王玉鵬，黃順旺，陳師農(nóng)，孫 備，李玲芝，宋少江

（1．武警安徽省總隊醫(yī)院，安徽 合肥 230041； 2．安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230022； 3．沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110016）

白柏顆粒質(zhì)量標準初步研究

王玉鵬1，黃順旺2，3，陳師農(nóng)2，孫 備2，李玲芝3，宋少江3

（1．武警安徽省總隊醫(yī)院，安徽 合肥 230041； 2．安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230022； 3．沈陽藥科大學中藥學院，遼寧 沈陽 110016）

目的 建立白柏顆粒質(zhì)量標準。方法 采用薄層色譜法對處方中的白術、黨參、茯苓、黃芪進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對樣品中的甘草酸進行含量測定。結(jié)果 薄層鑒別的分離度好，專屬性強，陰性對照無干擾；含量測定甘草酸質(zhì)量濃度（以甘草酸單銨鹽計）在6～60 g／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好（r＝0．999 9），平均回收率為98．89%（n＝6），RSD為0．66%。結(jié)論 所建立的方法準確、可靠、專屬性強，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

白柏顆粒；甘草酸；薄層色譜法；高效液相色譜法

白柏顆粒是由黃芪、黨參、茯苓、白術、山藥、當歸、地榆、小薊、大薊、藕節(jié)、炙甘草、烏梅、麥冬、枸杞子、續(xù)斷、桑寄生、柏子仁、遠志18味中藥組方。其原劑型白柏膠囊具有補氣固沖、清熱止血的功效，適用于氣虛血熱型月經(jīng)過多[1]。為了更好地控制白柏顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，本試驗對方中黃芪、黨參、茯苓、白術4味藥材進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜（HPLC）法對方中炙甘草中的活性成分甘草酸（C42H62O16，以甘草酸單銨鹽計）進行含量測定，為該建立制劑完善的質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

硅膠G板（100 mm×100 mm，供薄層層析用，青島海洋化工廠分廠）；高效液相色譜儀（日本島津公司）：紫外檢測器 SPD－10Avp；LC－10ATvp型溶劑輸送泵；N－2000雙通道色譜工作站；AR1140型電子天平（上海加惠儀器儀表有限公司）；KQ－250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；GZX－9140MBE型干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械廠）；HHS型電熱數(shù)顯水浴鍋（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）。甘草酸單銨鹽（批號為110731－201116），黃芪甲苷（批號為0781－200109，供含量測定用），黨參（批號為121057－200805），茯苓（批號為120925－200407），白術（批號為925－9303），供薄層鑒別用，均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈、冰醋酸為色譜純，水為超純水；其余試劑均為分析純；白柏顆粒（批號分別為140901，140902，140903）及缺味陰性樣品由安徽省食品藥品檢驗研究院科研辦自制。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜鑒別

黨參[1－2]：取本品8 g，研細，加正丁醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；取除黨參以外的藥材按處方工藝制成陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；另取黨參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－醋酸（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾，見圖1 A。

茯苓[2]：取本品8 g，研細，加乙醚50 mL，浸泡24 h，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液；取除茯苓以外的藥材按處方工藝制成陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；另取茯苓對照藥材0．5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）－丙酮（80∶20）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾，見圖1 B。

白術[2－3]：取本品8 g，研細，加正己烷25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液；取除白術以外的藥材按處方工藝制成陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；另取白術對照藥材0．5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各 2 μL，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（40∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾，見圖1 C。

黃芪[2－3]：取本品8 g，研細，加無水乙醇25 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液置已處理好的中性氧化鋁柱（100～140目，15 g，內(nèi)徑10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脫，收集洗脫液，置水浴蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌2次，棄去水液，正丁醇液水浴蒸干，殘渣加甲醇0．5 mL使溶解，作為供試品溶液；取除黃芪以外的藥材按處方工藝制成陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水（15∶15∶10∶5）為展開劑（10℃以下放置后的下層溶液），展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（1→10），105℃加熱數(shù)分鐘，至斑點顯色清晰后，置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，見圖1 D。

2．2 甘草酸含量測定[2，4－5]

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Cosmosil5 C18－MS－Ⅱ柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－2%冰醋酸溶液（40∶60）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：250 nm，柱溫：35℃，進樣量10 μL。理論板數(shù)以甘草酸單銨鹽峰計不低于2 000。

2．2．2 溶液制備

精密稱取甘草酸單銨鹽對照品6 mg，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取1 mL，移至10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度為12 μg／mL的對照品溶液；取本品適量，研細，精密稱取1．5 g，置50 mL容量瓶中，加入流動相適量，超聲處理30 min，放冷，再稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；按處方組成，取除炙甘草外的其余藥材，按制備工藝要求，制成缺炙甘草的樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 薄層色譜圖

2．2．3 方法學考察

干擾試驗：在此色譜條件下，將甘草酸單銨鹽對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液分別進樣，測定。結(jié)果供試品溶液色譜中，甘草酸單銨鹽的色譜峰與相鄰色譜峰達到基線分離，陰性對照無干擾，見圖2。

