與試劑
中藥復方右歸丸的各味藥材購自廣州采芝林藥店,經(jīng)廣東藥科大學中藥學院中藥資源系馬鴻雁副教授鑒定為正品;0.9%NaCl注射液(貴州天地藥業(yè)有限公司);氫化可的松注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司);無水乙醇(天津市百世化工有限公司);TRH、TSH、T3和T4試劑盒(北京華英生物技術研究所)。
2.1 腎陽虛模型的構建[4]
取SD雄性大鼠90只,隨機分為正常組、模型組和右歸丸組,每組各30只。正常組:后肢肌內注射0.9%NaCl溶液0.3 mL,1次/天,自由飲水飲食,連續(xù)29 d;模型組:將氫化可的松注射液充分混勻,后肢肌肉注射2.5 mg/100 g,每天1次,連續(xù)29 d,自由飲水飲食,復制腎陽虛大鼠動物模型;右歸丸組:氫化可的松注射方法和用量同模型組,第8天開始用右歸丸煎液灌胃,連續(xù)22 d,自由飲水飲食,正常對照組和模型組以生理鹽水灌胃。
2.2 體質量、組織稱重及組織切片HE染色觀察
各組大鼠第15、23、30天后稱質量;各期大鼠處死后取垂體、甲狀腺稱質量并進行組織切片HE染色觀察。
2.3 激素指標的測定
為了動態(tài)觀察,分別于第15、23、30天處死正常組、模型組和右歸丸組大鼠各10只,股動脈取血并分離血清,斷頭取下丘腦并勻漿,用放射免疫分析法分別測定勻漿樣品中TRH和血清樣品中TSH 、T3、T4的含量,按照放免試劑盒操作說明書操作。
2.4 統(tǒng)計學處理
3.1 各組一般情況比較
模型組和右歸丸組不同時期動物出現(xiàn)不同程度的體質量減輕、活動遲鈍、喜扎堆、畏寒喜暖、體毛枯萎、飲食飲水減少等。模型組第15、23、30天癥狀逐步加重,采食量和飲水量增加,相比之下右歸丸組大鼠毛發(fā)有光澤,活動增加,反應較靈敏,但總體活動能力與正常組比較仍有差距。
3.2 各組大鼠垂體、甲狀腺質量的動態(tài)變化
隨著造模時間的延長,模型組和右歸丸組SD大鼠甲狀腺質量明顯減輕,與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),垂體質量和其他組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。
表1 各組大鼠垂體、甲狀腺質量的動態(tài)變化
組別垂體質量/mg甲狀腺質量/mg正常組第15天0.011±0.00140.254±0.0179第23天0.011±0.00030.258±0.0179第30天0.011±0.00130.265±0.0251模型組第15天0.010±0.00110.204±0.0197*第23天0.012±0.00100.217±0.0231*第30天0.010±0.00040.213±0.0247*右歸丸組第15天0.009±0.00180.206±0.0195*▲第23天0.013±0.00160.215±0.0238*第30天0.011±0.00140.208±0.0204*
與正常組比較:*P<0.01; 與模型組第23天比較:▲P<0.01。
3.3 組織形態(tài)學結果
3組第15、23天垂體及甲狀腺的組織形態(tài)學變化不明顯,第30天可以看出某些變化趨勢,見圖1、圖2。相比于正常組的垂體,模型組垂體組織嗜酸性細胞增多,嗜堿性細胞減少,并有空泡變性;右歸丸組垂體組織細胞界限還不是很清晰,但已接近正常組,嗜酸性細胞有所增多,嗜堿性細胞相對模型組有所減少(圖1)。模型組甲狀腺組織中甲狀腺數(shù)量減少,且濾泡變得不清晰,充滿膠質,且數(shù)量也有所減少,濾泡大小不等;右歸丸組甲狀腺細胞數(shù)量有所增加,濾泡結構正常,界限較為整齊,與正常組較為接近(圖2)。
A.正常組; B.模型組; C.右歸丸組。
圖1 第30天各組垂體組織形態(tài)學觀察(100×)
Figure 1 Histomorphology of rat pituitary gland on day 30 (100×)
A.正常組; B. 模型組; C. 右歸丸組。
圖2 第30天各組甲狀腺組織形態(tài)學觀察(100×)
Figure 2 Histomorphology of rat thyroid gland on day 30 (100×)
提示腎陽虛導致大鼠垂體和甲狀腺細胞結構發(fā)生變化,右歸丸治療腎陽虛后其垂體和甲狀腺細胞結構得到了很大改善,但還不能完全達到正常水平。
3.4 激素指標測定結果
3.4.1 腎陽虛造模情況分析 與正常組比較,模型組SD大鼠各期TRH 、TSH、T3、T4水平均明顯下降(P<0.01),說明腎陽虛證造模成功;與模型組第23天比較,模型組第30天TSH、T3、T4水平比較均明顯下降(P<0.01),而TRH水平無明顯下降,見表3,說明腎陽虛在發(fā)展過程中垂體-甲狀腺軸的功能逐步減退而下丘腦功能則變化不明顯。
3.4.2 右歸丸對下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能調節(jié)的動態(tài)分析 與模型組各時期比較,右歸丸組第15、23、30天TSH、T3、T4水平升高明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與垂體結構和甲狀腺結構恢復的程度較為一致,說明右歸丸對腎陽虛SD大鼠垂體-甲狀腺軸的功能有顯著的調整作用,而TRH差異沒有統(tǒng)計學意義,表明右歸丸對下丘腦部位調節(jié)不明顯。見表2。
表2 第15、23、30天SD大鼠血清下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素TRH、TSH、T3、T4水平的動態(tài)變化
與正常組比較:*P<0.01; 與模型組第15天比較:△P<0.01; 與模型組第23天比較:▲P<0.01; 與模型組第30天比較:□P<0.01; 與右歸丸組第15天比較:■P<0.01; 與右歸丸組第23天比較:○P<0.01。
本實驗模型組大鼠各期下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素指標值具有顯著性變化,表明腎陽虛大鼠模型構建成功。右歸丸組SD大鼠各期下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素指標值的不一致性波動,提示右歸丸調節(jié)腎陽虛證是一個相對緩慢的動態(tài)過程。