標準曲線制備：精密稱取甘草酸單銨鹽對照品6 mg，置50 mL容量瓶中，加流動相使溶解，并稀釋至刻度，精密吸取此溶液0．5，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，并以對照品溶液峰面積（Y）對質(zhì)量濃度（X，μg／mL）進行線性回歸，得回歸方程Y＝13 235 X－809．13，r＝0．999 9（n＝6）。結(jié)果表明，甘草酸單銨鹽質(zhì)量濃度在6～60 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一甘草酸單銨鹽對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，計錄甘草酸單銨鹽的峰面積。結(jié)果的 RSD為0．87%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批（批號為140901）白柏顆粒樣品，按擬訂方法制備6份供試品溶液，各精密吸取10 μL，依法進樣測定甘草酸單銨鹽的含量。結(jié)果的RSD為0．99%（n＝6），表明方法重復性良好。

圖2 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，8 h時進樣10 μL，測定甘草酸單銨鹽的峰面積。結(jié)果的 RSD為1．08%（n＝6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已知含量（0．878 5 mg／g）的同一批（140901）白柏顆粒6份，每份約1．0 g，精密稱定，分別加入甘草酸單銨鹽對照品溶液（0．085 12 mg／mL）10 mL，按擬訂方法制備供試品溶液，依法測定甘草酸單銨鹽的含量。結(jié)果見表1。

表1 甘草酸單銨鹽加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2．2．3 樣品含量測定

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，依法進樣測定，并按外標法以峰面積計算3批樣品的含量。結(jié)果見表2。

表2 白柏顆粒中甘草酸單銨鹽含量測定結(jié)果（mg／g，n＝2）

3 討論

3．1 薄層鑒別試驗

原劑型白柏膠囊標準收載了當歸、麥冬、黨參3味藥材薄層鑒別項，在本制劑白柏顆粒薄層鑒別研究中，參照文獻[1－3]，對君藥黃芪、黨參，臣藥茯苓、白術進行了鑒別，分離效果及重復性較好，缺味陰性對照試驗未見干擾。同時，還分別對處方中山藥、當歸、地榆、小薊、大薊、麥冬等也進行了薄層鑒別試驗，結(jié)果因陰性對照試驗有干擾或斑點不明顯，有待進一步探討。

3．2 含量測定指標的選擇

原制劑白柏膠囊含量測定以阿魏酸為對照品，每粒含當歸以阿魏酸計，不得少于0．40 μg?？紤]到阿魏酸含量偏低，在本研究中采用HPLC法對處方中君藥黃芪中黃芪甲苷和黨參中黨參炔苷含量測定方法進行了研究。結(jié)果在HPLC－ELSD條件下黃芪甲苷與其他峰均未得到較好分離；黨參炔苷性質(zhì)不穩(wěn)定，且紫外掃描有多個吸收峰，不宜作為考核指標。甘草酸 （C42H62O16）為炙甘草的有效成分，在本制劑中含量穩(wěn)定，可用作本品的定量指標成分。

3．3 含量控制

參照[2010年版《中國藥典（一部）》炙甘草項下含量測定]甘草酸的含量限度，以及不同批次炙甘草含量的差異，結(jié)合本制劑試驗數(shù)據(jù)，暫訂本品的含量限度為每袋8 g，含炙甘草以甘草酸單銨鹽計，應不得少于5．5 mg。

[1]WS－10452（ZD－0452）－2002．國家中成藥標準匯編中成藥地方標準上升為國家標準：婦科合成[S]．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：81，95，224，264，283．

[3]國家藥典委員會．中藥薄層色譜彩色圖集[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：37，66．

[4]曲 佳，張 茉，周 軍．HPLC法測定通脈養(yǎng)心丸中甘草酸的含量[J]．天津藥學，2009，21（5）：3－5．

[5]蔡翠芳，冀小君， 幫琴，等．甘草飲片中甘草苷和甘草酸含量分析[J]．中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3（21）：3－5．

Quality Standard of Baibai Granules

Wang Yupeng1，Huang Shunwang2，3，Chen Shinong2，Sun Bei2，Li Lingzhi3，Song Shaojiang3

（1．Anhui Provincial Corps Hospital of Chinese People′s Armed Police Forces，Hefei，Anhui，China 230041； 2．Anhui Institute of Food and Drug Control，Hefei，Anhui，China 230022； 3．School of Chinese Materia Medicia，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang，Liaoning，China 110016) Abstract:Objective To establish the quality standards of Baibai Granules．M ethods The atractylodes macrocephala，codonopsis pilosula，poriacocos，astragalus membranaceus were indentified by TLC，and the content of glycyrrhizic acid was determined by HPLC．Results The characteristic identification by TLC was distinct and highly specific．Glycyrrhizic acid showed a good liner relationship at the range of 6－60 μg／mL(r＝0．999 9)，and the average recovery rate was 98．89% with RSD of 0．66%（n＝6）．Conclusion The method is reliable，accurate and specific，which can be used for the quality control of the preparation．

Baibai Granules；glycyrrhizic acid；TLC；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0072－03

王玉鵬，副主任藥師，研究方向為醫(yī)院臨床藥學，（電話）0551－64637553；黃順旺，男，副主任藥師，研究方向為新藥，本文通訊作者，（電話）0551－63662063（電子信箱）huangsw5503＠163．com。

2015－07－05)