由于應激的調控中心位于中樞神經(jīng)系統(tǒng),當機體受到各種強烈因素刺激時,可激活神經(jīng)內分泌系統(tǒng)[5]。越來越多的證據(jù)表明[6-8],下丘腦-垂體-甲狀腺軸為急性應激反應的神經(jīng)內分泌系統(tǒng)。近來發(fā)現(xiàn)重復的應激刺激可減少甲狀腺激素的分泌,但下丘腦TRH的分泌未見改變[9]。這或許可以部分解釋本實驗后期出現(xiàn)的TRH與TSH、T3、T4波動幅度不一致、下丘腦 TRH 的分泌沒有顯著性改變的現(xiàn)象,本實驗后期是采用邊造模邊給藥的方式,人為的重復刺激使反饋抑制作用增強,造成了下丘腦TRH的分泌未見明顯改變。
本研究結果顯示,模型組大鼠甲狀腺質量變化明顯,而垂體質量變化不明顯,提示靶腺層先受到影響,垂體層所受影響變化不明顯抑或延遲;同時從甲狀腺和垂體晚期才出現(xiàn)較明顯的形態(tài)學變化提示形態(tài)學變化相比血清激素不敏感或延遲。
綜上研究,在腎陽虛證動態(tài)發(fā)展過程中,下丘腦-垂體-甲狀腺軸激素水平變化明顯,TSH、T3、T4為敏感指標。右歸丸可以有效地調節(jié)腎陽虛,但下丘腦部位激素的作用機制尚不明確,有待于進一步深入研究。
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(責任編輯:幸建華)
Dynamic influence of Yougui pill on hypothalamic-pituitary-thyroid axis in kidney-yang deficiency rats
CHEN Lizhen1,3,WANG Xiufeng2,MA Na2,LIAO Chengbin2,LIU Ji1,LAI Bingrong1,HUANG Muyang1,CHEN Shulong1
(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.BasicSchoolofGuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 3.InstituteofAcupunctureandMoxibustion,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)
Objective To study the dynamic influence of Yougui pill (YP) on hypothalamic-pituitary-thyroid axis in kidney-yang deficiency rats. Methods 90 SD rats were randomly divided into three groups,including the normal group,the model group and YP group. The model of rat kidney-yang deficiency was established by intramuscular injection of hydrocortisone. Rats in the YP group were administrated intragastrically with YP after 8 days,and rats in the normal and model groups were given normal saline. Animals in all groups were sacrificed on 15,23 and 30 days,the levels of TRH,TSH,T3and T4were measured and the pituitary and thyroid glands were removed,weighed and sectioned for H&E staining. Results Compared with the normal group,the levels of TRH,TSH,T3and T4were decreased significantly in the model group (P<0.01). The hormone levels of hypothalamus-ituitary-hyroid axis were increased in model rats when treated with YP,in which the pituitary-thyroid hormone levels were enhanced significantly (P<0.01) with the dynamic difference. Conclusion During dynamic development of kidney-yang deficiency syndrome,the hormone levels of hypothalamus-pituitary-thyroid axis obviously changes and TSH,T3and T4are sensitive indicators.
Yougui pill; kidney-yang deficiency; hypothalamic-pituitary-thyroid axis; dynamic effects
2016-07-12
國家自然科學基金項目(81403153)
陳李圳(1992—),男,2016級碩士研究生,主要從事中西醫(yī)結合針灸與藥物機制研究,Email:964328383@qq.com;通信作者:王秀鳳(1980—),女,副教授,碩士生導師,主要從事生物系統(tǒng)與數(shù)據(jù)挖掘研究,Email:wxfsnow8012@126.com。
時間:2016-11-29 11:15
http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20161129.1115.009.html
R285.5
A
1006-8783(2016)06-0771-04
10.16809/j.cnki.1006-8783.2016071201